摘要： 目的：探討痰標本的細菌檢測對呼吸系統(tǒng)感染性疾病的檢測。方法：對200份痰標本的采集、送檢及細菌檢方法進行分析。結(jié)果：合格痰涂片156份，不合格痰標本44份。痰涂片陽性率為27.5%（55/200）， 培養(yǎng)陽性率為39.5%（79/200），不合格痰標本涂片陽性率僅為1.3%，培養(yǎng)陽性率僅為2.5%。結(jié)論：合格痰涂片、培養(yǎng)的陽性率均顯著高于不合格痰的涂片、培養(yǎng)的陽性率。呼吸道標本易受定植在上呼吸道的正常菌群污染，進行細菌學檢驗時通?？蓮乃蜋z的標本中分離出多種細菌，確定那一種細菌是引起呼吸道感染的病原菌，對臨床診斷與治療至關(guān)重要。

關(guān)鍵詞：痰液標本；細菌檢測【中圖分類號】R446.19【文獻標識碼】A【文章編號】1672-8602（2014）02-0191-02

痰液是肺泡、支氣管和氣管的分泌物。正常人呼吸道內(nèi)分泌物很少，當呼吸道粘膜受到刺激時，分泌物增多，痰即增多，故痰主要由粘液和炎性滲出液組成。對于呼吸系統(tǒng)（上呼吸道、支氣管、肺、胸膜）感染性疾病的診斷、治療具有重要意義；尤其是下呼吸道感染，近年來已成為最常見的感染性疾病之一?，F(xiàn)將本院200份痰標本進行微生物檢驗分析如下。

1資料與方法

1.1一般資料：選取200份痰液標本中，男130例，女70例，年齡36～75歲，平均67歲。均為呼吸內(nèi)科，慢性支氣管炎94例，肺心病32例，肺炎44例，肺氣腫22例，咯血待查10例，支氣管擴脹6例。

1.2標本采集：采集痰液標本的時間以清晨為好，因此時患者的痰量多、含菌量也多。采集前可囑患者用溫水漱口數(shù)次以除去口腔內(nèi)大部雜菌，然后用力自氣管深部咳出痰液，吐入廣口帶蓋的無菌器內(nèi)送檢。檢查結(jié)核分支桿菌的標本，如量較多一次即可，若量甚少，則應采集24h痰液，以提高陽性率，不能立即送檢時應將標本放冰箱或冷暗處保存[1]。檢查白喉桿菌時，用無菌棉拭擦咽、喉頭、鼻黏膜或病灶部位的偽膜與黏液。檢查腦膜炎球菌時，應以無菌棉拭從鼻咽部采取分泌物，如需培養(yǎng)應立即種于專用選擇性P·V瓊脂（含多黏菌素、萬古霉素）平板上，置燭缸中培養(yǎng)。檢查麻風桿菌時，應用無菌棉拭或刀片刮鼻黏膜，涂片，行抗酸染色鏡檢，有典型麻風桿菌，即可報告。

1.3檢驗方法

1.3.1肉眼觀察：觀察痰液的顏色，黏稠度、有無血絲和是否呈膿性、硫黃樣顆粒等。

1.3.2直接涂片： 取膿和膿血部分薄涂片3～4張，做單染色、革蘭染色、抗酸或熒光染色鏡檢。如發(fā)現(xiàn)革蘭陽性刀尖形雙球菌或同時莢膜染色陽性，對肺炎球菌肺炎的診斷是有力的支持；檢驗結(jié)果作初步報告。

1.3.3普通分離培養(yǎng)： 痰標本應在無菌鹽水中洗滌后取中間部分接種血瓊脂平板和巧克力色平板；流感桿菌分離培養(yǎng)接種兔血平板。根據(jù)臨床需要選擇厭氧培養(yǎng)、嗜肺軍團菌培養(yǎng)、真菌培養(yǎng)或分枝桿菌培養(yǎng)。肺膿腫、肺壞疽應同時作需氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)。懷疑真菌感染應作10%KOH直接涂片鏡檢和真菌培養(yǎng)，接種選擇培養(yǎng)基，通常包括沙包羅和腦心浸液（BHI），加入一定量抗生素以抑制污染菌的過度生長。懷疑結(jié)核菌感染應作直接涂片抗酸或熒光染色鏡檢和結(jié)核菌培養(yǎng)。

