楊丹

【摘要】培養(yǎng)基是微生物檢驗(yàn)中一項(xiàng)不可缺少的關(guān)鍵工具，培養(yǎng)基的質(zhì)量直接影響檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。本文就培養(yǎng)基的制備過程、理化和微生物學(xué)指標(biāo)控制、其他影響因素、質(zhì)控記錄等方面，討論微生物檢驗(yàn)中培養(yǎng)基的質(zhì)量控制措施。

【關(guān)鍵詞】微生物檢驗(yàn)；培養(yǎng)基；質(zhì)量控制

【中圖分類號(hào)】R-0 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1671-8801（2014）10-0348-02

微生物檢驗(yàn)涉及飲用水、食品、公共場(chǎng)所、食物中毒等方面，其結(jié)果的準(zhǔn)確性直接關(guān)系到臨床用藥日常監(jiān)督的科學(xué)性、權(quán)威性以及疾病預(yù)防與控制的有效性。其中培養(yǎng)基作為微生物檢驗(yàn)中一項(xiàng)不可缺少的關(guān)鍵因素，對(duì)其進(jìn)行有效的質(zhì)量控制是保證微生物檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的重要前提。目前我國還沒有制定一個(gè)系統(tǒng)全面的培養(yǎng)基質(zhì)量控制國家標(biāo)準(zhǔn)，以致培養(yǎng)基質(zhì)量參差不齊，影響微生物檢驗(yàn)結(jié)果。本文從以下幾方面對(duì)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制作一闡述，為有效控制培養(yǎng)基質(zhì)量，提高微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量作參考。

1 培養(yǎng)基的制備過程控制

1.1 稱量

稱量工具與設(shè)備事先應(yīng)經(jīng)計(jì)量認(rèn)證校準(zhǔn)；稱量時(shí)要用專用的角匙，以防交叉污染。稱量動(dòng)作要緩慢，防止吸入具有刺激性的培養(yǎng)基粉末。由于培養(yǎng)基中的瓊脂粉末具有吸濕性，吸濕后致使自身酸化，影響pH值，因此稱量環(huán)境應(yīng)配置溫濕度計(jì)，并在濕度較低的環(huán)境情況下進(jìn)行。量取水時(shí)應(yīng)使用權(quán)威計(jì)量部門校準(zhǔn)的帶刻度的量筒和移液管，不要使用外吹式移液管，嚴(yán)禁嘴吸移液管。

1.2 溶解

復(fù)水的容器一般采用清潔無污染的中性硬料玻璃、搪瓷或不銹鋼制品。復(fù)水時(shí)所用的容器的大小要大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上，防止在加熱溶解過程中培養(yǎng)基溢出[1]。所選用的水必須是專用純凈水或者經(jīng)消毒過后的無菌水[2]。含有瓊脂粉的培養(yǎng)基在加熱溶解之前可以先浸泡數(shù)分鐘，加熱過程中邊攪拌邊觀察，直到玻棒上的培養(yǎng)基呈膠狀液體，否則配置好的培養(yǎng)基會(huì)發(fā)生分層。

1.3 分裝和滅菌

一般將培養(yǎng)基裝入試管或三角瓶。固體培養(yǎng)基約為試管高度的1/5，半固體培養(yǎng)基約為試管高度的1/3為宜，而裝入三角瓶的培養(yǎng)基以不超過其容積的一半為宜。分裝后立即滅菌，避免微生物生長繁殖，不僅消耗養(yǎng)分，還會(huì)改變培養(yǎng)基的酸堿度。滅菌前，在所有滅菌物品上多放幾層厚報(bào)紙，可以有效減少冷凝水的產(chǎn)生，避免冷凝水打濕棉塞而造成污染。培養(yǎng)基滅菌要完全，參照培養(yǎng)基說明書進(jìn)行，滅菌時(shí)間不能過長或多次重復(fù)滅菌，以免增加酸性反應(yīng)。

2 理化指標(biāo)控制

2.1 pH值測(cè)定

滅菌前后都需要進(jìn)行pH值測(cè)定。液體培養(yǎng)基的pH值可采用連接可滲透陶器型液體接頭的電極測(cè)定，固體培養(yǎng)基可用帶有針式電極的pH計(jì)測(cè)定pH值。當(dāng)測(cè)得的pH值與配方中規(guī)定的pH值的差異小于0.5個(gè)單位時(shí)，可用1N NaCl或HCl調(diào)節(jié)pH至規(guī)定值。如果差異大于0.5個(gè)單位時(shí)，應(yīng)棄去此批培養(yǎng)基并尋找原因，通常是由于水質(zhì)不佳、培養(yǎng)基變質(zhì)或配制方法不當(dāng)所致。

