趙怡楠 高景林 王玉潔 符初娜 何杏 趙冬香

摘 要 利用攝入法和點(diǎn)滴法測(cè)定高效氯氟氰菊酯、溴氰菊酯、順式氯氰菊酯、三唑磷、殺螟丹和殺蟲雙對(duì)海南中蜂工蜂的急性經(jīng)口和接觸毒性。結(jié)果表明，高效氯氟氰菊酯、溴氰菊酯、順式氯氰菊酯、三唑磷、殺螟丹和殺蟲雙對(duì)海南中蜂經(jīng)口毒性（48 h）的LC50分別為3.845、2.527、1.518、0.363、26.866和38.187 mg/L，6種農(nóng)藥對(duì)海南中蜂接觸毒性（24 h）的LD50分別為42.485、41.292、7.793、18.467、1 027.577和4 049.884 ng/蜂；6種農(nóng)藥對(duì)海南中蜂的經(jīng)口毒性分別為高毒、高毒、高毒、劇毒、中毒和中毒，接觸毒性除殺蟲雙為中毒外，其余均為高毒。

關(guān)鍵詞 海南中蜂；急性毒性；攝入法；點(diǎn)滴法

中圖分類號(hào) S986.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

目前，蜜蜂種群數(shù)量的急劇減少及其為農(nóng)作物和野生植物授粉的持續(xù)性是人們關(guān)注的熱點(diǎn)[1-4]。蜜蜂大量死亡對(duì)生態(tài)系統(tǒng)破壞引發(fā)的生物鏈斷裂帶來(lái)的嚴(yán)重后果是難以估計(jì)的，農(nóng)藥的使用是蜜蜂健康潛在的巨大威脅[5-6]，更是造成蜜蜂數(shù)量急劇減少的主要原因。農(nóng)藥中毒引起蜜蜂的大量死亡不僅會(huì)嚴(yán)重制約養(yǎng)蜂業(yè)的發(fā)展，更是威脅農(nóng)業(yè)系統(tǒng)的可持續(xù)發(fā)展與人類生存的大問(wèn)題。因此，農(nóng)藥對(duì)蜜蜂的影響應(yīng)該引起高度重視[7]。

中華蜜蜂（Apis cerana）伴隨著中華文明的歷史進(jìn)程，不僅為社會(huì)的發(fā)展提供了珍貴的蜂產(chǎn)品，還是保持農(nóng)作物和野生植物授粉持續(xù)性的關(guān)鍵[1-4]。相對(duì)于西方蜜蜂（Apis mellifera）而言，中華蜜蜂具有可利用零星蜜源植物、采蜜期長(zhǎng)、適應(yīng)性強(qiáng)、抗巢蟲能力強(qiáng)、消耗飼料少及溫馴性中等等優(yōu)點(diǎn)[8-10]。海南中蜂（Apis cerana hainan）是海南獨(dú)有的中華蜜蜂種質(zhì)資源[11]，是中國(guó)重要的蜜蜂資源，也是重要的授粉蜂種之一。如今西方蜜蜂的引入導(dǎo)致中華蜜蜂生存空間的急劇縮減，而農(nóng)藥的不合理使用又造成中華蜜蜂的中毒及大量死亡。因此，保護(hù)中華蜜蜂勢(shì)在必行[12]。

王瀛寰等[13]研究表明，與意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica Spin.）相比，中華蜜蜂對(duì)藥劑更敏感，一些對(duì)意大利蜜蜂低毒的藥劑可能會(huì)造成中華蜜蜂的大量中毒死亡，因此有必要開展農(nóng)藥對(duì)中華蜜蜂影響的相關(guān)研究。近年來(lái)，為防止蜜蜂種群數(shù)量的減少，歐盟委員會(huì)已針對(duì)新煙堿類農(nóng)藥等做出了限制使用的規(guī)定。中國(guó)也開始在所有高毒、高殘留農(nóng)藥中篩選對(duì)蜜蜂有危害的品種，并將采用嚴(yán)格的禁限用措施。高效氯氟氰菊酯、溴氰菊酯、順式氯氰菊酯、三唑磷、殺螟丹和殺蟲雙是海南常用于防治果樹和蔬菜害蟲的主要?dú)⑾x劑種類。本研究分析了這6種農(nóng)藥對(duì)海南中蜂的急性經(jīng)口與接觸毒性，并進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)性評(píng)估，以期為充分利用蜜蜂授粉，科學(xué)合理使用農(nóng)藥防蟲提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試農(nóng)藥：25 g/L高效氯氟氰菊酯水乳劑（先正達(dá)南通作物保護(hù)有限公司）；25 g/L溴氰菊酯乳油[拜耳作物科學(xué)（中國(guó)）有限公司]；100 g/L順式氯氰菊酯乳油（巴斯夫歐洲公司）；20%三唑磷乳油（湖北沙隆達(dá)股份有限公司）；98%殺螟丹可溶性粉劑（日本住友化學(xué)株式會(huì)社）；18%殺蟲雙水劑（廣州農(nóng)藥廠從化市分廠）。

