崔倩等

摘要[目的]建立青稞若葉青汁中黃酮含量的測(cè)定方法。[方法]利用超聲波提取樣品中的黃酮類物質(zhì)，采用比色法對(duì)青稞若葉青汁中總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定。[結(jié)果]試驗(yàn)得出，該方法的回歸方程為：A=15.451C-0.122 5，R2=0.991 3，線性范圍是0.031 41～ 0.070 68 mg/ml，加樣回收率為98.5%～102.1%。[結(jié)論]該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速，穩(wěn)定性符合要求，可用于測(cè)定青稞若葉青汁總黃酮的含量。

關(guān)鍵詞青稞若葉青汁；總黃酮；分光光度法

中圖分類號(hào)S512.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）36-13043-02

Abstract[Objective] To establish a method for determination of flavonoids in naked barley young leaf powder. [Method] Total flavonoid was extracted by ultrasonic power， and its content was determined by spectrophotometrically. [Result] The regression equation for flavonoid determination was A = 15.451C - 0.122 5， R2 = 0.991 3， with a linear range of 0.031 41-0.070 68 mg/ml， and a recovery rate of 985%-102.1%. [Conclusion] The method is accurate， simple， rapid， stable， and can be used to determine total flavonoid content in naked barley young leaf powder.

Key wordsNaked barley young leaf powder； Total flavonoid； Spectrophotometry

現(xiàn)今經(jīng)濟(jì)迅猛發(fā)展，人們的生活水平日益提高，但由于生活節(jié)奏過(guò)快、壓力過(guò)大、飲食的不平衡，導(dǎo)致越來(lái)越多健康問(wèn)題的出現(xiàn)，如高血脂、肥胖、便秘等。我國(guó)成人血脂異?；疾÷蕿?8.6%，估計(jì)全國(guó)血脂異常人數(shù)約1.6億。不同類型的血脂異?，F(xiàn)患率分別為：高膽固醇血癥2.9%，高甘油三酯血癥11.9%，低高密度脂蛋白血癥7.4%。另外還有人血膽固醇邊緣升高[1]。對(duì)這些疾病的治療和預(yù)防是亟需解決的問(wèn)題。

大麥若葉青汁是近年來(lái)十分暢銷的一種保健品，因其在降血脂、降血壓等方面的確切效果，受到市場(chǎng)的青睞[2]。大麥（Hordeum vulgare）為禾本科大麥屬植物，大麥若葉是大麥生長(zhǎng)到20～30 cm的幼苗，其中含有可以降低血漿膽固醇的活性物質(zhì)[3]，此外大麥若葉還含有大量黃酮、多種維生素及礦物質(zhì)、豐富的食物纖維、葉綠素和植物蛋白等。

青稞為大麥的變種（H.vulgare var.nudum），《本草拾遺》、《晶珠本草》記載，其有下氣寬中、壯精益力、除濕發(fā)汗、止瀉等功效。植物化學(xué)分類學(xué)認(rèn)為，親緣關(guān)系越近的植物，它們所含的化學(xué)成分就越相似，越可能有相似的療效。筆者進(jìn)行的藥效學(xué)試驗(yàn)證實(shí)，青稞若葉具有潤(rùn)腸通便、降血脂、降血糖的功效。上海阿敏生物技術(shù)有限公司建立了青稞若葉青汁生產(chǎn)線。筆者用比色法對(duì)青稞若葉青汁產(chǎn)品中的總黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定。

1材料與方法

1.1儀器與試藥

主要儀器：HP8453型紫外分光光度儀，Hewett Packard；超聲波清洗機(jī)，Elma；CP225D電子天平，Sartorius；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，EYELA。

原料與試劑：青稞若葉青汁，上海阿敏生物技術(shù)有限公司；大麥若葉青汁，興化市綠寶食品有限公司；蘆丁對(duì)照品，中國(guó)藥品生物檢定所；乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉，均為分析純；純化水。

1.2樣品的制備

分別稱取5.0 g青稞若葉青汁和大麥若葉青汁粉末，加50 ml 75%乙醇浸泡2.0 h后，在45 ℃下超聲波40 kHz時(shí)超聲處理40 min，趁熱過(guò)濾；過(guò)濾后將濾渣再按上述方法超聲處理1次，過(guò)濾；合并濾液，在45 ℃下減壓回收乙醇，水浴濃縮得浸膏，用75%乙醇溶解并定容至25 ml，即得樣品溶液。

1.3含量測(cè)定[4]

1.3.1供試品溶液的制備。

精密吸取青稞樣品溶液2.0 ml，置于25 ml容量瓶中，加75%乙醇適量超聲溶解，冷卻至室溫，定容至刻度，搖勻，即得青稞供試品溶液。同樣方法制得大麥若葉供試品溶液。

