【摘要】目的 通過(guò)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用免疫技術(shù)分析法對(duì)血吸蟲(chóng)病開(kāi)展血清學(xué)檢測(cè)并與超聲檢查比對(duì)，以探討其臨床意義。

【關(guān)鍵詞】慢性血吸蟲(chóng)；血清學(xué)檢測(cè)；B超檢查；意義探討

【中圖分類(lèi)號(hào)】R4 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1671-8801（2014）02-0104-02

血吸蟲(chóng)病（schistosomiasis）是一種嚴(yán)重危害我國(guó)居民身體健康、影響社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重大傳染病。據(jù)估計(jì)，全球有78個(gè)國(guó)家和地區(qū)有血吸蟲(chóng)病的流行，受威脅人口約5-6億，感染血吸蟲(chóng)病者2.42億[1]。我國(guó)為日本血吸蟲(chóng)病流行區(qū)，是日本血吸蟲(chóng)病4個(gè)流行國(guó)中最嚴(yán)重的國(guó)家，也是全球血吸蟲(chóng)病危害最嚴(yán)重的4個(gè)國(guó)家之一。

湖南省歷史上是血吸蟲(chóng)病嚴(yán)重流行區(qū)，上世紀(jì)六、七十年代對(duì)血吸蟲(chóng)病患者進(jìn)行了大規(guī)模的藥物治療，這批患者目前大多年逾花甲。如何診斷這些患者血吸蟲(chóng)病病情，成為血吸蟲(chóng)病防治工作的核心[2]。一直以來(lái)臨床診斷中將肝臟組織活檢作為判斷肝纖維化程度的“金標(biāo)準(zhǔn)”， 但其具有創(chuàng)傷性， 臨床上難以將其作為常規(guī)檢查[3]。而血清學(xué)檢測(cè)工作量小、依從性高等優(yōu)點(diǎn)，廣泛用于血吸蟲(chóng)病檢查，是我國(guó)當(dāng)前血吸蟲(chóng)病輔助診斷的重要手段之一[4-7]。B超診斷起源于本世紀(jì)40年代，血吸蟲(chóng)病的超聲診斷發(fā)展史也大致相同。常用于超聲診斷日本血吸蟲(chóng)病的指標(biāo)有：肝實(shí)質(zhì)回聲的改變、肝脾大小的測(cè)定、門(mén)靜脈系統(tǒng)的測(cè)量。超聲檢查是非損傷性診斷方法，操作簡(jiǎn)便，能準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)肝臟血吸蟲(chóng)病的病理改變并可評(píng)估病情的嚴(yán)重程度。在現(xiàn)場(chǎng)短期內(nèi)可檢查大量人群，立即可獲結(jié)果，使用統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)，具有很強(qiáng)的實(shí)用性[8]。本文旨在通過(guò)實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)檢測(cè)與超聲檢查的比對(duì)，以探討其臨床意義。

1 免疫分析學(xué)方法

1.1 皮內(nèi)試驗(yàn)（ID）是一種檢測(cè)受試者對(duì)血吸蟲(chóng)抗原的速發(fā)型超敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)。若受試者曾經(jīng)感染過(guò)血吸蟲(chóng)，那么機(jī)體內(nèi)則有相應(yīng)的抗體（皮膚致敏性抗體 IgE），當(dāng)受試者皮內(nèi)注射少量血吸蟲(chóng)抗原時(shí)，抗原與皮內(nèi)肥大細(xì)胞表面的相應(yīng)抗體結(jié)合，導(dǎo)致宿主局部毛細(xì)血管擴(kuò)張，血管通透性增高，產(chǎn)生局部丘疹現(xiàn)象，即為陽(yáng)性。若未曾感染過(guò)血吸蟲(chóng)，則注射后不會(huì)引起局部紅腫現(xiàn)象，即為陰性。ID便、快速、通常用于現(xiàn)場(chǎng)篩選可疑病例，與糞檢蟲(chóng)卵陽(yáng)性的符合率為90%左右，但可出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性反應(yīng)，與其他吸蟲(chóng)病可產(chǎn)生較高的交叉反應(yīng)；并且病人治愈后多年仍可為陽(yáng)性反應(yīng)[9]。故從20世紀(jì)90年代開(kāi)始ID已經(jīng)很少現(xiàn)場(chǎng)使用。

