嚴(yán)君潔

血脂檢驗對于臨床高脂血癥和異常脂蛋白血癥的診斷及動脈粥樣硬化﹙AS﹚性心血管﹙如冠心病﹚的危險評估和防治具有重要意義，并已經(jīng)滲透應(yīng)用于其它諸多臨床相關(guān)專業(yè)疾病的研究。我國血脂、脂蛋白及其與AS關(guān)系的研究雖然起步較晚，但改革開放的20多年以來，在血脂的基礎(chǔ)與臨床研究等方面發(fā)展迅速。血脂檢驗及其臨床應(yīng)用已越來越受到臨床各學(xué)科的重視。本文旨在探討血脂檢驗的方法學(xué)，試劑的選擇原則與血脂測定的技術(shù)指標(biāo)，分析前的變異對血脂檢驗結(jié)果的影響進行淺析。

1 血脂檢驗的方法學(xué)

臨床血脂檢驗主要包括血清總膽固醇﹙TC﹚、甘油三酯﹙TG﹚、高密度脂蛋白膽固醇﹙HDL-C﹚、低密度脂蛋白膽固醇﹙LDL-C﹚、載脂蛋白A1、載脂蛋白B、脂蛋白﹙a﹚測定。

1.1血清TC測定 血清TC測定一般可分為化學(xué)法和酶法兩大類。目前國內(nèi)建議酶法如膽固醇氧化酶-過氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法作為臨床實驗室測定TC的常規(guī)方法。

1.2血清TG測定 二氯甲烷-硅酸-變色酸法是美國疾病預(yù)防與疾控中心﹙CDC﹚測定TG采用的參考方法。建議酶法〔如甘油磷酸氧化酶-過氧化物酶-4氨基安替比林和酚法〕作為臨床實驗室血清TG的常規(guī)方法。

1.3血清 HDL-C測定 超速離心結(jié)合ALBK法為HDL-C測定的參考方法。建議勻相測定法作為臨床實驗室測定血清HDL-C的常規(guī)方法。

1.4血清HDL-C測定 超速離心結(jié)合ALBK法為LDL-C測定的參考方法。建議勻相測定法作為臨床實驗室測定血清LDL-C的常規(guī)方法。

1.5血清apoA1和apoB測定 目前尚無公認(rèn)的血清apoA1和apoB測定的參考方法。建議免疫濁度法作為臨床實驗室測定血清的常規(guī)方法。

1.6血清Lp﹙a﹚測定 目前尚無公認(rèn)的血清Lp﹙a﹚測定的參考方法。建議免疫濁度法作為臨床實驗室測定血清Lp﹙a﹚的常規(guī)方法。

2 血脂檢驗試劑的選擇原則與測定的技術(shù)指標(biāo)

2.1不精密度與不準(zhǔn)確度 各實驗室進行血脂檢驗并非要求統(tǒng)一的測定方法，而是要求對同一批標(biāo)本血脂測定值取得基本一致，衛(wèi)生部檢驗中心及各省檢驗中心均要求各縣級醫(yī)療單位實驗室參加其組織的室間質(zhì)評活動。要求測定值在可允許的"不精密度"﹙用變異系數(shù)CV表示﹚及不準(zhǔn)確度﹙用偏差表示﹚范圍內(nèi)。對于TC、TG、HDC-C和LDCL-C 4項，建議不精密度應(yīng)分別不大于3%、5%、4%、4%，不準(zhǔn)確度應(yīng)盡量分別不大于±3%、±5%?！?%、±4%。對于apoA1、apoB和Lp﹙a﹚3項，建議不精密度應(yīng)分別不大于3%、3%和4%，不準(zhǔn)確度應(yīng)分別不大于±5%、±5%和±10%。

2.2靈敏度 酶法測定血清TC顯色劑用酚時，TC5.17mmoL∕L時的吸光度約0.30～0.35，故A500nm=0.005時的TC濃度約0.08nmol/L.酶法測定TG靈敏度為2mmol/LTG的吸光度A500nm≧0.2.勻相測定法測定HDL-C、LDL-C時，最小檢測水平至少為0.01mmol/L。免疫濁度法測定血清apoA1、apoB檢測下限至少為0.5g/L，Lp﹙a﹚至少為5mg/L。

