摘要：目的：探討沙門(mén)菌微生物學(xué)檢驗(yàn)方法。沙門(mén)菌主要通過(guò)污染食物和水源經(jīng)口感染，可引起人類和動(dòng)物的沙門(mén)菌病。沙門(mén)菌在人中可導(dǎo)致兩種基本類型的感染。多數(shù)沙門(mén)菌能引起腸胃炎，為一種腸胃和局部淋巴結(jié)的局部感染，引起腹瀉，持續(xù)數(shù)日。其他一些沙門(mén)菌可引起具有致死性的全身性感染，重者可引起致死性傷寒。

關(guān)鍵詞：沙門(mén)菌屬；微生物學(xué)檢驗(yàn)【中圖分類號(hào)】R446.5【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1672-8602（2014）02-0180-01

沙門(mén)菌屬常見(jiàn)有傷寒沙門(mén)菌、副傷寒沙門(mén)菌、鼠傷寒沙門(mén)菌、豬霍亂沙門(mén)菌等。所有沙門(mén)菌均對(duì)人和（或）動(dòng)物致病。傷寒沙門(mén)菌和甲型副傷寒沙門(mén)菌既引起腸熱癥，亦致食物中毒、菌血癥和敗血癥。

1臨床資料

選取100例來(lái)源于本院門(mén)診及住院患者的血液、糞便、尿液、骨髓標(biāo)本，微生物學(xué)檢驗(yàn)分析。

2微生物學(xué)檢驗(yàn)

2.1標(biāo)本采集：根據(jù)不同疾病、不同病程取不同標(biāo)本，最好在使用抗生素前采集。如腸熱癥根據(jù)病程不同，第1周取血液，第2～3周取糞便、尿液，全程可取骨髓。血清學(xué)診斷應(yīng)在病程的不同時(shí)期分別采集2～3份標(biāo)本。胃腸炎取糞便、嘔吐物和可疑食物。敗血癥或菌血癥取血液。

2.2檢驗(yàn)方法

2.2.1標(biāo)本直接檢查：尿標(biāo)本等可直接涂片進(jìn)行革蘭染色鏡檢。

2.2.2分離培養(yǎng)：分離沙門(mén)菌常用腸道選擇培養(yǎng)基（SS、MAC、EMB等）和強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基（孔雀綠瓊脂和亞硫酸鉍瓊脂等）。分離除傷寒沙門(mén)菌、各型副傷寒沙門(mén)菌以外的沙門(mén)菌用孔雀綠瓊脂效果較好，而分離傷寒沙門(mén)菌則用亞硫酸鉍瓊脂效果較好。此外，在暴發(fā)流行或篩選帶菌者時(shí)，在菌量較少的情況下，初次分離時(shí)用亞硒酸鹽或GN肉湯增菌。血液和骨髓液取血液5 mL或骨髓0.5 mL，加入50 mL膽汁葡萄糖肉湯增菌培養(yǎng)，若有生長(zhǎng)則移種至血平板和SS平板。糞便或肛門(mén)拭子直接同時(shí)接種至SS平板和EMB/MAC平板。尿液和體液以3 000 r/min離心30 min后，取沉淀增菌或接種于血平板、EMB/MAC平板等培養(yǎng)基上?？梢墒澄镅心ズ蠹?0倍量的無(wú)菌生理鹽水混勻，接種于增菌肉湯和腸道選擇性平板上。沙門(mén)菌在SS平板上為不透明或透明、無(wú)色或中央為黑色的菌落，在MAC和 EMB平板上呈無(wú)色透明或半透明的菌落。

2.2.3鑒定：取上述可疑菌落涂片染色，并進(jìn)一步做生化試驗(yàn)，若反應(yīng)結(jié)果符合數(shù)據(jù)，則可初步鑒定為沙門(mén)菌屬。再依據(jù)數(shù)據(jù)所列的生化反應(yīng)試驗(yàn)與血清學(xué)試驗(yàn)鑒定到種、型。沙門(mén)菌血清學(xué)鑒定的基本方法是：用沙門(mén)菌抗血清對(duì)分離的菌株按O抗原、第一相及第二相H抗原的順序，逐一進(jìn)行玻片凝集。臨床常見(jiàn)沙門(mén)菌95%以上屬于A～F群，故先用A～F多價(jià)O血清進(jìn)行玻片凝集，確定為A～F群后，用單價(jià)O因子血清鑒定到具體的群，再用第一相與第二相H因子血清定型[1]。若細(xì)菌生化反應(yīng)符合沙門(mén)菌屬.但與A～F多價(jià)O血清不產(chǎn)生凝集現(xiàn)象，應(yīng)考慮是否有表面抗原（Vi）存在，可將細(xì)菌懸液水浴加熱30 min后再進(jìn)行凝集試驗(yàn)。如除去Vi抗原后仍不凝集，則可能為A～F以外的菌群。

