凌 云

(如東縣人民醫(yī)院 藥劑科,江蘇 如東 226400)

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HPLC法測定不同批號復方玄駒膠囊中淫羊藿苷含量

凌 云

(如東縣人民醫(yī)院 藥劑科,江蘇 如東 226400)

目的：建立反相高效液相色譜法測定不同批次復方玄駒膠囊中淫羊藿苷含量的方法。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱為BDS HYPERSIL-C18(250mm×4.6mm，5μm)，流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液(58∶42)，流速為1.0mL/min，檢測波長為270nm，進樣量為20μL，柱溫為30℃。結(jié)果：淫羊藿苷在進樣量0.4995～4.995μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系；精密度、穩(wěn)定性、重復性試驗的RSD均小于3%；平均加樣回收率為98.2%，RSD為2.19%(n=6)。結(jié)論：該實驗所建立的方法簡便、準確、重復性好，可用于復方玄駒膠囊的質(zhì)量控制。

復方玄駒膠囊；高效液相色譜法；淫羊藿苷；含量測定

復方玄駒膠囊為施強藥業(yè)集團生產(chǎn)的國家級保護藥，主要由玄駒、淫羊藿、枸杞子和蛇床子等四味藥材組成，具有溫腎、壯陽、益精、祛風濕之功效[1]。臨床主要用于治療腎陽虛型陽痿、陽痿不舉、舉而不堅、少腹陰器發(fā)涼、精冷滑泄、神疲乏力、腰膝酸軟、性欲低下以及免疫調(diào)節(jié)和抗炎等[2-4]。淫羊藿苷反應該制劑質(zhì)量是否達標，筆者建立了復方玄駒膠囊中淫羊藿苷的HPLC測定方法，并測定了8個不同批次的制劑，以期建立該制劑的質(zhì)量標準。

1 材料

Waters2695高效液相色譜儀(美國Waters公司)；Waters 2996 PAD檢測器(美國Waters公司)；Empower化學工作站；色譜柱：BDS HYPERSIL-C18(250mm×4.6mm，5μm)；十萬分之一電子天平、百萬分之一電子天平(METTLER TOLEDOAT，瑞士)；BUCHI R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(步琪公司，瑞士)；KQ5200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器公司，昆山)。

復方玄駒膠囊(施強藥業(yè)集團有限公司，批號見表1)；淫羊藿苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110737-200415)；甲醇：色譜純(江蘇漢邦科技有限公司)；水：重蒸餾水(Milli-Q純水器)；磷酸：分析純(國藥集團有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：BDS HYPERSIL-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇—0.1%磷酸水溶液(58∶42)；流速：1.0mL/min；柱溫：30 ℃；紫外檢測波長270nm；進樣量為20μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液制備 復方玄駒膠囊取內(nèi)容物研細，精密稱定0.3 g，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇25mL，稱定重量，置水浴上加熱回流提取30min，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10mL，置蒸發(fā)皿中，蒸干，殘渣加水20mL使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙醚振搖提取3次，每次20mL，棄去乙醚液，水層用醋酸乙酯—水飽和正丁醇(2∶1)的混合溶液振搖提取5次(20mL、20mL、15mL、15mL、15mL)，合并提取液，蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，并定量轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2 對照品溶液制備 精密稱取在105℃干燥至恒重的淫羊藿苷對照品8mg，置50mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2mL，置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1mL中含淫羊藿苷32μg)對照品儲備液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

取“2.2”項下對照品溶液、供試品溶液適量，按照“2.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜，詳見圖1。在該色譜條件下，淫羊藿苷的保留時間為34.171。

圖1 淫羊藿苷高效液相色譜

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取“2.2.2”項下淫羊藿苷對照品溶液0.049 95mg·mL-1、0.099 9mg·mL-1、0.199 8mg·mL-1、0.299 7mg·mL-1、0.399 6mg·mL-1、0.499 5mg·mL-1各10μL注入液相色譜儀，按照“2.1”項下色譜條件進樣測定，以進樣量X(μg)為橫坐標，峰面積為縱坐標，求得淫羊藿苷回歸方程為：Y=2×106X-45 228，r =0.999 5。表明淫羊藿苷在0.499 5～4.995μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

精密吸取淫羊藿苷對照品溶液(0.111 2mg·mL-1)適量，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，每次10μL，結(jié)果顯示淫羊藿苷的峰面積RSD為2.4%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取“2.2.1”項下同一批號供試品溶液，分別于0、4、8、12、16、24h，按“2.1”項色譜條件進樣，依法進行測定。結(jié)果淫羊藿苷RSD為1.96%，表明供試品溶液在24h內(nèi)質(zhì)量基本穩(wěn)定。