1.2 間接凝集實(shí)驗(yàn)（IHA）

是將可溶性抗原（抗體）先吸附于適當(dāng)大小的顆粒性載體（紅細(xì)胞）的表面作為試劑，來(lái)檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗體或抗原的一種血清學(xué)方法。將一系列倍比稀釋血清加到血凝板上，并分別加入致敏細(xì)胞懸液，振蕩，靜置。以出現(xiàn)凝集反應(yīng)的最高稀釋度為陽(yáng)性反應(yīng)終點(diǎn)。IHA大致可分為4類(lèi)：（1）IHA用抗原致敏紅細(xì)胞以檢測(cè)樣品中的相應(yīng)抗原；（2）反向間接凝集試驗(yàn)用特異性抗體致敏紅細(xì)胞，以檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗體；（3）間接血凝抑制試驗(yàn)；（4）反向間接血凝抑制試驗(yàn)。IHA操作簡(jiǎn)捷，快速有效，并且具有高度的敏感性和特異性，在臨床檢驗(yàn)中被廣泛應(yīng)用。但其診斷抗原的穩(wěn)定性較差，交叉反應(yīng)率稍高，且致敏紅細(xì)胞存在著批間差異，反應(yīng)易受客觀(guān)因素的影響[10] ，故仍待進(jìn)一步研究。

1.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。?；燮嫉萚11]通過(guò)診斷試驗(yàn)Meta分析，綜合評(píng)價(jià)間接血凝集試驗(yàn)（IHA）和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）對(duì)日本血吸蟲(chóng)病的診斷效果。結(jié)果顯示IHA法的綜合靈敏度為0.721，診斷優(yōu)勢(shì)比為6.686。ELISA法的綜合靈敏度為0.633，診斷優(yōu)勢(shì)比為2.963。結(jié)論兩種血清學(xué)診斷試驗(yàn)（IHA和ELISA）對(duì)日本血吸蟲(chóng)病的診斷準(zhǔn)確度中等，IHA略高于ELISA，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩種診斷方法對(duì)日本血吸蟲(chóng)病均具備一定的診斷價(jià)值。

1.4 膠體染料試紙條法（DDIA）血吸蟲(chóng)病患者血清中存在的抗血吸蟲(chóng)抗體（IgG）與膠體染料標(biāo)記的日本血吸蟲(chóng)可溶性蟲(chóng)卵抗原（SEA）相結(jié)合，形成染料標(biāo)記的抗原—抗體復(fù)合物，這復(fù)合物通過(guò)層析技術(shù)與固定在硝酸纖維膜上的抗人IgG（二抗）相結(jié)合，形成可見(jiàn)的染色帶，即為陽(yáng)性反應(yīng)。DDIA是近年研制的用染料標(biāo)記的日本血吸蟲(chóng)可溶性蟲(chóng)卵抗原檢測(cè)日本血吸蟲(chóng)病人血清抗體的方法，其操作簡(jiǎn)單、快速，價(jià)格低廉，不需要專(zhuān)門(mén)設(shè)備，并且具有較高的敏感性和特異性，因此，該法適合進(jìn)行大規(guī)模的血吸蟲(chóng)病人群普查的篩選.[12]

1.5 其他免疫檢測(cè)方法 其他諸如免疫印跡技術(shù)、間接熒光抗體試驗(yàn)（IFAT）、環(huán)卵沉淀試驗(yàn)（COPT）等多種針對(duì)血吸蟲(chóng)病患者的血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，已日益成為主要的診斷手段[13]。

2 B超診斷

2.1 B超檢查方法 采用超聲顯像儀， 探頭頻率3. 5 MHz， 患者于空腹時(shí)平臥下進(jìn)行肝、膽、脾的常規(guī)檢查。

2.2 B超診斷標(biāo)準(zhǔn)：慢性血吸蟲(chóng)病參照1990 年10 月開(kāi)羅召開(kāi)的由世界衛(wèi)生組織熱病防治司（WHO/ CT D） 和放射醫(yī)學(xué)處（ RAD） 以及瑞士熱帶病研究所、開(kāi)羅大學(xué)醫(yī)學(xué)院聯(lián)合主辦的TDR 血吸蟲(chóng)病超聲診斷咨詢(xún)會(huì)議制定標(biāo)準(zhǔn)[14] 。

