曹坤 姚麗娜

【摘要】目的 建立測定牛蒡降壓片中牛蒡苷含量的測定方法。方法 色譜柱為Inertsil C18柱，以甲醇：水（40：60，V/V）作為流動相，流速為1.0ml.min-1，檢測波長為280nm。結(jié)果 牛蒡苷在0. 5～5.0?g范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為101.5%，RSD=0.7%（n=6）。結(jié)論 建立的方法靈敏、準(zhǔn)確、專屬性強，可用于松脂醇二葡萄糖苷的測定。

【關(guān)鍵詞】HPLC；牛蒡苷；牛蒡子

牛蒡降壓片是由牛蒡子提取物、牛膝提取物等組成的具有輔助降血壓功能的保健食品，本品配方中牛蒡子提取物主要含有木脂素類成分，其中以牛蒡苷為主要成分，牛蒡苷具有鈣拮抗、擴張血管的作用，從而起到降血壓的效果，故我們選擇牛蒡苷作為本品功效成分指標(biāo)之一。本文采用高效液相色譜法測定牛蒡降壓片中牛蒡苷含量，簡便、快速，準(zhǔn)確度高，穩(wěn)定性及重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀，Waters515泵，Waters2487檢測器；超聲波振蕩器；牛蒡苷對照品：中國生物制品檢定所；牛蒡降壓片（哈藥集團制藥六廠，批號：20130118-1，20130118-2，20130118-3）；甲醇為色譜純；水為純化水；其他試劑試藥均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Inertsil C18柱（150mm×4.6mm，5?m）；流動相：甲醇：水=40：60；流速：1.0mL/min；檢測波長：280nm；進樣量：5μL；理論板數(shù)：按牛蒡苷峰計算應(yīng)不低于1500。

2.2 對照品溶液制備 精密稱取約12.5mg牛蒡苷對照品于25mL容量瓶中，用甲醇超聲使溶解，稀釋并定容至刻度即得。

2.3 供試品溶液制備 取本品10片，研細，混勻。精密稱取0.5g，置25mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲20min，放冷，用甲醇定容至刻度，過濾即得。

2.4 專屬性試驗 按本品配方（不含牛蒡子提取物）工藝制備陰性樣品，按2.3項方法處理即得陰性樣品溶液，取陰性樣品溶液5?l，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖。在此條件下，陰性樣品對牛蒡苷的測定無干擾。

2.5 線性關(guān)系考察 精密稱取牛蒡苷對照品適量，加甲醇溶解制成0.4mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，分別精密吸取該儲備液1、3、5、8、10ml于10ml量瓶中，加甲醇稀釋并定容至刻度，分別進樣5?l，記錄色譜圖。 以牛蒡苷峰面積積分值為橫坐標(biāo)（Y），以牛蒡苷對照品進樣量（?g）為縱坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：Y（C）=（3.858758e-004）X（A）-1.423225e-003，r=0.9999。結(jié)果表明，牛蒡苷在0.5～5.0?g范圍內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗 精密吸取同一供試品溶液5?l，注入高效液相色譜儀，重復(fù)進樣6次，測定牛蒡苷峰面積，結(jié)果RSD為0.4%。

2.7 穩(wěn)定性試驗 依2.3制備供試品溶液，分別于0、1.5、2.0 、3.0、6.0小時測定，記錄色譜峰面積，RSD為1.8%。結(jié)果表明，供試品溶液在6小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗 依2.2和2.3分別制備對照品溶液和供試品溶液（n=6），分別進樣5?l，記錄色譜圖，計算100g樣品中所含的牛蒡苷質(zhì)量，RSD為1.3%。結(jié)果表明：本法精密度良好。

2.9 加樣回收率試驗 稱取已知含量的樣品適量（共6份），分別置于6支25ml容量瓶中，分別精密加入牛蒡苷對照品適量，按2.3的方法制備供試品溶液，分別進樣5?l，記錄色譜圖。結(jié)果牛蒡苷的平均加樣回收率為101.5%，RSD=0.7%。線果表明：本方法回收率良好。

3 樣品測定 取3批牛蒡降壓片，按2.3項方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件進樣測定峰面積，按外標(biāo)法計算樣品的含量。三批樣品測定結(jié)果分別為2.280g/100g、20333g/100g、2.220g/100g。

4 討論

4.1 流動相的選擇 《中華人民共和國藥典》2010年版一部牛蒡子中牛蒡苷含量測定色譜條件中的流動相為甲醇-水（1：1.1），按此流動相對本品進行檢測，無法將牛蒡苷與其它組分有效分離。而將流動相比例調(diào)整為甲醇-水（40：60）時，主峰與其它組分獲得較好分離，且出峰時間適宜，故以甲醇-水（40：60）作為測定本品的流動相。

4.2 本法操作簡便，分離良好，可作為本品的質(zhì)量控制方法。

參考文獻

[1]《中華人民共和國藥典》2010年版一部