1.3.2對(duì)照品溶液的制備。

精密稱取蘆丁對(duì)照品8.49 mg，置50 ml容量瓶中，加75%乙醇適量，超聲使之溶解；冷卻至室溫，并用75%乙醇定容至刻度，搖勻，即得蘆丁對(duì)照品溶液（0.169 8 mg/ml）。

1.3.3測(cè)定波長(zhǎng)的選擇。

精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液3.0 ml，置于10 ml容量瓶中；加5% NaNO2溶液0.3 ml，搖勻，放置6 min；加10% Al（NO3）3溶液0.3 ml，搖勻，放置6 min；加入4%NaOH溶液4.0 ml，再用75%乙醇定容并搖勻，放置10 min；以75%乙醇作為溶劑空白，在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描。

1.3.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。

精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液2.0、25、3.0、3.5、4.0 ml分別置于10 ml容量瓶中，加5% NaNO2溶液0.3 ml，搖勻，放置6 min；加10% Al（NO3）3溶液0.3 ml，搖勻，放置6 min；加4% NaOH溶液4.0 ml，并用75%乙醇定容至刻度，搖勻，放置10 min；以75%乙醇作為溶劑空白，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在波長(zhǎng)507 nm處測(cè)定吸光度。以濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.5精密度考察。

精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液3.0 ml，按“1.3.4”項(xiàng)下方法操作，于507 nm波長(zhǎng)處連續(xù)測(cè)定5次，計(jì)算變異系數(shù)。

1.3.6重復(fù)性考察。

精密吸取超聲提取的青稞若葉青汁樣品溶液5份，按“1.3.1”下方法平行制備青稞供試品溶液。再精密吸取青稞供試品溶液5.0 ml，按“1.3.4”項(xiàng)下方法操作，于波長(zhǎng)507 nm處測(cè)定吸光度。

1.3.7穩(wěn)定性考察。

精密吸取超聲提取的青稞若葉青汁供試品溶液5.0 ml，按“1.3.4”項(xiàng)下方法操作顯色，分別在放置20、25、30、35、40、60 min后，于波長(zhǎng)507 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值。

1.4供試品含量測(cè)定

取“1.3.1”項(xiàng)下制備的供試品溶液50 ml，按“1.3.4 ”中顯色方法操作，測(cè)定吸光度。將測(cè)得樣品吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，計(jì)算供試品中總黃酮含量。

1.5加樣回收試驗(yàn)

精密稱取青稞樣品5.000 g，按照“131”的方法處理，將得到的總黃酮提取物加入32.43 mg的蘆丁對(duì)照品，按“1.4”項(xiàng)下的方法進(jìn)行操作，按公式K=（A-B）/C×100%（A為加入標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的樣品測(cè)得量，B為樣品中該物質(zhì)的測(cè)得量，C為加入的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量），計(jì)算回收率。

2結(jié)果與分析

2.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇全波長(zhǎng)結(jié)果表明，顯色后的溶液在507 nm處有最大吸收，因此，該試驗(yàn)選擇507 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

3討論

黃酮的含量測(cè)定有分光光度法、薄層色譜法、高效液相色譜法、超臨界流體色譜法、毛細(xì)管電泳法等方法，其中分光光度法比較普及，設(shè)備價(jià)格便宜，簡(jiǎn)單易行，試驗(yàn)精度和準(zhǔn)確度符合企業(yè)生產(chǎn)需求，一般的分析人員都會(huì)操作。因而該試驗(yàn)選擇了鋁鹽比色法對(duì)青稞若葉青汁中的總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定。其基本原理為黃酮類化合物與Al3+ 在堿性條件下反應(yīng)生成紅色絡(luò)合物，顏色的深淺與黃酮的含量成一定的比例關(guān)系，在一定的濃度范圍內(nèi)符合郎伯比耳定律，可以定量測(cè)定。筆者以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)溶液，在波長(zhǎng)507 nm 處進(jìn)行比色測(cè)定黃酮類化合物的含量。

由于供試液的顏色較深，在波長(zhǎng)507 nm 處有一定的吸收，所以增加供試樣品的空白試驗(yàn)。測(cè)得的供試品吸光度，減去這個(gè)數(shù)值才是樣品中黃酮的吸光度值。

參考文獻(xiàn)

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[2] 王小雨.第四屆中國(guó)國(guó)際保健博覽會(huì)引領(lǐng)中國(guó)健康經(jīng)濟(jì)的發(fā)展[J].中國(guó)保健，2004（12）：11.

[3] 大竹英俊，野中涼代，澤田淑子，等.大麥若葉青汁成分の研究-ラットの食餌による高コレステロール血癥に対する影響[J].藥學(xué)雜志，1985，4（13）：1052.

[4] 晁志，劉傳明，張宏偉，等.益母草藥材中總黃酮和蕓香甙的含量測(cè)定[J].中藥藥理與臨床，2000，16（S）：148-149.