趙春燕

(神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 靈壽 051430)

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高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定芪黃膠囊中黃芪甲苷含量研究

趙春燕

(神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 靈壽 051430)

目的：采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定芪黃膠囊中黃芪甲苷的含量。方法：樣品的前期處理方法采取溶劑提取結(jié)合中性氧化鋁的方式進(jìn)行,采用Diamonsil C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，乙腈-水(30∶70)為流動相，柱溫為90℃，流速為0.8mL/min，檢測波長為233nm，采取外標(biāo)法對峰面積進(jìn)行定量。通過HPLC的檢測方法與蒸發(fā)光散射檢測器測定黃芪甲苷含量。結(jié)果：通過采取高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法，測定黃芪甲苷在芪黃膠囊中的含量在0.75～7.96μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，r=0.9997，平均回收率為99.94%(RSD=0.94%)。結(jié)論：高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法在對芪黃膠囊中黃芪甲苷含量測定時，具有操作準(zhǔn)確、簡便的優(yōu)勢，能在較短的時間內(nèi)測定出芪黃膠囊中黃芪甲苷含量，可為藥品質(zhì)量的檢測控制提供科學(xué)合理的依據(jù)。

芪黃膠囊；高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法；黃芪甲苷；含量測定

芪黃膠囊主要的中草藥成分由茯苓和黃芪，以及水蛭和地黃等組成[1]。臨床主要功效為生津止渴，養(yǎng)陰益氣，以及泄火清熱等，治療的主要病癥是由氣虛而引起的消渴證[2]。由于該中成藥的組成成分較為復(fù)雜，當(dāng)前，對于該中成藥的藥物成分的檢測主要是通過測定地黃的含量來判斷藥物是否合格，存在一定的片面性，對其他草藥含量的測定還沒有建立統(tǒng)一的行業(yè)規(guī)范[3]。為了進(jìn)一步探索測定芪黃膠囊中黃芪甲苷的含量，為臨床藥物檢測提供更準(zhǔn)確和簡便的檢測方法，根據(jù)多年藥物含量檢測經(jīng)驗(yàn)，采取高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定芪黃膠囊中黃芪甲苷的含量，為該藥品的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 檢測儀器與檢測試藥

1.1 檢測儀器

本次研究中所使用的儀器主要包括二元梯度泵，島津高效液相色譜儀，SIL-20A自動進(jìn)樣器，紫外檢測器；蒸發(fā)光散射檢測器選用由美國奧泰科技(中國)有限公司生產(chǎn)的ELSD2000型號；以及由日本島津生產(chǎn)的LC-solution色譜工作站和電子天平。

1.2 檢測試藥

由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)研制的芪黃膠囊(國家批準(zhǔn)文號：B200306358，規(guī)格：1.5g/粒)；由中國食品藥品檢定研究院生產(chǎn)的批號為120684-200611的黃芪甲苷作為本次研究的對照品，實(shí)驗(yàn)中所使用的乙腈選用色譜純；實(shí)驗(yàn)中所使用的水為自制的純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

采用Diamonsil C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，乙腈-水(30∶70)為流動相，柱溫為90℃，流速為0.8mL/min，檢測波長為233nm，采取外標(biāo)法對峰面積進(jìn)行定量。

2.2 對照品溶液制備

精密稱取黃芪甲苷實(shí)驗(yàn)所用的對照藥材各1.5g，將其置于60mL棕色量瓶中，加流動相適量使上述對照藥材溶解，將其搖勻，稀釋至刻度，即得對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

精密稱取黃芪甲苷兩種對照藥材各1.5g，將其置于60mL棕色量瓶中，加流動相適量使上述對照藥材溶解，將其搖勻，稀釋至刻度，即得供試品溶液。

2.4 專屬性試驗(yàn)

