高雅倩等

[摘要]目的：觀察含有灰樹花子實體及綠茶提取物眼霜的抗衰老效果。方法：采用無創(chuàng)性儀器檢測以及圖像分析的方法，對23例受試者持續(xù)6周外用眼霜的效果進行分析。無創(chuàng)性檢測的主要功效參數(shù)為眼部細紋（魚尾紋）和皮膚彈力。采用VISIA-CR圖像分析的方法進行眼部膚色評價。結(jié)果：使用測試眼霜6周后，眼部魚尾紋各參數(shù)較0周基準值相比均有不同程度降低，但結(jié)果無顯著性差異（P>0.05）。左、右雙眼皮膚彈力平均值較0周的0.66/0.64上升到6周的0.76/0.74，且差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。眼部膚色的亮度和均勻度較0周均有明顯改善，改善幅度分別為0.54%和5.63%，且差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論：含灰樹花子實體及綠茶提取物眼霜可以有效提高眼部皮膚亮度和均勻度，增強皮膚彈力，且具有較高安全性。

[關(guān)鍵詞]灰樹花子實體提取物；綠茶提取物；抗衰老

[中圖分類號]R75 [文獻標識碼]A [文章編號]1008-6455（2014）17-1404-04

Anti-aging effect of eye cream product containing grifola frondosa fruiting body and green tea extracts

GAO Ya-qian1，WANG Xi2，KIM Eunjoo3，LI Li2， YEON Jaeho1， AN Susun1

（1.Amore-pacific （Shanghai） R&I Center Co.， Ltd，Shanghai 201801，China；2.West China Hospital，Chengdu 610041，Sichuan，China；3. Amore-pacific R&D Center，Yongin-si 446-729， Korea）

Abstract： Objective To evaluate the anti-aging effect of emollient eye cream formulated with Grifola frondosa extract and green tea extract. Methods A randomized， blinded test was performed on 23 subjects for six-week. Fine wrinkles， skin elasticity and skin tone of eye area were evaluated as main reference parameters using several bioengineering instruments and image analysis method. Results After six-week application， positive change of eye fine wrinkles （the crows feet） was observed but not statistically notable （P>0.05）. Even though， skin elasticity and skin tone （brightness & evenness） were improved with significance （P<0.05）.No adverse effect was observed. Conclusion The emollient eye cream could effectively improve skin elasticity， skin color of eye area and may positively affect fine wrinkles after six-week application and it is demonstrated to be safe to use.

Key words：Grifola frondosa fruiting body； green tea；anti-aging

隨著年齡的增長，環(huán)境污染的加劇，皮膚真皮層會變薄，真皮層中的膠原蛋白和彈性纖維結(jié)構(gòu)網(wǎng)絡也會開始退化，導致皮膚彈性喪失，出現(xiàn)皺紋。研究發(fā)現(xiàn)由于皮膚衰老受人種、地域、環(huán)境、生活習慣等多方面因素的影響，因此正確的皮膚護理可以最大程度地減少皮膚受損，延緩衰老[1]。隨著自由基生物學的發(fā)展，能夠有效清除自由基的抗氧化活性物質(zhì)成為抗衰老研究的新熱點[2]。作為植物來源的天然食物抗氧化劑的綠茶提取物也被廣泛應用于化妝品領(lǐng)域[3-6]。近年來，越來越多的學者們把目光投向了食用、藥用真菌。研究證明，食用菌的多糖類、酚類、對聯(lián)三苯類、三萜類及子實體的粗提物都具有很好的抗氧化作用，其中就包括灰樹花子實體提取物[7]。本研究旨在臨床評價含有灰樹花子實體提取物與綠茶提取物的護膚品對抗女性眼部早期衰老的功效和安全性。

1 資料和方法

1.1一般資料：選取23例成都地區(qū)健康女性。入選標準：年齡35～40歲，眼部皺紋輕到中度，自愿參與本次研究，能嚴格遵守研究方案的要求，并簽署知情同意書，按要求使用產(chǎn)品并完成隨訪。排除標準：面部有急性炎癥或其他皮膚疾病者；過敏體質(zhì)；已知對研究應用產(chǎn)品或類似產(chǎn)品有過敏史者；妊娠、哺乳者；有慢性消耗性疾病者；當前或近3個月內(nèi)參加過其他面部臨床研究或接受過皮膚科醫(yī)生治療者；當前或近2個月內(nèi)使用過任何抗炎藥物或近1月內(nèi)使用免疫抑制劑者。終止及退出標準：受試者發(fā)生了不良反應或特殊生理病理變化，不適宜繼續(xù)參加本次研究；受試者依從性差；使用了研究方案規(guī)定的禁用藥品，過多地接受紫外線照射及其他特殊原因自行要求退出者。

