劉春富 ，李 衛(wèi) ，許 軍 ，宮金偉

（1.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院普外科，黑龍江 哈爾濱 150001；2.哈爾濱市第一人民醫(yī)院骨科，黑龍江 哈爾濱 150001）

血管生成是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟［1］，目前所知血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是腫瘤血管生成過程中作用最強、特異性最高的促血管生長因子。在大多數(shù)實體瘤組織中VEGF呈高水平表達(dá)，并與腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［2－3］。筆者以人類乳腺癌為觀察材料，應(yīng)用免疫組織化學(xué)檢測法，分析VEGF在乳腺癌組織中的表達(dá)情況，以探討VEGF在乳腺癌組織中的表達(dá)與腫瘤臨床和病理的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2004年6月至2008年8月我院臨床醫(yī)院手術(shù)切除乳腺癌蠟塊標(biāo)本65例?；颊呔鶠榕?；年齡25～77歲，平均53歲；術(shù)前均未經(jīng)任何抗癌治療；乳腺癌按世界衛(wèi)生組織（WHO）1998年分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理分型，導(dǎo)管內(nèi)癌23例，浸潤性導(dǎo)管癌20例，髓樣癌10例，腺癌8例，濕疹樣癌2例，鱗狀細(xì)胞癌2例；組織學(xué)分級，Ⅰ級18例，Ⅱ級22例，Ⅲ級25例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例；腫瘤大小不超過3 cm 47例，大于3 cm 18例。每例標(biāo)本均收集其相應(yīng)的癌旁組織作對照組織。

1.2 材料與方法

應(yīng)用鏈霉素抗生素蛋白－過氧化酶（S－P）免疫組化技術(shù)檢測VEGF，每例標(biāo)本做4μm厚的切片，腫瘤切片進(jìn)行高壓抗原修復(fù)，DAB顯色，并以PBS緩沖液代替第一抗體做陰性對照，以血管內(nèi)皮細(xì)胞著色為陽性對照。VEGF單克隆抗體購自上海長嘉生物技術(shù)有限公司，S－P免疫組化試劑盒和DAB試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.3 陰陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)［4］

以癌細(xì)胞胞漿或細(xì)胞核呈黃色或棕黃色為陽性，每張切片由2名病理醫(yī)師雙盲觀測5個具有代表性的高倍視野，每個視野計數(shù)200個腫瘤細(xì)胞，依據(jù)鏡下陽性染色細(xì)胞占癌細(xì)胞總數(shù)的百分率綜合判定。陰性（－）：無棕黃色染色或陽性細(xì)胞數(shù)平均少于10%；陽性（＋）：陽性細(xì)胞數(shù)平均大于10%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用 χ2檢驗和相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

65例乳腺癌組織中VEGF陽性表達(dá)率為78.46%（51／65），VEGF陽性染色部位主要為細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜，腫瘤周邊以陽性為主，侵襲緣尤為明顯（圖1）。詳見表1。

