葉曉倩，楊珊莉，江一靜

(1.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建 福州 350122；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬康復(fù)醫(yī)院，福建 福州 350003)

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電針對(duì)缺血性腦卒中后神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分及ERK1/2通路影響研究

葉曉倩1，楊珊莉2，江一靜2

(1.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建 福州 350122；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬康復(fù)醫(yī)院，福建 福州 350003)

目的：觀察電針曲池、足三里穴對(duì)大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分的影響及其與ERK1/2信號(hào)通路的關(guān)系。方法：采用隨機(jī)數(shù)字表法，將30只大鼠分為3組，分別為假手術(shù)組、模型組、電針組，每組各10只。造模后待缺血再灌注2h后予以神經(jīng)行為學(xué)評(píng)估，每天1次；造模后第1天對(duì)電針組大鼠進(jìn)行電針干預(yù)，30min/次/天，療程為3天，其余兩組大鼠不作任何處理； Western Blot檢測(cè)大鼠ERK1/2、p-ERK1/2表達(dá)情況并觀察ERK1/2通路激活情況。結(jié)果：電針干預(yù)3天后，電針組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分顯著低于模型組(P<0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義； Western Blot示電針組大鼠p-ERK1/2蛋白水平顯著高于模型組(P<0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：電針干預(yù)治療后大鼠神經(jīng)行為學(xué)明顯改善，可能與激活ERK1/2信號(hào)通路有關(guān)。

電針；缺血性腦卒中；ERK1/2信號(hào)通路

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(責(zé)任編輯：尹晨茹)

池”“足三里”對(duì)促進(jìn)中風(fēng)患者康復(fù)有著良好的療效[2]。本研究以造模大鼠為研究對(duì)象，探析電針曲池穴、足三里穴發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)理，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)健康雄性SD大鼠50只(250～300g)，購(gòu)自上海斯萊克動(dòng)物有限公司(許可證號(hào)碼：假手術(shù)XX(滬)2007-0005)。

1.1.2 試劑 ERK1/2、p-ERK1/2、β-actin兔抗(Cell Signaling Technology)，HRP標(biāo)記抗兔二抗(廈門鷺隆生物試劑有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組 采用隨機(jī)數(shù)字表法，將30只大鼠分為3組，分別為假手術(shù)組、模型組、電針組，每組各10只，大鼠稱重并編號(hào)。各組大鼠體重和鼠齡均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2.2 動(dòng)物造模 術(shù)前實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均禁食12h，腹腔注射3mL/kg水合氯醛進(jìn)行麻醉，參照Z(yǔ)ea-Longa線栓法[3]制備大鼠大腦動(dòng)脈缺血再灌注模型：所有大鼠均選擇左側(cè)大腦中動(dòng)脈區(qū)作為梗死側(cè)，假手術(shù)組大鼠僅分離動(dòng)脈，不結(jié)扎、插線。動(dòng)物放置于室溫(25℃)環(huán)境下蘇醒，正常飲食。

1.2.3 神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分 使用Zealonga 5評(píng)價(jià)方法[3]，根據(jù)大鼠缺血再灌注模型的神經(jīng)癥狀將神經(jīng)損傷程度分為0～4分，1～3分表明造模成功。

1.2.4 電針干預(yù) ①假手術(shù)組：麻醉后大鼠回籠飼養(yǎng)，不予以任何治療；②模型組：造模后大鼠回籠飼養(yǎng)，不予以任何治療；③電針干預(yù)組：電針干預(yù)組大鼠取患側(cè)“曲池”“足三里”穴，選用G6805電針儀連接針灸針體，使用疏密波，以肢體輕輕抖動(dòng)為度； 30min/1次/天，療程為3天，術(shù)后第1天開始。1.2.5 Western Blot 取大鼠左側(cè)皮質(zhì)腦組織提取蛋白200mg，等量蛋白(50μg)上樣，SDS-PAGE電泳，轉(zhuǎn)膜后，5%脫脂奶粉封閉2h，分別加入抗ERK1/2、p- ERK1/2抗體孵育，4℃過(guò)夜，加入相應(yīng)HRP標(biāo)記抗兔二抗室溫放置1h。將PVDF膜置于化學(xué)發(fā)光成像儀上，避光條件下將配置好的ECL顯色液覆蓋于PVDF膜上，采用Bio-Rad Image軟件分析處理成像圖片。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 三組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分比較

對(duì)三組大鼠的神經(jīng)行為學(xué)進(jìn)行評(píng)估，再灌注2h后，模型組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分與電針組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；再灌注3天后，電針組大鼠神經(jīng)行為評(píng)分顯著低于模型組(P=0.000<0.01)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見(jiàn)表1。

表1 三組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分比較 ±s)

注：與模型組比較，*P<0.0。

2.2 三組大鼠ERK1/2信號(hào)通路表達(dá)比較

如圖1所示，各組大鼠t-ERK1/2含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)

學(xué)意義(P>0.05)；電針組大鼠p-ERK1/2表達(dá)量顯著高于模型組和假手術(shù)組(P<0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。電針組、模型組大鼠β-actin水平顯著高于假手術(shù)組(P<0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，詳見(jiàn)圖1。

