張好華

(河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 451100)

?

HPLC-ICP-MS研究中藥炮制對(duì)砷形態(tài)的影響分析

張好華

(河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 451100)

目的：應(yīng)用高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)機(jī)技術(shù)(HPLC-ICP-MS)對(duì)中藥砷形態(tài)進(jìn)行分析。方法：分析應(yīng)用HPLC-ICP-MS技術(shù)對(duì)三碘化砷、五氧化二砷、甲基砷酸、和二甲基砷酸等四種砷形態(tài)的測(cè)定方法，并對(duì)黃芪、大黃、黃芩、何首烏、地黃等五種中藥炮制前后砷形態(tài)的變化進(jìn)行了分析。結(jié)果：線性相關(guān)系數(shù)(r)均大于0.9980，其重復(fù)性、穩(wěn)定性和回收率的RSD分別為1.21%～4.31%、1.78%～4.97%、1.19%～5.57%，加標(biāo)回收率83.15%～118.32%。結(jié)論：中藥中的砷形態(tài)以無(wú)機(jī)砷為主；炮制后，五種中藥無(wú)機(jī)砷的含量均明顯上升。

HPLC-ICP-MS；砷；中藥炮制

砷及其化合物種類頗多，元素砷毒性極低，而砷化合物，如氧化物、鹽類及有機(jī)化合物均有毒性，三價(jià)砷化物的毒性較五價(jià)砷化物為強(qiáng)。要全面評(píng)價(jià)中藥砷毒性，需要分析砷總量和各種砷形態(tài)的含量，特別是無(wú)機(jī)砷的含量。中藥經(jīng)過(guò)炮制后，其藥性、藥效毒性等方面都可發(fā)生改變。本文應(yīng)用高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)機(jī)技術(shù)(HPLC-ICP-MS)，測(cè)定五種常用中藥炮制前后砷的含量，并對(duì)其形態(tài)的變化進(jìn)行分析。

1 儀器與試藥

1100 型高效液相色譜(深圳市華康科儀設(shè)備有限公司)，7500a 型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(ICP-MS，深圳市華康科儀設(shè)備有限公司)； Hamilton PRP-X100陰離子交換色譜柱；Milli-Q 超純水處理系統(tǒng)；快速漩流濃縮儀。

三碘化砷、五氧化二砷、甲基砷酸(MMA)和二甲基砷酸(DMA)。

標(biāo)準(zhǔn)溶液均購(gòu)自國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心。調(diào)諧液由深圳市華康科儀設(shè)備有限公司提供。

黃芪、黃芩、大黃、何首烏、地黃、冬蟲(chóng)夏草均購(gòu)自北京同仁堂有限公司。

2 方法

2.1 HPLC-ICP-MS工作參數(shù)

流動(dòng)相為2mmol/L的磷酸二氫銨和0.2mmol/L的EDTA，流速為0.8mL/min。RF功率1 500W；采樣深度7.2mm，補(bǔ)充氣流速0.4mL/min；峰模式TRA。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

精密吸取三碘化砷、五氧化二砷、MMA、DMA的標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用超純水制備濃度為1000μg/L的各形態(tài)儲(chǔ)備液，制備6個(gè)濃度梯度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3 結(jié)果

3.1 線性和定量限

取6個(gè)濃度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)樣20μL，記錄總離子流色譜圖，以色譜圖中四種砷形態(tài)色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，相應(yīng)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得四種砷形態(tài)的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。其中三碘化砷的為Y=18 569X+3 978，r=0.998 9；DMA的為Y=20 975X-4 379，r=0.999 1；MMA的為Y=19 022X+9 195，r=0.999 7；五氧化二砷的為Y=19 890X+15 112，r=0.999 5。

3.2 重復(fù)性、穩(wěn)定性和回收率

精密稱取冬蟲(chóng)夏草粉末0.5g，制成溶液，三碘化砷、二甲基砷酸、MMA、五氧化二砷的RSD分別為1.2%、1.3%、2.8%、4.3%，重復(fù)性良好。5天后測(cè)定，上述四種形態(tài)的溶液RSD分別為4.5%、2.0%、1.8%和5.0%，表明5天內(nèi)穩(wěn)定性良好。

另取冬蟲(chóng)夏草粉末0.5g于離心杯中，并加入各形態(tài)儲(chǔ)備液適量，測(cè)定加標(biāo)前后四種形態(tài)的含量平均值，計(jì)算回收率。見(jiàn)表1。