圖1 VEGF蛋白位于乳腺癌細(xì)胞漿呈棕黃色顆粒陽性（×400）

表1 VEGF表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

乳腺癌的生長和轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的過程，其中血管生成是癌腫物生長中的一個重要事件，腫瘤在表現(xiàn)其生長、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為時與其中的微血管增生有密切關(guān)系，無論原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性腫瘤，其持續(xù)生長都必須依賴于新生血管的形成［5］。目前發(fā)現(xiàn)，VEGF是可以特異地促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長的一種多功能的細(xì)胞因子，可表達(dá)人體的多個正常組織及絕大多數(shù)的腫瘤組織［6］。VEGF作為腫瘤組織中最主要的促血管生成因子，不僅與乳腺癌血管發(fā)生和增殖有關(guān)，并直接與其浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)［7］。黃選東等［8］用免疫組化RT－PCR法和S－P法檢測42例乳腺癌和相應(yīng)正常乳腺組織中VEGF的表達(dá)，結(jié)果顯示，42例乳腺癌組織中VEGF陽性表達(dá)明顯高于正常乳腺組織。劉蘭芳等［9］認(rèn)為，VEGF的表達(dá)與組織學(xué)分級呈正相關(guān)，隨著組織學(xué)分級的增高，VEGF陽性率也升高；李日樂等［10］采用免疫組化檢測VEGF在101例浸潤性乳腺癌組織中的表達(dá)，結(jié)果顯示，乳腺癌組織中的VEGF表達(dá)與組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及早期死亡密切相關(guān)。劉鵬等［11］采用免疫組織化學(xué)檢測109例乳腺癌組織中VEGF的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，VEGF強表達(dá)組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高及病理分級也高。本試驗結(jié)果顯示，乳腺癌組織中VEGF表達(dá)陽性率明顯高于其癌旁正常組織；Ⅲ級乳腺癌組織中VEGF表達(dá)陽性率明顯高于Ⅰ～Ⅱ級乳腺癌組織，說明VEGF的表達(dá)與乳腺癌的分級密切相關(guān)。研究結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報道一致。本試驗還發(fā)現(xiàn)VEGF表達(dá)與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況相關(guān)，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中VEGF陽性表達(dá)率高，其原因可能是VEGF通過一系列復(fù)雜的機制誘導(dǎo)血管的形成，為腫瘤的生長提供充足的營養(yǎng)，從而促進(jìn)腫瘤體積增大。Ohta等［12］認(rèn)為，VEGF除了促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖外，對淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞同樣具有促分裂和增殖作用，誘導(dǎo)“淋巴管生成”，有利于腫瘤細(xì)胞浸潤淋巴管，促進(jìn)腫瘤向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本試驗結(jié)果表明，乳腺癌組織中的VEGF表達(dá)與腫瘤生長和浸潤以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

綜上所述，VEGF可促進(jìn)乳腺癌的浸潤和轉(zhuǎn)移，在乳腺癌的發(fā)展、轉(zhuǎn)移中起重要作用，檢測VEGF的表達(dá)可作為乳腺癌惡性程度、浸潤轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的參考指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)：

［1］Folkman J.What is the evidence that tumor are angiogenesis dependent［J］.JNatl CancerInstl，1990，82（1）：4.

［2］ Nagata S，Golstein P.The Fas death factor［J］.Science，1995，267（5203）：1449－1456.

［3］ Pamey IF，Hao KC.Glioma immunology and immunotherapy［J］.Neurosurgery，2000，460（4）：778 － 791.

［4］曾谷清，方松清，劉 彥，等.血管內(nèi)皮生長因子在乳腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義［J］. 南華大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2003，31（3）：269 －271.

［5］張文江，劉愛東，龐久玲，等.血管內(nèi)皮生長因子在乳腺癌中的表達(dá)及其意義［J］. 臨床醫(yī)學(xué)，2007（4）：43 －44.

［6］張 曉，徐文華，葛銀林，等.VEGF基因特異性，siRNA轉(zhuǎn)染后對人乳腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響［J］.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2007，23（1）：14 － 17.

［7］廖曉鋒.血管內(nèi)皮生長因子與肝細(xì)胞癌［J］.國外醫(yī)學(xué)：外科學(xué)分冊，2001，28（2）：68 －70.

［8］黃選東，周雪瑞，沈 陽，等.乳腺癌VEGF的表達(dá)與腫瘤生物學(xué)特性的關(guān)系［J］. 臨床腫瘤學(xué)雜志，2005，10（6）：625 －630.

［9］劉蘭芳，申興斌，趙曉明，等.乳腺浸潤性導(dǎo)管癌血管內(nèi)皮生長因子和雌激素、孕激素受體的表達(dá)及意義［J］.陜西醫(yī)學(xué)雜志，2005，34（3）：295－297.

［10］李日樂，田明銘，湯如勇.乳腺癌血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)及意義［J］.中國癌癥雜志，1998，8（3）：163 －165.

［11］劉 鵬，孫 慧，寧連勝，等.血管內(nèi)皮生長因子與乳腺癌臨床病理因素及預(yù)后的關(guān)系［J］. 天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2002，8（2）：144 －146.

［12］Ohta Y，Watanabe Y，Murakami S，etal.Vascular endothelial grow th factor and lymph nodemetastasis in primary lung cancer［J］.Br JCancer，1997，76（8）：1041 － 1045.