1.3.4真菌培養(yǎng)：（1）白色假絲酵母菌 將痰液標本用生理鹽水洗滌后做成懸液，然后取此懸液接種于兩管沙保弱培養(yǎng)基上，分別置于37℃及22℃或室溫中培養(yǎng)2～7d。如有中等大小、濕潤、黃白色乳酪樣或漿糊狀，具有顯著酵母樣氣味的菌落時可得出初步診斷。再有厚膜孢子及假菌絲，糖發(fā)酵反應（葡萄糖+、麥芽糖+、蔗糖+、乳糖-）符合時，即可報告\"真菌培養(yǎng)有白色假絲酵母菌生長\"。（2）熏煙色曲霉菌。熏煙色曲霉菌一般生長迅速，最初在沙保弱培養(yǎng)基上形成白色細絲樣生長，當產(chǎn)生孢子時迅速變成綠色至暗綠色菌落。將培養(yǎng)管放在低倍鏡下觀察時，可見典型的分生孢子柄（柄的末端擴展成頂囊，表面為多數(shù)帶串孢子所覆蓋），特別在菌落邊緣更清楚易見。根據(jù)本菌的特點如符合鑒定依據(jù)的各項，即可報告\"真菌培養(yǎng)有熏煙色曲霉菌生長\"。

2結(jié)果

合格痰涂片156份，不合格痰標本44份。痰涂片陽性率為27.5%（55/200）， 培養(yǎng)陽性率為39.5%（79/200），不合格痰標本涂片陽性率僅為1.3%，培養(yǎng)陽性率僅為2.5%。

3討論

由于人體喉以上呼吸道黏膜表面及其分泌物含有眾多微生物，唾液含菌量為108～109/mL；老年、重癥或住院病人的上呼吸道定植致病菌更多，致使途經(jīng)口咽部咳出的痰液常受到污染，影響結(jié)果判定。痰標本的優(yōu)劣直接影響病原學診斷的準確性和可靠性，因此，應嚴格按操作程序進行。痰標本用于普通細菌、分枝桿菌、真菌和軍團菌的檢測。但不適于檢測厭氧菌。合格的標本采集是取得正確檢驗結(jié)果的關(guān)鍵，因此，臨床工作人員要教會病人如何采集或親自去采集，取得深部的痰液而不是唾液。下呼吸道標本運送和保存時，盡快（<2 h）送至實驗室 不及時運送，可導致肺炎鏈球菌，流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌濃度下降甚至死亡。應急措施如不能及時送達，應將呼吸道標本暫存于4℃環(huán)境中[2]。否則，會使營養(yǎng)要求低的細菌如銅綠假單胞菌等過多生長，并影響苛養(yǎng)菌的觀察與檢出，但4℃放置時間不可超過24 h。作結(jié)核分枝桿菌檢查，痰液量要多或留取24 h痰液，嬰幼兒肺結(jié)核要用胃管取痰。