3.2 樣品測(cè)定及結(jié)果分析

對(duì)黃芪、黃芩、大黃、何首烏、地黃五種中藥材炮制前后及冬蟲(chóng)夏草進(jìn)行測(cè)定。冬蟲(chóng)夏草中三碘化砷、MMA、五氧化二砷的含量分別為0.31、0.08、0.78μg/g, DMA未檢出。黃芪、黃芩、大黃、何首烏、地黃中DMA、MMA均未檢出，炮制前上述五種中藥中三碘化砷的含量分別為標(biāo)準(zhǔn)以下、標(biāo)準(zhǔn)以下、0.06μg/g、標(biāo)準(zhǔn)以下、0.19μg/g, 炮制后三碘化砷的含量分別為0.03、0.31、0.15、0.07、0.28μg/g；五氧化二砷的含量分別為0.03、0.01、0.01、0.02、0.12μg/g,炮制后五氧化二砷的含量分別為0.03、0.42、0.08、0.09、0.21μg/g。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

近年來(lái)，中藥砷形態(tài)分析的報(bào)道開(kāi)始增多[1-2]，但是由于中草藥中砷含量很低，要分析其中微量的砷形態(tài)，對(duì)分析方法靈敏度的要求很高[3],所以對(duì)測(cè)定方法的選擇要求也很高。HPLC-ICP-MS是近年來(lái)新發(fā)展起來(lái)的聯(lián)機(jī)技術(shù)，具有低檢測(cè)限、寬動(dòng)態(tài)線性范圍及能跟蹤多元素同位素信號(hào)變化等優(yōu)點(diǎn)，結(jié)果證實(shí)本研究重復(fù)性、穩(wěn)定性和回收率均較好。采用該技術(shù)，通過(guò)對(duì)元素形態(tài)信息的了解，有助于研究中藥中砷形態(tài)，但接口技術(shù)、基質(zhì)干擾及標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的缺乏等仍是該聯(lián)用技術(shù)面臨的關(guān)鍵問(wèn)題。隨著色譜技術(shù)的發(fā)展，如何進(jìn)一步提高分離效果，提高其靈敏度、選擇性和實(shí)用性將是HPLC-ICP-MS的重點(diǎn)探討內(nèi)容。由于流動(dòng)相中的有機(jī)溶劑是影響分析靈敏度和聯(lián)用接口的重要因素之一。所以選擇流動(dòng)相并進(jìn)行優(yōu)化也是該技術(shù)的重點(diǎn)研究?jī)?nèi)容。HPLC的流動(dòng)相中通常含有一定比例的有機(jī)溶劑，其在ICP中所產(chǎn)生的碳可造成ICP-MS的進(jìn)樣管和采樣錐、截取錐兩錐孔變得越來(lái)越小甚至堵塞，導(dǎo)致信號(hào)不穩(wěn)定，本方法采用NH4H2PO4作為緩沖鹽, 由于NH4+在儀器中不會(huì)解離，就避免了上述情況的發(fā)生。

本資料研究顯示，在本組中藥中砷形態(tài)無(wú)機(jī)砷(三碘化砷和五氧化二砷)含量很高，由于兩種形態(tài)均具有很高的毒性，但是這些中藥材對(duì)治療疾病卻有重要的作用，因此探討中藥材中無(wú)機(jī)砷的作用機(jī)理有重要的意義；五種中藥均未檢出MMA和DMA，這和文獻(xiàn)報(bào)道[4-5]一致，提示該類中藥中可能對(duì)砷元素不具備甲基化代謝功能；五種中藥材炮制后的三碘化砷和五氧化二砷含量均上升明顯，具體機(jī)理有待進(jìn)一步深入研究。

[1] 郝春莉，王庚，余晶晶，等．15種中藥材中砷的形態(tài)分析[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2009，28(8)：9181．

[2] 羅麗云，王旗，張?zhí)焖{(lán)．中藥中砷的形態(tài)分析[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2005，30(22): 1790.

[3] 吳倩，梁瓊麟，羅國(guó)安，等．六神丸可溶性砷形態(tài)的HPLC-ICP-MS研究[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2007，38(4):332.

[4] 方軍，舒永紅，藤久委，等. HPLC-ICP-MS測(cè)定中藥中砷的形態(tài)[J].分析試驗(yàn)室，2007，26(9):34.

[5] 彭嵐, 談明光, 李玉蘭. 微波輔助萃取-液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)測(cè)底泥砷、硒的化學(xué)形態(tài)[J].分析試驗(yàn)室, 2006, 25(5):10.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

2014-03-14

張好華(1977-)，男，河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院主管藥師，研究方向?yàn)橹兴帉W(xué)。

R284;O657.3

A

1673-2197(2014)10-0027-01