2.2 凝膠強(qiáng)度測(cè)定

凝膠強(qiáng)度也是一個(gè)重要的指標(biāo)，滅菌條件特別是pH會(huì)影響凝膠強(qiáng)度。Gelometer（Marine Colloids Inc.，2，Edison Place，Springfield，NJ 0708 1，U.S.A.）和the LFRA Texture Analyser（C.S.Stevens&Son Ltd.Dolphin Yard，HolywellHill，St.Albans，Herts，U.K.）均能提供良好的測(cè)量性能。商品干燥培養(yǎng)基的凝膠強(qiáng)度控制在450-650 g/cm2之間，半固體培養(yǎng)基的適宜凝膠強(qiáng)度在90 g/cm2 左右。

2.3 水分

取適量培養(yǎng)基，置鋁箔盤中，以110℃.min-1加熱烘烤至恒重，失重百分比即為干粉培養(yǎng)基中含有的水分比例，失重百分比應(yīng)≤7%[3]。

3 微生物學(xué)指標(biāo)控制

3.1 生長率和選擇因子

（1）固體培養(yǎng)基采用改良的Miles-Misra法（定量方法），計(jì)算生長率P=Ns/No（No=對(duì)照培養(yǎng)基的菌落數(shù)，Ns=試驗(yàn)培養(yǎng)基的菌落數(shù)）。非選擇性培養(yǎng)基PR≥0.7，選擇性培養(yǎng)基PR≥0.1。選擇因子SF=Do-Ds，Do是對(duì)照培養(yǎng)基上至少10個(gè)菌落的最高稀釋度，Ds是試驗(yàn)培養(yǎng)基上至少l0個(gè)菌落的最高稀釋度。SF，Do，和Ds采用log10為單位來表示。非目標(biāo)微生物的SF≥2。

（2）液體培養(yǎng)基采用目標(biāo)和非目標(biāo)微生物的定量稀釋方法計(jì)算生長率PR和選擇因子SF，方法同前述[4]。

3.2 無菌試驗(yàn)

每批配好的培養(yǎng)基均需進(jìn)行無菌試驗(yàn)，以確保滅菌效果。配制大量培養(yǎng)基，可采取抽樣方法進(jìn)行選取任意10支的量做無菌試驗(yàn)，少于100份樣本選取5-10支做無菌試驗(yàn)。確定無微生物生長方可使用。

4 其他影響因素

4.1 一次性消耗品

一次性消耗品如一次性培養(yǎng)皿、一次性移液管、均質(zhì)袋、封口膜、脂棉、試管帽（塞）、化學(xué)滅菌指示帶等，也將影響培養(yǎng)基的配制質(zhì)量，必須保持干凈、無菌及精確。每年至少檢查1次，以確保培養(yǎng)基配制的質(zhì)量及微生物檢測(cè)的質(zhì)量[5]。

4.2 培養(yǎng)基的標(biāo)識(shí)

已配制好的培養(yǎng)基應(yīng)正確標(biāo)識(shí)，內(nèi)容包括培養(yǎng)基名稱、用途、儲(chǔ)存條件、有效期或推薦的儲(chǔ)存期限、無菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果、配制日期、配制者和復(fù)核者，保證培養(yǎng)基在使用、貯存過程中不發(fā)生混淆，防止錯(cuò)用。

5 培養(yǎng)基質(zhì)控記錄

培養(yǎng)基質(zhì)控記錄包括入庫登記記錄、配制記錄、高壓滅菌記錄、技術(shù)驗(yàn)收記錄及評(píng)估報(bào)告、菌種使用記錄、培養(yǎng)箱使用記錄等，各種記錄應(yīng)認(rèn)真填寫并制成檔案保存。

6 討論

培養(yǎng)基的質(zhì)量控制過程并不復(fù)雜，但在質(zhì)控過程中需要考慮到每一個(gè)環(huán)節(jié)，任一環(huán)節(jié)的疏忽都有可能導(dǎo)致培養(yǎng)基質(zhì)量不過關(guān)，最終影響微生物檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，給檢驗(yàn)結(jié)果帶來誤差。因此，我們應(yīng)系統(tǒng)全面的做好培養(yǎng)基質(zhì)量控制，確保培養(yǎng)基質(zhì)量，從而提高微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)：

[1]王綏家， 黃宏星. 微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基的質(zhì)量控制[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011， （20）： 112-114.

[2]景曉敏. 微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基質(zhì)量控制探討[J].中國實(shí)用醫(yī)藥， 2013， 8（9）：250.

[3] 馬仕洪， 楊美琴， 劉鵬， 等.《中國藥典》2010年版對(duì)照培養(yǎng)基的研制與應(yīng)用[J].中國藥事， 2012， 26（8）：847-851.

[4]The International Organization for Standardizatin.ISO/TS 11133-2， 2003.

[5] 汪穗福. 微生物檢測(cè)驗(yàn)證技術(shù)[M]. 北京：： 中國醫(yī)藥科技出版社， 2005.