2.2.4免疫學(xué)診斷：腸熱癥病程長(zhǎng)，由于抗生素的使用，臨床癥狀不典型，臨床標(biāo)本分離陽(yáng)性率低，故常用肥達(dá)反應(yīng)輔助診斷。肥達(dá)反應(yīng)是用已知傷寒沙門(mén)菌O、H抗原以及甲型、乙型、丙型副傷寒沙門(mén)菌H抗原與受檢者血清進(jìn)行凝集試驗(yàn)，測(cè)定受檢者血清中有無(wú)相應(yīng)抗體及其效價(jià)，來(lái)輔助診斷傷寒和副傷寒。其結(jié)果需結(jié)合臨床表現(xiàn)、病程、病史等進(jìn)行綜合分析。O抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生 IgM抗體，出現(xiàn)較早，在血清中存在的時(shí)間較短；H抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG，出現(xiàn)較遲，持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。正常人因隱性感染或預(yù)防接種，血清中可存在一定量的抗體。通常傷寒沙門(mén)菌 O凝集效價(jià)達(dá)到或超過(guò)1：80、H抗體效價(jià)達(dá)到或超過(guò)1：160、各型副傷寒沙門(mén)菌H抗體效價(jià)達(dá)到或超過(guò)1：80，病程中逐周檢查效價(jià)遞增或恢復(fù)期達(dá)到初次效價(jià)的4倍或以上者，才有診斷價(jià)值。一般來(lái)說(shuō)，O、H凝集效價(jià)均升高，則為傷寒、副傷寒可能性較大；O凝集效價(jià)不升高而H凝集效價(jià)升高，可能為預(yù)防接種的回憶反應(yīng)；O凝集效價(jià)升高而H凝集效價(jià)不升高則可能為感染早期，或與傷寒沙門(mén)菌O抗原有交叉反應(yīng)的其他沙門(mén)菌感染，可于一周后復(fù)查，如H升高則可診斷。

3討論

沙門(mén)菌有毒株可借助菌毛吸附于小腸黏膜上皮細(xì)胞。有Vi抗原的沙門(mén)菌具有侵襲力，能穿過(guò)小腸上皮到達(dá)固有層。沙門(mén)菌有較強(qiáng)的內(nèi)毒素，可引起發(fā)熱、白細(xì)胞改變、中毒性休克，并能激活補(bǔ)體系統(tǒng)，導(dǎo)致一系列病理生理變化。某些沙門(mén)菌（如鼠傷寒沙門(mén)菌）能產(chǎn)生類似大腸埃希菌的腸毒素，與早期的水樣腹瀉有關(guān)。沙門(mén)菌主要通過(guò)污染食物和水源經(jīng)口感染，可引起人類和動(dòng)物的沙門(mén)菌病。沙門(mén)菌引起的疾病主要有，胃腸炎最常見(jiàn)于沙門(mén)菌感染，因食入被大量鼠傷寒沙門(mén)菌、豬霍亂沙門(mén)菌、腸炎沙門(mén)菌等污染的食物而引起。主要癥狀為發(fā)熱、惡心、嘔吐、腹痛。菌血癥或敗血癥以豬霍亂沙門(mén)菌感染為多，表現(xiàn)為高熱、寒戰(zhàn)等。無(wú)明顯的胃腸炎癥狀，常伴有局部病灶，如膽囊炎、骨髓炎等。常出現(xiàn)血培養(yǎng)陽(yáng)性而糞便培養(yǎng)陰性的現(xiàn)象。腸熱癥包括傷寒與副傷寒，分別由傷寒沙門(mén)菌和各型副傷寒沙門(mén)菌引起，兩者的致病機(jī)制、臨床癥狀相似，只是副傷寒的病情較輕，病程較短。腸熱癥常表現(xiàn)為輕度發(fā)熱和腹瀉，最典型的腸熱癥是由傷寒沙門(mén)菌引起的傷寒。細(xì)菌隨污染的食品或飲水進(jìn)入體內(nèi)，在淋巴結(jié)內(nèi)大量繁殖后，經(jīng)胸導(dǎo)管進(jìn)入血流引起第一次菌血癥[2]。細(xì)菌隨血液循環(huán)到達(dá)骨髓、肝、腎、脾、膽囊等器官大量繁殖，再次進(jìn)入血液循環(huán)，引起第二次菌血癥。患者常有持續(xù)高熱（39℃以上）、相對(duì)緩脈、肝脾腫大、皮膚玫瑰疹、外周血白細(xì)胞減少等癥狀。若無(wú)并發(fā)癥，第3～4周病情開(kāi)始好轉(zhuǎn)。傷寒沙門(mén)菌感染后約3%患者可成為病原菌攜帶者，在糞便中可持續(xù)排菌長(zhǎng)達(dá)1年或1年以上。病菌主要儲(chǔ)留于膽囊，間歇性排菌使糞便成為重要傳染源。腸熱癥后可獲得牢固的免疫力，以細(xì)胞免疫為主。消化道黏膜局部SIgA對(duì)阻止病原菌的黏附有一定的作用。

參考文獻(xiàn)

[1]薄志堅(jiān)，鄒梅，黃敏，等.沙門(mén)菌分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國(guó)公共衛(wèi)生，2006，22（2）：236.

[2]田克誠(chéng)，闞飆，胡偉，等. 貴州省傷寒沙門(mén)菌分離株16s核糖體基因型的多態(tài)性及其流行病學(xué)意義[J]. 中華流行病學(xué)雜志，2002，2：50.