摘要:
目的:比較分析SBE法(半仿生提取法)、AE法(醇提取法)制備的黃連解毒湯提取液的指紋圖譜,以驗(yàn)證黃連解毒湯的最佳提取方法。方法:以RP-HPLC法測定SBE法、AE法制備的相對分子質(zhì)量小于等于1000的黃連解毒湯提取液的指紋圖譜。結(jié)果: SBE法制備的黃連解毒湯提取液的結(jié)果大于AE法制備的黃連解毒湯提取液的結(jié)果。結(jié)論:SBE法制備的相對分子質(zhì)量小于等于1000的黃連解毒湯提取液中的成分最多。
關(guān)鍵詞:SBE法;AE法;黃連解毒湯;提取液;指紋圖譜
【中圖分類號】
R195 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】1002-3763(2014)08-0269-02
黃連解毒湯出自《外臺秘要》,組方由黃柏、黃芩、黃連、梔子組成,有瀉火、解毒、清熱之功效[1]。經(jīng)現(xiàn)代研究證實(shí),其藥理活性具有抗炎、抑菌、抗腦缺血缺氧、抗氧化、提高免疫力等主要作用[2]。本文旨在比較分析SBE法(半仿生提取法)、AE法(醇提取法)制備的黃連解毒湯提取液的指紋圖譜,以驗(yàn)證黃連解毒湯的最佳提取方法,具體報(bào)告如下:
1 儀器與試藥
1.1 儀器:電子分析天平(MA110型),精密pH計(jì)(pHS-3C型),高效液相色譜儀(Waters-2695),紫外分析儀(UV3010型),醫(yī)用超聲波清洗器(KQ-250E型),中空纖維超濾膜(DH-系列)。
1.2 試藥:黃柏飲片、黃芩飲片、黃連飲片,梔子飲片,梔子苷、黃芩素、鹽酸小檗堿(中國生物制品研究所),甲醇(色譜純)、乙腈(色譜純)、超純水,三氯甲烷(分析純)。
2 方法
2.1 樣品液制備方法:SBE液制備方法:按照處方的比例精確稱取100g方藥粗粉(10目-20目),按照SBE法的提取工藝及藥材組合方式(黃柏和黃芩合煎,黃連和梔子合煎,然后合并煎液),再分別浸泡30分鐘,分別以SBE法進(jìn)行3次提取,加水量按照藥量的10倍、8倍、8倍添加,3煎的pH值分別為2.0、7.0和9.0,提取時間分別為2小時、1.5小時、1.5小時,然后將3煎的提取液過濾、離心,以中空纖維超濾膜(相對分子質(zhì)量=1000)濾過、濃縮、合并,將提取液定容到500ml,得到相對分子質(zhì)量小于等于1000的黃連解毒湯提取液(含有200g/L生物藥)。
AE液制備方法:按照SBE液制備方法,以乙醇(60﹪)為作溶劑,按照上述方法得到相對分子質(zhì)量小于等于1000的黃連解毒湯提取液(含有200g/L生物藥)。
2.2 供試品溶液制備方法:精確稱取2種樣品液各10ml,置于蒸發(fā)皿內(nèi),水浴中蒸發(fā)濃縮至近干,加0.8g硅藻土,拌勻、蒸干、研勻,置于磨口三角瓶(100ml)內(nèi),加入25ml甲醇溶解,稱定質(zhì)量,進(jìn)行30分鐘超聲提取,補(bǔ)足減失質(zhì)量,以布氏漏斗將殘存硅藻土濾除。精密吸取2種濾液各2.5ml,以甲醇定容到10ml,即得到2種供試品溶液(含有20g/L生藥)[3]。
2.3 對照品溶液制備方法:精確稱取5.10mg梔子苷對照品,2.32mg小檗堿對照品,1.96mg黃芩素對照品,以甲醇定容到10ml,即得。
2.4 色譜條件:PLATISIT C18-色譜柱(25cm*0.46cm,5m);流動相A:0.1﹪磷酸和0.02 moL/L磷酸二氫鉀。流動相B:乙腈;流速:0.8ml/min;柱溫:30 ℃;檢測波長:225nm;進(jìn)樣量:20ul。
梯度洗脫
3 方法學(xué)考察