2.3 血吸蟲(chóng)病侵入肝臟的主要途徑是4尾蚴侵入人體。到達(dá)肺臟后.可穿出肺血管壁或穿透肺組織和橫膈而入肝.從而侵入門(mén)靜脈系統(tǒng)B另一條途徑可通過(guò)肺血管經(jīng)肺靜脈入大循環(huán)經(jīng)腸系膜靜脈到達(dá)門(mén)靜脈系統(tǒng)。寄生的血吸蟲(chóng)卵可隨血流沉著于肝臟，引起肝組織損害。袁平[15] 分析已確診為慢性血吸蟲(chóng)病的214例患者中。肝脾系統(tǒng)顯示有變化者236例.占總?cè)藬?shù)95.5%。

2.3.1 肝臟表現(xiàn)為肝左葉增大105例，占44.4.%，左右葉增大者37例，占15.6%。222例有肝內(nèi)回聲增粗、不均.呈網(wǎng)絡(luò)狀改變。（圖1）

LPV： 擴(kuò)張門(mén)靜脈矢狀部； LL： 肝左葉； ASC： 肝前腹水； KL ： 右肝， 腫大， 門(mén)靜脈增寬， 右葉縮小， 進(jìn)肝面光帶不光滑， 呈“鋸齒”狀

圖1 血吸蟲(chóng)病肝臟超聲表現(xiàn)

2.3.2 脾門(mén)處4脾靜脈增寬內(nèi)徑大于0.8cm者29例.占12.2%，門(mén)靜脈內(nèi)徑增寬大于1.4cm者29例，占12.2%。（見(jiàn)圖2）

2.3.3 脾臟4顯示脾大者97例.占41.4%，.脾切面內(nèi)徑在4cm以上（見(jiàn)圖2）

SP： 腫大脾臟； SPV： 脾靜脈； ASC： 腹水

圖2 血吸蟲(chóng)病脾臟超聲表現(xiàn)

圖1.2 見(jiàn)參考文獻(xiàn)[15]

2.4 趙曉貢[16]等對(duì)該地區(qū)已確診為慢性血吸蟲(chóng)病167 例和晚期血吸蟲(chóng)?。?晚血） 62 例患者作腹部肝、膽、脾臟B 超檢查，發(fā)現(xiàn)日本血吸蟲(chóng)病是以肝實(shí)質(zhì)損害為主要特征的改變， 呈現(xiàn)的損傷應(yīng)考慮為肝組織特有的纖維化所致。其圖像表現(xiàn)為光帶、光斑、呈網(wǎng)狀分布，似“魚(yú)鱗”、“蛛網(wǎng)”、“龜背”狀特征性圖像； 膽囊壁厚度無(wú)明顯變化。

3 探討

近年來(lái)，病原學(xué)診斷技術(shù)的改進(jìn)，B型超聲波輔助診斷方法漸趨標(biāo)準(zhǔn)化，核酸探針和PCR技術(shù)的引入，推動(dòng)了血吸蟲(chóng)病診斷學(xué)的發(fā)展，但仍難以滿(mǎn)足當(dāng)前血吸蟲(chóng)病防治的需要。免疫學(xué)診斷技術(shù)因有良好的敏感性，特異性和實(shí)用性，成為當(dāng)前血吸蟲(chóng)病的常用診斷手段。朱劍君等對(duì)晚期血吸蟲(chóng)病患者的肝組織學(xué)與肝纖維化指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn)， 晚期血吸蟲(chóng)病肝組織病理學(xué)纖維化分級(jí)與B 超肝纖維化分級(jí)基本一致。因此，超聲診斷慢性血吸蟲(chóng)病具有很好的效果， 值得推廣應(yīng)用。

雖然慢性血吸蟲(chóng)血清檢測(cè)指標(biāo)對(duì)診斷血吸蟲(chóng)病具有較高的診斷價(jià)值，但是每一種批號(hào)的檢測(cè)試劑的靈敏性和特異性都有一定限度，因此， 在難以開(kāi)展肝活檢的醫(yī)療機(jī)構(gòu)， 可聯(lián)合開(kāi)展血清學(xué)指標(biāo)與B 超檢查， 作為診斷歷史血吸蟲(chóng)病肝纖維化重要的非創(chuàng)傷性檢查手段。以便更客觀(guān)、準(zhǔn)確地反映肝纖維化的程度， 提高肝纖維化診斷的準(zhǔn)確性， 更好地指導(dǎo)臨床的預(yù)防和治療。

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