1.2試驗方法

1.2.1測試產(chǎn)品及設計：測試眼霜由愛茉莉太平洋公司提供，含有灰樹花子實體及綠茶提取物。要求所有受試者早晚各一次在眼部使用。研究開始前，產(chǎn)品用統(tǒng)一無標識包裝進行盲法處理，排除主觀意識干擾。本研究通過四川大學華西醫(yī)院臨床試驗與生物醫(yī)學倫理專委會審批。試驗地點為四川大學華西醫(yī)院化妝品安全性與功效性評價實驗室。測試時間為2012年4月～2012年6月。

1.2.2 儀器測試和方法：受試者在使用前0周和使用3、6周時各隨訪1次，共計3次，要求受試者每次隨訪為日間同一時間。要求受試者清洗面部，并用無添加熒光劑紙巾吸干面部水分，在恒溫恒濕（室溫22℃±2℃，相對濕度45%±5%）環(huán)境下，靜坐20min之后，由技術(shù)人員進行測定。

1.2.3 儀器測量指標

1.2.3.1 3D皮膚成像（Primospico，GFM公司，德國），測試結(jié)果用Sa、Sq、Smax、Sz4個參數(shù)反映眼部細紋的變化。Sa（Arithmetic Roughness）是一個垂直參數(shù)，代表測試面積范圍內(nèi)每個點的高度的算術(shù)平均值，描述的是垂直方向上的凹凸面。Sq（Quadratic Roughness）是單位測試面積中每個點的高度平方的平均值的平方根，若為多個單位測試面積的話，則為每個單位測試面積Sq的平均值。Smax（Maximum Stretching of the Roughness Profile）是指在全部測試面積內(nèi)，最高波峰和最低波谷的高度差。Sz（Ten Point Height）為全部測試面積內(nèi)，5個最高波峰和5個最低波谷的絕對值的算術(shù)平均值。各參數(shù)值越小，則皺紋狀態(tài)越好，改善程度越明顯。

1.2.3.2 皮膚彈力（Cutometer，2mm探頭，MPA580，Courage + Khazaka公司，德國），用參數(shù)R2值來評估。R2值是無負壓力時的彈力和有負壓力時的最大拉伸值之比。R2值越接近1，說明皮膚彈性越好。

1.2.3.3 面部成像（VISIA-CR，Canfield公司，美國），利用圖像處理軟件對圖像進行分析的方法來評估眼部膚色的亮度和均勻度。皮膚亮度參數(shù)通過強度來體現(xiàn)。如果強度增加，則皮膚亮度在增加。皮膚顏色的均勻度通過強度差來分析。如果強度差降低，則膚色均勻度增加。

1.2.4 受試者主觀評價：受試者分別在第3周和第6周隨訪時完成自我評價問卷，根據(jù)個人主觀感受對測試眼霜的功效進行評價。

1.2.5 不良反應評價：在試驗的0、3、6周對受試者進行不良反應評價。詢問受試者是否出現(xiàn)眼部干燥、脫屑、瘙癢等癥狀，并觀察是否有皮疹、紅腫及脫屑。不良反應的評估標準為0～3分制4級評分標準：3=嚴重，2=中度，1=輕微，0=無。

1.2.6 統(tǒng)計學方法：利用Excel，R語言和SPSS軟件進行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析。配對t檢驗被用于比較各參數(shù)基準值和每個時間點的數(shù)值（3周和6周），顯著性水平為95%的置信區(qū)間（P<0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 受試者統(tǒng)計資料結(jié)果：選擇符合入組條件的女性受試者23例，平均年齡（37.4±1.9）歲，最終由此23例完成本次研究。

2.2 眼部細紋（魚尾紋）結(jié)果：使用測試眼霜后，受試者眼部細紋（魚尾紋）以及眼角下垂程度較基準線（0周）有一定程度的改善。雖然顯著性分析結(jié)果但并無統(tǒng)計學意義（P>0.05），但從Primos圖像上還是可以觀察到明顯的眼部細紋狀況改善（見表1，如圖1）。

2.3 眼部皮膚彈力分析：使用測試眼霜后，雙眼魚尾紋部位皮膚彈性較基準線都有明顯提高，且左眼尾皮膚彈性改善要高于右眼尾。采用配對t檢驗進行顯著性分析，具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），如圖2。

2.4 眼部膚色分析（黑眼圈部位）：使用測試眼霜6周后，眼部皮膚的亮度增幅為0.53%，均勻度降幅為5.63%。經(jīng)顯著性分析驗證，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05），見表2。