蜜蜂：海南中蜂成年采集蜂由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所實(shí)驗(yàn)蜂場(chǎng)提供。

1.2 方法

1.2.1 供試蜜蜂前處理 在試驗(yàn)的當(dāng)天早晨采集年齡、飼喂?fàn)顩r、健康狀況一致的海南中蜂，并在試驗(yàn)條件下飼養(yǎng)直至試驗(yàn)開始。試驗(yàn)開始前將其饑餓2 h。

1.2.2 染毒程序 需要配置5個(gè)濃度梯度的藥液，并設(shè)1個(gè)空白對(duì)照組（如使用溶劑助溶的還需加設(shè)溶劑對(duì)照組），所有濃度試驗(yàn)組及對(duì)照組設(shè)置3次重復(fù)，每次重復(fù)10只海南中蜂。試驗(yàn)條件控制在黑暗條件下，溫度為（25±2）℃，空氣相對(duì)濕度為50%～70%[14-20]。

急性經(jīng)口毒性：以50%蔗糖水為溶劑稀釋藥液；將貯蜂籠內(nèi)[17-19]的海南中蜂引入試驗(yàn)蜂籠中，將配置好的試驗(yàn)藥液裝入飼喂器中，每支飼喂器中放入不同質(zhì)量濃度的藥液1～2 mL。

急性接觸毒性：以去離子水為溶劑稀釋藥液[21]；將海南中蜂低溫麻醉后，用微量點(diǎn)滴器取1 μL藥液滴于前胸背板處，每試驗(yàn)蜂籠內(nèi)用飼喂器盛入1～2 mL 50%蔗糖水。

1.2.3 觀察 試驗(yàn)開始后觀察海南中蜂的行為活動(dòng)情況，并記錄12、24、48 h后死亡情況，描述死亡癥狀及其他異常行為。描述試驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)的中毒癥狀，如身體蜷縮、雙翅張開等與對(duì)照組相比不同的癥狀。當(dāng)其身體完全不動(dòng)時(shí)即可判定為死亡。

1.3 數(shù)據(jù)處理

根據(jù)試驗(yàn)期間死亡數(shù)及死亡時(shí)間，采用SPSS 20.0軟件計(jì)算24、48 h半數(shù)致死濃度值（LC50）、半致死劑量值（LD50）、95%置信限及相應(yīng)的毒力回歸方程。

1.4 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

參照《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》[14-16]中關(guān)于農(nóng)藥對(duì)蜜蜂急性經(jīng)口毒性標(biāo)準(zhǔn)，將LC50（48 h）劃分為4個(gè)等級(jí)； （1）LC50≤0.5 mg a.i./L， 為劇毒；（2）0.5 mg a.i./L

中國(guó)應(yīng)用致死中量劃分農(nóng)藥對(duì)蜜蜂的毒性通常參照Atkins的毒性等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)[14-16]，即蜂接觸藥劑24 h后，根據(jù)藥劑對(duì)蜜蜂的LD50值的不同而分為高毒、中等毒和低毒3個(gè)級(jí)別： （1）LD50值在0.001～2.000 μg/蜂之間的為高毒農(nóng)藥；（2）LD50值在2.000～11.000 μg/蜂之間的為中毒農(nóng)藥（3）LD50值高于11.000 μg/蜂的為低毒農(nóng)藥。

2 結(jié)果與分析

2.1 中毒癥狀

試驗(yàn)過(guò)程中，隨著藥劑濃度的增加，中毒癥狀越來(lái)越明顯。初始濃度時(shí)，大部分海南中蜂未出現(xiàn)異常反應(yīng)，只有小部分個(gè)體極度興奮，亂飛亂撞。高濃度時(shí)，大部分表現(xiàn)出中毒癥狀。菊酯類農(nóng)藥中毒的海南中蜂異常激動(dòng)，側(cè)躺抽搐，足激烈抖動(dòng)。三唑磷中毒的海南中蜂除個(gè)別側(cè)躺抖動(dòng)足外，其他都異常興奮，激動(dòng)亂飛。殺蟲雙和殺螟丹中毒的海南中蜂安靜得趴在蜂籠底部，足麻痹，不活動(dòng)。再提高濃度時(shí)海南中蜂大量死亡、腹部緊縮、雙翅張開，死亡后身體變干并散發(fā)刺鼻臭味。