2.3可檢測上線 酶法測定血清TC血清與酶試劑用量之比為1：100時，測定上線為13mmol/L。酶法測定TG線性至少應(yīng)達(dá)11.3mmol/L。勻相測定法測定HDL-C、LDL-C時線性至少分別應(yīng)達(dá)2.59mm/L和7.77mmol/L。免疫濁度法測定血清apoA1、apoB線性至少不低于2.0g/L，Lp﹙a﹚至少應(yīng)達(dá)800mg/L。

2.4干擾因素 酶法測定TC時，血紅蛋白高于2g/L會引起正干擾，膽紅素﹥0.1g/L時有明顯負(fù)干擾。酶法測定TG干擾因素與膽固醇測定類同。膽紅素﹥100umol/L時出現(xiàn)負(fù)干擾。血紅蛋白的干擾是復(fù)雜的。它本身的紅色會引起正干擾，溶血后，紅細(xì)胞中的磷酸酶可水解磷酸甘油產(chǎn)生負(fù)干擾。當(dāng)Hb﹤1g/L時反映為負(fù)干擾，Hb﹥1g/L時反映出正干擾，但Hb≤2g/L時干擾不顯著。明顯溶血標(biāo)本不宜作TG測定。TG﹤5.65mmol/L、膽紅素﹤513umol/L、Hb﹤5g/L時，對勻相測定法測定HDL-C、LDL-C，免疫濁度法測定血清apoA1、apoB和Lp﹙a﹚測定結(jié)果基本無干擾。

2.5試劑穩(wěn)定性 干粉試劑未開瓶2～8℃應(yīng)至少穩(wěn)定1年。復(fù)溶后的膽固醇和TG酶試劑在2～8℃應(yīng)至少穩(wěn)定兩天。在此期間出現(xiàn)肉眼可辨的粉紅色建議不要使用。液體試劑未開封的試劑盒在2～8℃應(yīng)至少穩(wěn)定6個月，開封后應(yīng)至少可保存1個月。

2.6反應(yīng)速度 酶法測定血清TC反應(yīng)到達(dá)終點37℃不應(yīng)超過5min。酶法測定TG37℃不應(yīng)超過10min.勻相測定法測定HDL-C和LDL-C反應(yīng)到達(dá)終點時間37℃不應(yīng)超過10min。免疫濁度法測定血清apoA1、apoB和Lp﹙a﹚可根據(jù)自動分析儀反應(yīng)曲線確定讀取終點時間，一般以8～10min為宜。

3 樣本的采集與處理

3.1受檢者的準(zhǔn)備 除TC測定不一定用空腹血外，測定TG、Lp與apoA1、apoB時受檢者﹙體檢對象或患者﹚應(yīng)在禁食﹙可少量飲水﹚至少12h后抽血。24h內(nèi)不飲酒，以免影響TG水平。對于體檢對象抽血前應(yīng)有兩周時間保持平時的飲食習(xí)慣，近期內(nèi)體重穩(wěn)定，無急性病、外傷、手術(shù)等意外情況。妊娠后期各項血脂指標(biāo)都會增高，應(yīng)在產(chǎn)后終止哺乳后3個月檢查才能反映其基本血脂水平。

3.2靜脈采血 除非是臥床的患者，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外的分布，影響血脂水平。例如站立5min可使血脂濃度提高5%，15min提高16%，故在抽血前至少應(yīng)靜坐5min。靜脈穿刺過程止血帶使用不應(yīng)超過1min。靜止阻滯5min可使TC增高10%～15%。

3.3抗凝劑 我國生化實驗室多用血清作血脂分析。如用血漿，多主張用EDTA.2Na抗凝劑﹙1mg/ml血﹚，EDTA抗凝血漿中的TC和TG水平比血清約低3%。EDTA濃度越高血漿中TC和TG偏低越明顯。

3.4標(biāo)本處理 血標(biāo)本應(yīng)盡快送往檢驗科，室溫下放置30～45min后離心，放置時間不得超過3h。血清必須吸出，轉(zhuǎn)移至有蓋小試管中﹙或有封口膜防止水分揮發(fā)﹚，如不能當(dāng)天測定，可暫存4℃冰箱，至少可穩(wěn)定4d。如需長期保存，用作TC測定者-20℃已足夠，用作TG、Lp、apo測定者標(biāo)本最好保存在-70℃，不要反復(fù)冰凍與融化。編輯/劉小燕