2.5 自我評價問卷結(jié)果：23例受試者根據(jù)自己親身使用感受對測試眼霜做出主觀評價，問卷在3周和6周隨訪時進行。

使用測試眼霜3周后，82%的受試者表示對測試眼霜的保濕度和易吸收效果感到滿意，91%受試者明顯感知到眼部皮膚比以前變得更滋潤，同時，86%的受試者對測試眼霜的整體功效表示滿意。使用測試眼霜6周后，82%的受試者表示對測試眼霜能夠改善眼部細紋的效果感到滿意，91%受試者感知到眼部皮膚變得更滋潤，且86%的受試者對測試眼霜的整體功效表示滿意。

2.6 安全性評價：整個研究過程中未有與測試眼霜相關(guān)的不良反應事件。

3 討論

化妝品抗衰老功效是研發(fā)的永久熱點。針對皮膚衰老的不同機理，可以通過化妝品來延緩衰老過程的方式不外乎3種。一般通過長期修復細胞外基質(zhì)使肌膚結(jié)實，或通過添加抗氧化劑，減少皮膚的自由基損傷，來調(diào)節(jié)皮膚免疫和提高自我保護作用，或者通過加入植物油來改善皮膚老化，加速蛋白分泌來達到對抗皮膚衰老的目的，其中天然活性氧化劑還能有效防止紫外線及其他有害射線引起的色素沉淀，從而改善肌膚光澤。基于以上的考慮，天然的灰樹花與綠茶提取物都不失為極有潛力的抗衰老活性添加物。

灰樹花，學名為Grifola frondosa （Fr.）S.F.Gray，又名舞茸，栗蘑，貝葉多孔菌，云蕈等，分類學上屬擔子菌綱（Hymenomycetes），非褶菌目（Aphyllophorales），多孔菌科（Polyporaceae），樹花屬（Grifola），是一種藥、食兼用的珍稀食用菌。自20世紀80年代起，國內(nèi)外學者就對灰樹花進行了大量研究，從灰樹花子實體和菌絲體中提取了幾十種活性多糖?；覙浠ǘ嗵亲鳛閮?yōu)質(zhì)生物反應調(diào)節(jié)劑，具有增強免疫功能，抑制腫瘤，抗HIV病毒，穩(wěn)定血壓，降低血糖等功效[7-8]。除多糖外，灰樹花提取物還含有大量鐵、銅、硒、鉻、鋅、維生素C、維生素E等人體代謝必需微量元素，具有抗衰老、美白、增強記憶力和靈敏度等功效。隨著對灰樹花提取物優(yōu)良抗氧化作用機理和應用研究的深入[7-10]，灰樹花提取物作為化妝品活性原料被列入美國化妝品盥洗用品及香水協(xié)會2008年出版的《國際化妝品原料字典和手冊（第十二版）》中，隨后也被收錄入國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《國際化妝品原料標準中文名稱目錄（2010年版）》中。同樣作為化妝品活性原料的綠茶提取物，也被國內(nèi)外多篇研究報道其活性成分EGCG（左旋表沒食子兒茶素沒食子酸酯）是茶多酚中最有效的化學光防護劑，可以通過抗氧化來有效改善光老化引發(fā)的真皮彈性纖維病變，改善皮膚彈性，從而延緩、預防光老化[11-12]，且綠茶提取物的光防護作用在人體試驗中也已經(jīng)得到證實，因此，外用綠茶提取物抗衰老是非?？尚械目顾ダ献o理方法[13]。

本研究發(fā)現(xiàn)，在眼部使用含灰樹花子實體及綠茶提取物眼霜6周后，眼部魚尾紋有逐漸改善的趨勢，且左眼比右眼更為明顯，這是由于w0時左眼皺紋各參數(shù)值均明顯低于右眼，右眼皺紋狀態(tài)較左眼嚴重；同時使用眼霜前后的Primos圖像也反映了皺紋的變化，可見測試眼霜具有一定改善眼部細紋的效果。若要進一步明確灰樹花子實體及綠茶提取物對眼部細紋的顯著改善周期，還需要在6周基礎上進一步延長測試周期進行對比研究。測試眼霜對于眼部膚色的參數(shù)3周沒有明顯變化，到6周時才有統(tǒng)計學意義，而皮膚彈性參數(shù)3周得到明顯改善，到6周時改善更為顯著。通過本研究表明，含有灰樹花子實體及綠茶提取物可以有效改善眼部皮膚彈力，提亮和均勻眼部膚色（尤其黑眼圈部位），且具有一定程度地淡化眼部細紋的功效。利用抗氧化劑來進行抗皺護理時，各活性成分往往需要更長的起效時間才能看到明顯的皺紋改善效果，因此，還需要更長時間的研究、觀察。

綜上所述，含有灰樹花子實體及綠茶提取物的護膚眼霜對眼部皮膚早期老化所引起的皮膚彈性下降，膚色黯沉，細紋有顯著改善作用，且具有較高的安全性。

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[收稿日期]2014-06-13 [修回日期]2014-07-15

編輯/何志斌