2.7 重復性試驗

取同批號樣品6份，按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，結(jié)果顯示淫羊藿苷RSD為2.49%，表明本方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的復方玄駒膠囊，共6份，約0.6g，分別加入對應含量淫羊藿苷對照品，按供試品制備方法制得供試品溶液，注入液相色譜儀，計算回收率，淫羊藿苷平均回收率為98.2%，RSD為2.19%。

2.9 樣品含量測定

精密稱取8個不同批號的樣品，按“2.2.1”項方法制備供試品溶液，并按“2.1”項色譜條件進樣測定，計算8批樣品中淫羊藿苷含量，結(jié)果見表1。

表1 樣品含量測定結(jié)果 (mg/g , n=8)

3 討論

3.1 提取方法的選擇

本試驗分別比較了索氏提取、水浴加熱回流提取、超聲提取三種不同提取方法。同等條件下，通過HPLC圖譜驗證發(fā)現(xiàn)水浴加熱回流提取效果較好。同時本實驗考察了30%乙醇、50%乙醇、乙醇提取，經(jīng)HPLC檢測，表明用乙醇提取效果較好；因此本實驗選擇乙醇作為提取溶劑，進一步對不同提取時間進行考察，通過HPLC驗證發(fā)現(xiàn)乙醇加熱回流30min效果最好。

3.2 流動相的選擇

本試驗分別考察了甲醇—水、乙腈—水、甲醇—0.1%磷酸水、乙腈—0.1%磷酸水4個溶劑系統(tǒng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲醇—0.1%磷酸水作為流動相分離效果較好。

3.3 色譜柱的選擇

本試驗，比較了兩種不同的色譜柱，分別為SYMEMETRYTM-C18(150mm×3.9mm,5μm)和BDS HYPERSIL-C18(250nm×4.6nm，5μm)，結(jié)果表明，前者不能使酚酸類成分與樣品中其它成分達到理想分離效果，后者分離效果較好。

3.4 質(zhì)量控制建議

通過本次試驗發(fā)現(xiàn)，淫羊藿在本制劑中占有重要的地位，通過測定淫羊藿苷成分來控制其制劑質(zhì)量具有一定的代表性，但同時隨著制劑評價體系的逐漸完善，還需增加某些特征性成分作為評價該制劑質(zhì)量的依據(jù)。

[1] 王欣，蘇晶石，楊可為，等.復方玄駒膠囊治療前列腺炎療效觀察[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2011，21(10)：2045-2047.

[2] 黃旭元，翁一鳴，陳斌，等. 復方玄駒膠囊治療脾腎陽虛少、弱精子癥的臨床研究[J].中國男科學雜志， 2010，24(4)：54-57.

[3] 賈偉，薛京，王永新，等.復方玄駒膠囊免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用的研究[J].中草藥，2003，34(2)：154-156.

[4] 張訊，梁季鴻，梁世坤，等.復方玄駒膠囊聯(lián)合他莫西芬治療特發(fā)性少精子癥的臨床研究[J].中華男科學雜志，2012，18(7)：661-664.

(責任編輯：宋勇剛)

Determination of Icariin in Fufang Xuanju Jiaonang by HPLC

Ling Yun

(Department of Pharmacy ,Rudong Country People’s Hospital , Jiangsu 226400, China )

Objective:To develop a method for the content determination of Icariin in Fufang Xuanju Jiaonang . Methods:HPLC method was adopted. The determination was performed on BDS HYPERSIL-C18column with mobile phase consisted of methanol-0.1% phosphoric acid-water (58∶42), at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 270 nm, and the sample size was 20μL. The column temperature was 30℃. Results:Results:The linear range were 0.4995～4.995μg for Icariin, respectively RSD of precision , stability , and reproducibility test were lower than 3%. The average recoveries were 98.2% (RSD=2.19%,n=6).Conclusion:The method is simple , accurate , reproducible and suitable for the content determination of Icariin in Fufang Xuanju Jiaonang.

Fufang Xuanju Jiaonang ; HPLC ; Icariin ; Content Determination

2014-06-15

凌云(1970-)，女，江蘇省如東縣人民醫(yī)院藥師，研究方向為醫(yī)院藥劑學。

R284.2

A

1673-2197(2014)21-0008-02