圖1 電針對(duì)腦缺血再灌注模型大鼠ERK1/2信號(hào)通路表達(dá)影響

注：與模型組比較，*P<0.05。

3 討論

缺血性腦卒中屬于中醫(yī)“中風(fēng)”的范疇，其基本病機(jī)為陰陽(yáng)失調(diào)、氣血逆亂。祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中素有“治痿獨(dú)取陽(yáng)明”之說(shuō)，曲池穴、足三里穴均為陽(yáng)明經(jīng)穴，陽(yáng)明經(jīng)為多氣多血之經(jīng)，陽(yáng)明經(jīng)氣血通暢，正氣得以扶助，經(jīng)絡(luò)得以疏通，則機(jī)體功能順利恢復(fù)。中風(fēng)的病變部位主要在頭部，而曲池穴屬于手陽(yáng)明經(jīng)，足三里屬于足陽(yáng)明經(jīng)，手、足陽(yáng)明經(jīng)均循行至頭部，兩經(jīng)之氣相互貫通、重合而行，協(xié)同治療中風(fēng)。大量古文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)，曲池穴、足三里穴是治療中風(fēng)時(shí)使用頻率較高的兩個(gè)穴位。功能性磁共振成像觀察也證實(shí)，針刺足三里穴可以激活大腦的大部分區(qū)域，主要包括額葉、顳葉、島葉、頂葉、扣帶回和小腦等，其中以顳葉激活最明顯[4]。本研究結(jié)果顯示，電針組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分顯著低于模型組(P<0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示電針能夠改善大鼠神經(jīng)行為功能。

ERK1/2通路與缺血性腦卒中的發(fā)生關(guān)系密切，其對(duì)受損大腦是發(fā)揮保護(hù)作用還是損害作用，目前尚存較大爭(zhēng)議。盡管如此，很多證據(jù)都肯定了ERK1/2通路激活對(duì)缺血性腦卒中大腦的保護(hù)作用。當(dāng)腦缺血再灌注損傷發(fā)生后，激活ERK1/2通路信號(hào)后可抑制腦組織炎性反應(yīng)的發(fā)生，促進(jìn)骨橋蛋白(OPN)分泌，從而減少興奮性氨基酸釋放，增強(qiáng)IL-20表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞增殖，保護(hù)缺血缺氧的腦組織。本研究結(jié)果顯示，電針組大鼠大腦p-ERK1/2蛋白表達(dá)量顯著高于模型組，提示電針干預(yù)可能通過(guò)激活ERK1/2通路而發(fā)揮腦保護(hù)作用。

綜上所述，電針干預(yù)腦缺血再灌注模型大鼠曲池、足三里穴后可降低其神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，保護(hù)缺血缺氧的大腦組織，其機(jī)制可能與激活ERK1/2信號(hào)通路有關(guān)。

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(責(zé)任編輯：尹晨茹)

2014-07-09

國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目(81102628)

葉曉倩(1986-)，女 ，福建中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生，研究方向?yàn)槟X血管疾病康復(fù)。

R245.3;R255.2

A

1673-2197(2014)20-0074-02

相關(guān)統(tǒng)計(jì)顯示[1]，約60%～80%腦卒中患者為缺血性腦卒中，其是由椎動(dòng)脈狹窄或閉塞、腦供血不足導(dǎo)致的腦組織壞死的總稱，在老年人群中的發(fā)病率和病死率極高。目前，電針被運(yùn)用于治療各種疾病中，包括改善腦卒中患者功能障礙，諸多學(xué)者也做了大量相關(guān)研究，進(jìn)一步證實(shí)了針刺療法在中風(fēng)康復(fù)治療中的有效性。 臨床實(shí)踐表明， 電針 “曲中醫(yī)認(rèn)為，在非生理期，女性沖任氣血能保持相對(duì)平和，此時(shí)致病因素很難造成沖任、胞宮不足或瘀滯，因此未表現(xiàn)出腹痛等不適癥狀[5]。但在經(jīng)期前后，女性機(jī)體血海慢慢充盈而后外泄，胞宮內(nèi)的氣血從旺盛短暫轉(zhuǎn)變?yōu)樘撊?，氣血的急劇變化使致病因素很容易乘虛而入，造成氣血運(yùn)行不順暢，阻礙胞宮內(nèi)經(jīng)血下行，不通則痛。此外，沖任胞宮濡養(yǎng)不足也會(huì)造成患者腹痛。

中藥治療月經(jīng)不調(diào)注重分期辨證，月經(jīng)前期調(diào)養(yǎng)經(jīng)血，月經(jīng)期間活血養(yǎng)血，月經(jīng)后益氣健脾。本研究結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)治療，兩組患者臨床癥狀均有一定程度的緩解，觀察組患者治愈率和總有效率分別為59.4%和96.9%，均顯著高于對(duì)照組的40.6%和84.4%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示中西醫(yī)結(jié)合治療月經(jīng)不調(diào)患者臨床療效顯著，可將患者體內(nèi)激素調(diào)整至正常水平，恢復(fù)月經(jīng)周期的穩(wěn)定性，優(yōu)于單純西藥治療，值得臨床推廣應(yīng)用。