取黃芪甲苷對照品溶液(A)和供試品溶液(B)以及陰性空白樣品溶液(C)，分別進(jìn)樣10μL在上述色譜條件下進(jìn)行，同時記錄色譜圖。通過圖譜可以發(fā)現(xiàn)(圖1)，研究當(dāng)中所使用的對照品與供試品之間在相對應(yīng)的位置上出現(xiàn)了明顯的色譜峰，還可以看到供試品色譜的中基線相對較為平穩(wěn)，同時具有較好的分離度；在該位置上沒有色譜峰出現(xiàn)的表明是陰性供試品。通過上述圖譜可以得出高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定黃芪甲苷不受雜質(zhì)對其的干擾。

2.5 線性關(guān)系考察

通過采取高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法，測定黃芪甲苷在芪黃膠囊中的含量在0.75～7.96μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，r=0.9997，平均回收率為99.94%(RSD=0.94%)。

圖1 各溶液圖譜

3 討論

目前，隨著糖尿病的發(fā)病率越來越高，采用芪黃膠囊治療的患者也越來越多。該中成藥的組成成分較為復(fù)雜，當(dāng)前，對于該中成藥藥物成分的檢測主要是通過測定地黃的含量來判斷藥物是否合格，存在一定的片面性，對其他草藥含量的測定還沒有建立統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。因此，采用高效液相色譜—蒸發(fā)光散射檢測法測定芪黃膠囊中黃芪甲苷的含量，對于今后對芪黃膠囊有效成分的精確測量具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

為了進(jìn)一步探索測定芪黃膠囊中黃芪甲苷的含量，為臨床藥物檢測提供更準(zhǔn)確和簡便的檢測方法[4, 5]。我國2010年國家人民衛(wèi)生出版社出版的《中國藥典》中指出，通過采取高效液相色譜—蒸發(fā)光散射檢測法可以測定出芪黃膠囊中黃芪甲苷的含量[6]。在本研究中，分別在紫外分光光度計(jì)上掃描黃芪甲苷對照品溶液，通過結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，在233nm波長的狀態(tài)下，黃芪甲苷處均有較大的吸收率，因此，將檢測波長選定為233nm，在該波長的檢測條件下，色譜峰的形狀較好，同時還能測定兩個組分值。高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法在對芪黃膠囊中黃芪甲苷含量測定時，具有操作準(zhǔn)確、簡便的優(yōu)勢，能在較短的時間內(nèi)測定出芪黃膠囊中黃芪甲苷含量，可為藥品檢測的質(zhì)量控制提供科學(xué)合理的依據(jù)。

[1] 郭志輝, 劉鳳清. 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測定消結(jié)安合劑中黃芪甲苷的含量[J]. 山西醫(yī)藥雜志:下半月版, 2009,38(14):645.

[2] 李翔, 朱臻宇, 朱東亮, 等. 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測梯度洗脫法測定黃芪藥材中黃芪甲苷的含量[J]. 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào), 2006,27(3):331-333.

[3] 李曉亮, 邵旭, 牛海軍, 等. 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定補(bǔ)陽還五苷酮膠囊中黃芪甲苷的含量[J]. 安徽醫(yī)藥, 2010,14(11):1286-1287.

[4] 徐小利, 陳曉虎, 謝靜. 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定補(bǔ)中益氣丸(濃縮丸)中黃芪甲苷含量[J]. 中國藥業(yè), 2008,17(19):34-35.

[5] 湯淏, 崔恩忠, 唐安福, 等. 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測定氣血雙補(bǔ)口服液中黃芪甲苷的含量[J]. 醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào), 2013,26(3):287-289.

[6] 王鵬, 趙承孝, 李青山, 等. 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射測定蒙古黃芪中黃芪甲苷的含量及其提取工藝的優(yōu)化[J]. 中國藥物與臨床, 2010,10(2):134-136.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

2014-07-20

趙春燕(1980-)，女，神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司助理工程師，研究方向?yàn)樗幬锓治觥?/p>

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