摘要：目的 探討臨床檢驗(yàn)標(biāo)本中病原微生物的DNA/RNA快速提取方法。方法 分別采取柱式提取法、煮沸法、快速法對(duì)病原微生物DNA/RNA進(jìn)行提取，對(duì)比三種方法的提取效果。結(jié)果 快速法提取病原微生物DNA/RNA提取時(shí)間只需要4min，而柱式提取法與煮沸法在提取時(shí)間上分別為55min、35min。相較于柱式提取法與煮沸法，快速法在提取病原微生物DNA/RNA的提取時(shí)間上具有明顯優(yōu)勢(shì)，三種方法存在顯著差異（P<0.05），統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義。三種方法提取病原微生物DNA/RNA的效果上，無顯著差異（P>0.05），無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 快速法提取病原微生物DNA/RNA提取效果良好，值得推廣。

關(guān)鍵詞：皮瓣移植術(shù)；嚴(yán)重外傷；護(hù)理療效

實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)是現(xiàn)階段全球所一致公認(rèn)的一種靈敏高、具有很強(qiáng)的特異、重復(fù)性優(yōu)秀的一種檢測(cè)形式，如今，已經(jīng)大范圍應(yīng)用在了一些突發(fā)公共衛(wèi)生應(yīng)急處理機(jī)制對(duì)于病原微生物的檢測(cè)中來。同樣，無法否認(rèn)的是，熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)的檢測(cè)的實(shí)際速度和\"應(yīng)急\"所需要具備的速度始終存在不小的距離。怎樣提升熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)速度是如今十分需要徹底解決的一項(xiàng)技術(shù)問題。

1資料與方法

1.1一般資料 病原微生物采用白斑綜合癥病毒（White spot syndrome virus）、副溶血性弧菌。柱式提取法所使用的試劑為QIARNAExtractionMiniKit（74104）；煮沸法提取法試劑使用國(guó)內(nèi)生物公司自行生產(chǎn)；快速法所采用的試劑主要成分有：0.001% SDS（w /v）、0.1%B-疏基乙醇（v /v）以及 0.9% NaCl （w /v）[1]。

1.2方法 DNA/RNA提取流程：柱式提取法與煮沸法皆通過各自的試劑解釋說明書展開?？焖偬崛》ǜ鶕?jù)以下步驟進(jìn)行提?。菏紫?，把糞便或是食品進(jìn)行懸液1ml置進(jìn)115 ml的eppendorf管中，利用15000 rpm的速度實(shí)施離心處理1min，之后，再放置100Lu1提取劑進(jìn)行混勻，放入沸水里3min以15000 rpm速度再行離心3min，上清即DNA溶液[2]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 研究中所得到的相關(guān)數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行處理分析，連續(xù)性變量以（x±s）表示，組aa間對(duì)比應(yīng)用兩獨(dú)立樣本計(jì)量資料采用t值檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2值檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

見表1，三種方法對(duì)白斑綜合癥病毒的提取效果比無顯著差距（P>0.05），統(tǒng)計(jì)學(xué)無意義。

注：F=1.21 P>0.05

見表2，三種方法對(duì)副溶血性弧菌的提取效果比無顯著差距（P>0.05），統(tǒng)計(jì)學(xué)無意義。

注：F=4.33 P>0.05

3 討論

現(xiàn)階段，有許多國(guó)內(nèi)的專加學(xué)者普遍采用的擇取方式為通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的擴(kuò)增產(chǎn)物于電泳及溴化乙錠染色在紫外燈下，再按照其光線亮度的程度水平來判定不同的提取形式在提取DNA/RNA時(shí)的提取效果[3]。但經(jīng)過仔細(xì)論證之后可以得出，普通的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)重復(fù)水平相對(duì)較差，而相同的一個(gè)樣本在變異系數(shù)方面能夠達(dá)到10%以上；須知，普通聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物應(yīng)當(dāng)是其終極的濃度，而并非是最開始的濃度。

國(guó)外學(xué)者一致肯定擇取熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)來評(píng)判不同方法的DNA/RNA的提取效果具備下述一些優(yōu)點(diǎn)：①由于具備重復(fù)性，故而可以良好的清除存在大的變異系數(shù)；②該方法由于靈敏程度可靠，能夠精確地測(cè)定的模板DNA/RAN之間數(shù)量上差異，即便是極其細(xì)微的；第三，ct值所表示的為模板DNA/RAN最初階段的濃度，能夠十分客觀地體現(xiàn)提取液中模板DNA/RNA的具體數(shù)量和其質(zhì)量。通過三種方法各自對(duì)同一種病原微生物展開DNA/RNA提取，三種方法各自提取3管。汲取每管DNA/RNA提取液2ul展開實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，選擇熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的ct值，當(dāng)做提取效果的指標(biāo)[4]。

一旦當(dāng)傳染病疫情無預(yù)兆的迅速爆發(fā)抑或是出現(xiàn)集體食物中毒等突發(fā)性公共衛(wèi)生事件發(fā)生時(shí)，無論是從疾控中心再到救治醫(yī)院，媒體與民眾、衛(wèi)生部門與政府，第一時(shí)間需要獲得的首要信息便是事故所形成的原因與預(yù)后狀況。故而，精確迅速的開始診斷技術(shù)的應(yīng)用對(duì)解決突發(fā)公共衛(wèi)生事件與平復(fù)民眾心緒，維護(hù)社會(huì)和諧穩(wěn)定有著十分重大的現(xiàn)實(shí)意義。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)屬于諸多種類中的診斷技術(shù)里最有發(fā)展?jié)摿Φ囊豁?xiàng)技術(shù)，無論是在SARS期間，還是禽流感時(shí)期，抑或是H1N1流感等在應(yīng)急快速檢測(cè)診斷中都發(fā)揮了十分關(guān)鍵的重要[5]。而研究證明，熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)病原微生物DNA/RAN，在診斷時(shí)間上取得了極大地提升，值得推廣使用。

參考文獻(xiàn)：

[1]趙仲麟，李淑英，李燕.水中病原微生物分子檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J].生物技術(shù)通報(bào)，2012，（01）：41-45.

[2]程曦，田彩娟，李愛寧.植物與病原微生物互作分子基礎(chǔ)的研究進(jìn)展[J].遺傳，2012，（02）：134-144.

[3]王一嫻，葉尊忠，斯城燕.適配體生物傳感器在病原微生物檢測(cè)中的應(yīng)用[J].分析化學(xué)（IF 0.769），2012，（04）：634-642.

[4]周晶，曾慶濤，劉銓義.一種適用于棉花種子的DNA快速提取方法[J].作物雜志，2014，（02）：31-33.

[5]戴軍，汪海，朱莉.1種適用于轉(zhuǎn)基因玉米PCR檢測(cè)的DNA快速提取方法[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，（12）：3494-3496.

編輯/王海靜