3.1 精密度:取供試品SBE溶液,連續(xù)進(jìn)5針,得指紋圖譜,計(jì)算各峰的保留時間RSD及峰面積RSD。
3.2 重現(xiàn)性:取樣品溶液和供試品溶液5份,進(jìn)樣檢測,計(jì)算各峰的保留時間RSD及峰面積RSD。
3.3 穩(wěn)定性:取供試品SBE溶液,分別在0H,2H,6H,12H,24H進(jìn)樣檢測,計(jì)算各峰的保留時間RSD及峰面積RSD。
4 結(jié)果
4.1 方法學(xué)考察中的精密度、重現(xiàn)性及穩(wěn)定性均滿足要求。各峰Rt(相對保留時間)的RSD<1.0%,各峰相對峰面積RSD<5.0%,溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定。
4.2 特征峰,SBE法制備的黃連解毒湯提取液存在23個特征峰,AE法制備的黃連解毒湯提取液缺少5個特征峰。
4.3 重疊率,特征峰相似度以夾角余弦法計(jì)算,結(jié)果SBE法制備的黃連解毒湯提取液的結(jié)果大于AE法制備的黃連解毒湯提取液的結(jié)果,這和共有特征峰的重疊率計(jì)算結(jié)果相符。
4.3 峰面積,比較鹽酸小檗堿、黃芩素、梔子苷的指標(biāo)成分、共有特征峰的總面積,結(jié)果SBE法制備的黃連解毒湯提取液的結(jié)果大于AE法制備的黃連解毒湯提取液的結(jié)果。
3 討論
相關(guān)研究顯示,對380多種常用中藥的活性成分進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,多數(shù)中藥的相對分子質(zhì)量在1000以下,這符合“中藥活性成分分子量表”的統(tǒng)計(jì)結(jié)果,所以本研究以相對分子質(zhì)量小于等于1000的提取液測定指紋圖譜,是中藥整體、客觀、模糊、綜合的特點(diǎn)予以體現(xiàn),為研究現(xiàn)代藥物的新劑型提供有效的技術(shù)支持,為提取中藥未知物質(zhì)拓展思路[4]。SBE法(半仿生提取法)是依據(jù)中藥及方劑中的部分已知成分,結(jié)合整體的藥物研究方法和分子藥物的研究方法,從生物藥劑學(xué)的角度,對口服給藥、藥物胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)過程進(jìn)行模擬,為中藥制劑(經(jīng)消化道給藥)設(shè)計(jì)出新的提取技術(shù)。該方法的提取工藝重視有成分論和藥效學(xué)反應(yīng),綜合評價總浸出物、有效成分、不同極性部分的指標(biāo)及藥理作用,對提取工藝進(jìn)行優(yōu)選,重視綜合成分作用。本研究顯示,SBE法在提高有效成分提取率、藥學(xué)指標(biāo)方面優(yōu)于AE法。
綜上所述,SBE法制備的相對分子質(zhì)量小于等于1000的黃連解毒湯提取液中的成分最多。
參考文獻(xiàn)
[1]陳麗靜,孫秀梅,張兆旺,等.3種方法制備的黃連解毒湯提取液指紋圖譜比較[J].中草藥,2013,43(3):487-491.
[2]彭娟,郭娜,范斌,等.黃連解毒湯高效液相色譜指紋圖譜研究及指標(biāo)成分的含量測定[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(10):67-70.
[3]沈嘉,曹現(xiàn)峰,劉九飛.幾種黃連解毒湯的HPLC指紋圖譜研究[J].中成藥,2003,25(6):434.
[4]竇錦明,孫秀梅,張兆旺,等.黃連解毒湯方藥3種方法提取液成分比較[J].時珍國醫(yī)國藥,2010,21(6):1369-1371.