2.2 6種農(nóng)藥對(duì)海南中蜂的致死效果比較

表1所示為各供試農(nóng)藥對(duì)海南中蜂的致死率。由表1可知，隨著供試藥劑濃度的升高，各藥劑對(duì)海南中蜂的平均致死率升高，且24 h海南中蜂的平均死亡率都低于48 h的平均死亡率；各藥劑經(jīng)口試驗(yàn)的試驗(yàn)濃度都明顯小于接觸試驗(yàn)的試驗(yàn)濃度，這表明相同濃度時(shí)，經(jīng)口攝入這6種藥劑更容易致使海南中蜂中毒。

6種農(nóng)藥對(duì)海南中蜂經(jīng)口毒性的致死效果見表2。由表2可知，供試6種農(nóng)藥對(duì)海南中蜂的LC50值隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而變小，即6種農(nóng)藥的毒性隨著試驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增大，這表明供試的6種農(nóng)藥對(duì)海南中蜂的經(jīng)口毒性具有時(shí)間效應(yīng)。參照《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》[14-16]中關(guān)于農(nóng)藥對(duì)蜜蜂急性經(jīng)口毒性標(biāo)準(zhǔn)來(lái)劃分，其中三唑磷對(duì)海南中蜂的毒性為劇毒，3種菊酯類農(nóng)藥的毒性為高毒，殺螟丹和殺蟲雙的毒性為中毒。

6種農(nóng)藥對(duì)海南中蜂接觸毒性的致死效果見表2。由表2可知，供試6種農(nóng)藥對(duì)海南中蜂的LD50值隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而變小，即6種農(nóng)藥的毒性隨著試驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增大，這表明供試的6種農(nóng)藥對(duì)海南中蜂的接觸毒性具有時(shí)間效應(yīng)。參照Atkins的毒性等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)[14-16]中關(guān)于農(nóng)藥對(duì)蜜蜂急性接觸毒性標(biāo)準(zhǔn)來(lái)劃分，6種農(nóng)藥中除了殺蟲雙對(duì)海南中蜂的毒性為中毒外，其他5種農(nóng)藥的毒性均為高毒。

3 討論與結(jié)論

本研究表明，在供試的6種藥劑中，三唑磷對(duì)海南中蜂的經(jīng)口和接觸毒性最大，其次是菊酯類的三種農(nóng)藥，而殺蟲雙和殺螟丹的毒性最小。殺蟲雙和殺螟丹是沙蠶毒素類殺蟲劑。沙蠶毒素類殺蟲劑是20世紀(jì)60年代開發(fā)興起的一種新型有機(jī)合成仿生殺蟲劑，屬煙堿乙酰膽堿受體抑制劑，作用于昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)的突觸體，使得昆蟲神經(jīng)沖動(dòng)受阻于突觸部位而最終死亡[22-26]。試驗(yàn)過(guò)程中，用殺螟丹和殺蟲雙處理海南中蜂15 min后，海南中蜂活動(dòng)開始減少，靜伏于蜂籠底部，中毒癥狀與其他害蟲的作用相似[27]。

在海南中蜂采蜜采粉期間，如果施用本研究中6種農(nóng)藥，都可能引起海南中蜂的中毒死亡。為了避免花期海南中蜂農(nóng)藥中毒的發(fā)生，蜂農(nóng)與種植戶應(yīng)及時(shí)溝通，共同確定施藥的時(shí)間和施藥量。從而既避免害蟲爆發(fā)造成農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量與質(zhì)量的受損，又避免海南中蜂大量中毒，實(shí)現(xiàn)種植戶與蜂農(nóng)協(xié)同增產(chǎn)，互利雙贏。提高種植戶與蜂農(nóng)利用蜜蜂為農(nóng)作物授粉的積極性，促進(jìn)中國(guó)蜜蜂授粉專業(yè)化、商品化，加快實(shí)現(xiàn)中國(guó)蜜蜂授粉業(yè)的發(fā)展。

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