痰培養(yǎng)用于肺和支氣管感染的病原體分離和鑒定。適宜使用的痰標本應含有較多的中性粒細胞，無或有少量扁平上皮細胞；后者是唾液污染的標志。有較多鱗狀上皮的痰不能用作細菌培養(yǎng)。痰中分離的細菌無論是否為上呼吸道常在菌，實驗室都要給予報告。在免疫損害時，上呼吸道常在菌群可造成吸入性感染[3]。痰普通培養(yǎng)可發(fā)現(xiàn)的病原菌主要有：金黃葡萄球菌、流感桿菌、鏈球菌、肺炎球菌、腦膜炎球菌、副流感桿菌、綠膿桿菌、克雷伯桿菌、等。而百日咳桿菌、白喉桿菌、嗜肺軍團菌、結(jié)核分枝桿菌、脆弱類桿菌以及其他嗜血菌屬和奈瑟菌屬細菌等，常規(guī)培養(yǎng)不能分離出；當臨床懷疑時，需要特別申請和專門留取標本，用特殊方法證明。從痰液中檢出嗜肺軍團菌、結(jié)核分枝桿菌、放線菌及奴卡菌，具有重要臨床意義，是確定診斷和治療的依據(jù)。軍團菌病的病原體是嗜肺軍團菌，該病主要累及肺臟，也可發(fā)生全身多器官的嚴重損害。嗜肺軍團菌可引起暴發(fā)流行、散在流行和醫(yī)院內(nèi)持久流行，從痰液中分離到該菌對軍團菌病具有確診意義。肺結(jié)核在結(jié)核病中最為多見，由結(jié)核分枝桿菌引起。痰液結(jié)核菌檢查是確診肺結(jié)核最特異的方法，涂片抗酸染色鏡檢快速簡便，培養(yǎng)則敏感性和特異性高。大約1/3痰培養(yǎng)陽性的病人，在初次痰涂片中可找到抗酸桿菌，若連續(xù)檢查幾天，涂片陽性率可至2/3。因此有條件時涂片和培養(yǎng)均應進行。放線菌病是一種無痛性化膿性感染，為厭氧性放線菌所致，該菌是人口腔和胃腸道中的正常菌群，從呼吸道吸入可引發(fā)肺部的放線菌病。奴卡菌病的病原體是奴卡菌，該病是一種急性、亞急性或慢性化膿性疾病，常起始于肺部，大多數(shù)由星形奴卡菌引起，主要通過呼吸道引起人的原發(fā)性化膿性肺部感染。肺部真菌病由多種真菌引起，最為常見的是白色念珠菌和曲霉菌，曲霉菌中主要為煙曲霉菌，少數(shù)為黃曲霉菌、土曲霉菌及黑曲霉菌等。其次是新型隱球菌和毛霉菌，而芽生菌、孢子絲菌、組織胞漿菌及球孢子菌較少見。

呼吸道細菌學檢驗的標本均需做涂片鏡檢。其目的是判定送檢的標本是否適合做細菌培養(yǎng)，并初步判定有否病原菌、病原菌的量及類別，有助于初步報告、選擇培養(yǎng)基（如真菌）和對培養(yǎng)結(jié)果的綜合分析[4]。呼吸道標本易受定植在上呼吸道的正常菌群污染，進行細菌學檢驗時通常可從送檢的標本中分離出多種細菌，確定那一種細菌是引起呼吸道感染的病原菌，對臨床診斷與治療至關(guān)重要。當同一培養(yǎng)基上分離出復合菌時，找出優(yōu)勢菌，當分離優(yōu)勢菌與涂片染色鏡檢結(jié)果相符時，優(yōu)勢菌必須做藥敏試驗。若分離培養(yǎng)結(jié)果與涂片染色鏡檢結(jié)果不符時，可不進行藥敏試驗，僅報告分離細菌鑒定結(jié)果。分離培養(yǎng)的細菌為定植的正常菌群，應報告為\"正常菌群\"。

參考文獻

[1]楊履渭.微生物學及檢驗技術(shù)[M].第1版.廣東科技出版社，1986：460.

[2]劉志輝，黃業(yè)倫，許婉華，等.痰涂片抗酸染色檢查質(zhì)量控制初探.中國防癆雜志，2002，24（5）：249.

[3]張風云，張春成.種痰標本留取方法對提高病原學診斷準確率的比較.現(xiàn)代護理，2004，10（5）449.

[4]胡必杰，等.痰培養(yǎng)標本質(zhì)量評估的量化標準的探討.中華微生物學和免疫學雜志，2001，21（12）：35.