摘要：

目的：建立腦絡(luò)通膠囊中黃芪甲苷含量測(cè)定的方法。方法：色譜柱為Agilent Eclipse XDB C18（250mm×4.6mm，5μm）；以乙腈-水（32：68）為流動(dòng)相；流速1.0mL/min；柱溫30℃。ELSD檢測(cè)條件：（漂移管溫度：40℃，增益：4）。結(jié)果：黃芪甲苷進(jìn)樣量在1.23～6.15μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.9994），加樣回收率為99.67%，RSD為0.33%（n=6）；結(jié)論：本方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于腦絡(luò)通膠囊中黃芪甲苷的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：黃芪甲苷；腦絡(luò)通膠囊；高效液相-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法

【中圖分類號(hào)】

R453 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1002-3763（2014）08-0062-01

腦絡(luò)通膠囊由丹參浸膏、鹽酸托哌酮、川芎浸膏、甲基橙皮苷、黃芪浸膏、維生素B6組成，具有補(bǔ)氣活血，通經(jīng)活絡(luò)的功效。本方中的黃芪是補(bǔ)氣虛的主藥，而黃芪甲苷是黃芪的主要成分。原標(biāo)準(zhǔn)（《中藥成方制劑第19冊(cè)》）未作黃芪甲苷的含量測(cè)定，筆者建立了測(cè)定腦絡(luò)通膠囊中黃芪甲苷含量的高效液相-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法[1-3]。以為進(jìn)一步完善該制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器和試藥

LC-20A高效液相色譜儀（日本島津公司）；島津ELSD-LT II蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；Sartorius-ME235S電子天平；黃芪甲苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110781-200613，供含量測(cè)定用，含量100.0%）；腦絡(luò)通膠囊（廣西歡寶藥業(yè)有限公司，批號(hào)分別為20130701，20130703，20130801）。乙腈為色譜純（經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾），其余試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：

色譜柱：Agilent Eclipse XDB C18；流動(dòng)相：乙腈-水（32：68）；流速1.0mL/min；柱溫30℃。ELSD檢測(cè)條件：（漂移管溫度：40℃，增益：4）。進(jìn)樣量：10μL。

2.2 溶液制備：

對(duì)照品溶液的制備：精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品20.46mg，置100mL量瓶中，加甲醇適量，振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備：取本品10粒的內(nèi)容物，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇100ml，冷浸過(guò)夜，加熱回流4小時(shí)，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，放冷，通過(guò)D101型大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑1.5cm，柱高12cm），以水50ml洗脫，棄去水液，再用40%乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至5ml的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。陰性對(duì)照品溶液的制備：按腦絡(luò)通膠囊劑制備工藝，制備缺黃芪的陰性樣品，照供品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察：

專屬性試驗(yàn) 分別精密吸取2.2項(xiàng)下3種溶液各10μL，按擬定的色譜條件進(jìn)樣。記錄色譜圖，在此條件下，理論塔板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算大于4000。見圖1?？梢?，在對(duì)照品溶液色譜主峰處，供試品溶液色譜相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對(duì)照品溶液無(wú)此色譜峰，說(shuō)明處方中其他成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

線性關(guān)系考察 密稱取黃芪甲苷對(duì)照品24.60mg，置20mL容量瓶中，得質(zhì)量濃度為1.23mg/ml作為母液，分別精密吸取母液1、2、3、4、5ml，分別定容于10ml的容量瓶中，得質(zhì)量濃度分別為0.123、0.246、0.369、0.492、0.615mg/ml的對(duì)照品溶液，取上述溶液10μl，注入液相色譜儀，以進(jìn)樣量的常用對(duì)數(shù)值（x）為橫坐標(biāo)，以峰面積的常用對(duì)數(shù)值（y）為縱坐標(biāo)，線性回歸得回歸方程為：y=1.1092x+2.7535，r=0.9997，表明進(jìn)樣量在1.23～6.15μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 樣品測(cè)定：

取樣品3批，按擬定色譜條件操作，測(cè)定含量，結(jié)果批號(hào)為20130701，20130703，20130801的3批樣品中黃芪甲苷的含量分別為0.236，0.241，0.238mg/g。

3 討論

供試品溶液的制備時(shí)，比較了超聲提取法，加熱回流法，索氏提取法，結(jié)果顯示索氏提取法效果最理想。對(duì)流動(dòng)相的組成比例進(jìn)行了反復(fù)試驗(yàn)，結(jié)果顯示以乙腈-水（32：68）為流動(dòng)相，分離效果較好。蒸發(fā)光散射（ELSD）檢測(cè)器適用于檢測(cè)黃芪甲苷類等無(wú)紫外吸收或微弱紫外末端吸收的物質(zhì)，具有較高的檢測(cè)靈敏度，且穩(wěn)定性和重現(xiàn)性良好。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于腦絡(luò)通膠囊中黃芪甲苷的含量測(cè)定。

參考文獻(xiàn)

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