薛雅光　薛雅峰

摘要：目的：采用反相高效液相色譜法同時測定抗癆膠囊中巖白菜素的含量。方法：采用AgiLentC18（4.6×250mm，5μm）色譜柱，流動相為乙腈-水（9：91），流速為0.8 mL·min-1，檢測波長275nm，柱溫為30℃。結果：巖白菜素進樣量在0.1035～0.9315mg 范圍內，線性關系良好；平均回收率（n=6）分別為100.3% ，RSD分別為1.0%。結論：本法簡便、準確，重復性好，可為抗癆膠囊的質量控制提供實驗依據(jù)。

關鍵詞：抗癆膠囊 巖白菜素 高效液相色譜法

中圖分類號：R927.2 文獻標識碼：A 文章編號：1672-5336（2014）06-0025-03

Abstract：Objective： To develop an RP-HPLC method for the determination of bergenin in KangLao capsuLe. Methods ： The separation was performed on a Agilent C18 coLumn （4.6mm×250 mm，5μm） with a mobiLe phase of methylcyanide-water （9∶91） . The fLow rate was 0.8 mL·min-1， and the detecting wavelength was 275nm；coLumn temperature of 30℃.ResuLts ： The Linear ranges of bergenin was 0.1035 to 0.9315mg；the average recovery of was 100.3 % （RSD= 1. 0%）.ConcLusion ：The method is simpLe and accurate with good reproducibiLity . It can be used to controL the quaLity of KangLao capsuLe .

Key Words： KangLao capsule bergenin，HPLC

矮地茶為紫金?？浦参镒辖鹋rdisia japonica（Thunb.）BLume的干燥全草。全株含揮發(fā)油0.1%～0.2%，去油后的殘渣中分離得巖白菜素、紫金牛酚、紫金牛素等。具有清熱解毒，止咳化痰。用于小兒哮喘，肺結核，肝炎。所含主要成分巖白菜素具有止咳，鎮(zhèn)痰祛痰[1]等藥理活性。有關巖白菜素含量的測定方法，2005年版《中國藥典》（一部）收載了矮地茶藥材中的含量測定方法[2]。經過系統(tǒng)的研究，筆者建立了適用于抗癆膠囊測定矮地茶中的巖白菜素含量測定的反相高效液相法[3-5]，控制本制劑的內在質量，具有合理性，且方法易于操作，結果準確，重現(xiàn)性良好。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試藥

巖白菜素對照品（由中國藥品生物制品檢驗所提供）批號：111532-2000202，規(guī)格：供含量測定用。甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水。

1.1.2 主要儀器

日本島津LC-2010C高效相色譜儀。

1.2 試驗方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：AgiLentC18（4.6×250 mm，5μm），流動相：乙腈-水（9：91），檢測波長：275 nm，柱溫：30℃，進樣量10μL。

1.2.2 測定波長的選擇

取巖白菜素對照品的甲醇溶液，經UV-2201紫外-可見分光光度計在200nm～350nm范圍內掃描，巖白菜素在275nm波長處，有最大吸收（見圖1），參考中國藥典2005年版一部中矮地菜藥材含量測定項下的有關規(guī)定，選擇275nm為本實驗的測定波長。

1.2.3 對照品溶液制備

對照品溶液的制備 精密量取巖白菜素對照品適量，用甲醇制成每1mL含50μg的溶液，即得。

1.2.4 供試品溶液的制備

取裝量差異項下的本品，研細，取細粉0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲處理（功率200W頻率40kHz）60min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45μm濾膜濾過，即得。

1.2.5 陰性樣品溶液的制備

按處方（不含矮地茶藥材）比例及生產工藝配制陰性，同1.2.4項下方法操作，制得陰性樣品溶液。

精密吸取巖白菜素對照品溶液，供試品溶液，陰性樣品10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果陰性對照色譜在與巖白菜素峰相應的保留時間附近無干擾峰，（見圖2）。

1.2.6 線性關系考察

分別精密吸取對照品溶液（0.1035 mg·mL-1）1、2、3、4、5、6、7、8、9μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，以進樣量（μg）為橫坐標，峰面積值為縱坐標，繪制標準曲線，巖白菜素的回歸方程為Y=1755025.15X+9836.84，r=1.0000。結果表明：巖白菜素進樣量在0.1035～0.9315mg，與峰面積具有良好的線性關系。

1.2.7 精密度試驗

取同一供試品溶液（批號：060407），重復進樣6次，測定峰面積。結果巖白菜素峰面積的RSD（n=6）分別為0.4%，表明精密度良好，理論板數(shù)不低于1500。

1.2.8 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液（批號：060407），分別在0、4、16、28、46、96h測定，巖白菜素峰面積的 RSD（n=6）分別為1.5%。說明供試品溶液在96h內基本穩(wěn)定。

1.2.9 重復性試驗

精密稱取同一批號（批號：060407）的樣品共6份，按前述制備供試品方法制備，依法測定。結果巖白菜素含量平均值（n=6）分別為2.542mg/粒，RSD為1.7%，表明該方法重復性良好。

1.2.10 回收率試驗

精密稱取已測知含量（批號：060407，含量為2.542 mg/粒）的樣品約0.25g，置具塞錐形瓶中，每份精密加入巖白菜素對照品溶液（53.45μg·mL-1）25mL，再精密加入甲醇25mL，超聲處理（功率200W頻率40kHz）60min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45μm濾膜濾過，即得。共處理 6份，依正文方法獨立測定六次，計算回收率，結果見表1。

如表1所示，測得巖白菜素的平均回收率為100.3%，RSD=1.0%。結果表明本法回收率較好，準確度較高。

2 結果

測定 分別對不同批次的抗癆膠囊中巖白菜素的含量進行測定，測定結果見表2。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

對巖白菜素進行光譜掃描，根據(jù)掃描結果，并參考2005年版中國藥典中矮地茶測定項下的檢測波長，故選擇275nm為測定波長。

3.2 供試品制備方法的選擇

分別采用樣品0.5g，精密加入甲醇50mL，分別超聲50、60、70min，制備供試品溶液依據(jù)實驗結果，超聲60 min測定結果較高且時間較短，故選擇超聲60min提取樣品。

3.3 流動相的選擇

曾經試驗流動相為甲醇-水（20：80），此流動相的分離效果沒有乙腈-水（9：91）流動相分離效果好，故選擇乙腈-水（9：91）為流動相。

參考文獻

[1] 王剛，麻兵繼.巖白菜素的研究概況[J].安徽中醫(yī)學院學報，2002，21（6）：59.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典[s].一部.北京：化學工業(yè)出版社，2005：251.

[3] 徐玲，馮海龍.薄層掃描測定垂陰茶顆粒中巖白菜素的含量[J].中藥材，2005，28（4）：343.

[4] 徐愚聰，劉仲義，王安穎.高效液相色譜法楓葉咳喘平口服液中巖白菜素的含量[J].華西藥學雜志，1994，9（1）：63-64.

[5] 陳彥，賈曉斌.清肺顆粒紫金牛提取工藝研究[J].中成藥，2002，24（7）：552.