劉佳琪

(武漢市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 武漢 430010)

?

地喹氯銨含片含量測定分析

劉佳琪

(武漢市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 武漢 430010)

目的：采用HPLC法測定地喹氯銨含片中的地喹氯銨含量。方法：選用Phenomenex/Luna C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，流動相為甲醇-己烷磺酸鈉溶液(pH3.8)(3∶7)，進樣體積為20μL，流速為1mL/min，檢測波長為240nm。結(jié)果：地喹氯銨在4.970～14.910μg/mL濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系；精度實驗中，地喹氯銨峰面積RSD為0.36%；穩(wěn)定性實驗中，地喹氯銨峰面積RSD為0.70%；重復(fù)性實驗中，地喹氯銨峰面積RSD為0.99%，均符合要求。結(jié)論：采用HPLC法測定地喹氯銨含片中地喹氯銨含量精密度高，能有效分離主峰和干擾峰，且穩(wěn)定性、重復(fù)性及耐用性均較好，可廣泛推廣和使用。

地喹氯銨；HPLC；含量測定

地喹氯銨為非抗生素藥物，其對革蘭氏陽性菌及陰性菌等均具有顯著的抑制作用，還可有效清除真菌及抗酸桿菌，且不會對機體產(chǎn)生刺激作用，臨床常用于治療咽喉細(xì)菌感染等[1]。地喹氯銨又名克菌定，是雙季銨鹽表面活性劑的一種，其作用機理為其能與真菌和細(xì)菌細(xì)胞胞漿膜內(nèi)的磷酸根產(chǎn)生很強的結(jié)合作用，改變細(xì)胞膜的通透性，從而有效抑制病原體的糖酵解和呼吸作用，使細(xì)胞內(nèi)代謝物滲出，改變菌體蛋白質(zhì)性質(zhì)，進而殺死細(xì)菌[2]。目前，測定地喹氯銨含量的常用方法包括毛細(xì)管電泳法、共振光散射光譜法、高效液相色譜法及熒光分析法等。本研究在EP5.0(歐洲藥典)的基礎(chǔ)上，對色譜條件進行了改進，有效地將地喹氯銨峰從雜質(zhì)峰中分離出來，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津生產(chǎn)的高效液相色譜儀，型號為SPD-10Avp/LC-10ATvp；上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)的紫外-可見光分光光度計，型號為756C；德國Sartorius天平，型號為BT25S；上海大普儀器有限公司生產(chǎn)的精密酸度計，型號為PHS-3C。

1.2 試藥

已烷磺酸鈉、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純；抽取3種規(guī)格為0.25mg的地喹氯銨含片作為測定對象；對照品為日本明治果生產(chǎn)的含量為99.8%的地喹氯銨(DCWS-65-1)；空白對照為珠海生物化學(xué)制藥廠提供的空白輔料。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

選擇Phenomenex/Luna C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，流動相為甲醇-己烷磺酸鈉溶液(濃度為0.67%，配制方法：于300g純水中加入己烷磺酸鈉2g，完全溶解后，采用冰醋酸將其pH調(diào)至3.8)(3∶7)，進樣體積為20μL，流速為1mL/min，檢測波長為240nm。

2.2 對照品溶液制備

稱取適量對照品(稱取前需將地喹氯銨置于105℃下進行干燥，待總重量無變化后方可稱取)，加入磷酸-甲醇-水溶液(1∶15∶5)，充分溶解后將其稀釋為10μg/mL地喹氯銨溶液，即得。

2.3 樣品溶液制備

取10片待測樣品，將其研磨成粉末，精密稱定0.25mg，加入適量磷酸-甲醇-水溶液(1∶15∶5)適量，超聲處理5min，待冷卻后用磷酸-甲醇-水溶液將其稀釋至25mL，搖勻過濾后即得。

2.4 測定方法

精密吸取樣品溶液及對照溶液各20μL，注入液相色譜儀中，采用外標(biāo)法，根據(jù)樣品峰面積計算地喹氯銨含量。

2.5 專屬性考察

分別取地喹氯銨對照品溶液和空白輔料溶液各20μL，按照上述色譜條件注入液相色譜儀，測定結(jié)果表明空白輔料不會干擾樣品的色譜測定結(jié)果，如圖1所示。

2.6 線性關(guān)系考察

精密稱取干燥后的地喹氯銨對照品9.94mg，采用流動相將其稀釋至100mL(濃度99.400μg/mL)，放入容量瓶中備用。采用移液管分別吸取上述溶液1.5mL、1.25mL、1.0mL、0.75mL、0.5mL，置于10mL容量瓶內(nèi)，加流動相稀釋至刻度，分別得到14.910μg/mL、12.425μg/mL、9.940μg/mL、7.455μg/mL、4.970μg/mL的地喹氯銨溶液，依次進樣測定。以地喹氯銨濃度(C)為橫坐標(biāo)，峰面積積分(A)為縱坐標(biāo)，進行線性回歸，結(jié)果表明地喹氯銨在4.970～14.910μg/mL濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖1 地喹氯銨空白輔料(上)及地喹氯銨對照品(下)液相色譜

2.7 精密度試驗

取濃度為9.940μg/mL對照品溶液6份，按照上述色譜條件依次進樣，結(jié)果表明地喹氯銨峰面積RSD為0.36%，說明該測定方法具有較高的精密度。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取濃度為9.940μg/mL的對照品適量，分別放置0h、1h、2h、4h、6h、8h、12h、24h后進樣測定，結(jié)果表明地喹氯銨峰面積RSD為0.70%，說明該對照品溶液在24h內(nèi)具有較高的穩(wěn)定性。

2.9 重復(fù)性試驗

分別配制6份同批次的地喹氯銨樣品溶液，進樣測定，結(jié)果表明地喹氯銨平均含量為標(biāo)示量的97.9%，峰面積RSD為0.99%，說明該測定方法具有良好的重復(fù)性。

2.10 樣品測定

取10片待測樣品，將其研磨成粉末，精密稱取0.25mg，加入適量磷酸-甲醇-水溶液(1∶15∶5)溶解，超聲處理5min，待冷卻后用磷酸-甲醇-水溶液將其稀釋至25mL，搖勻過濾。精密吸取20μL樣品溶液進樣測定，采用峰面積歸一化法計算地喹氯銨含量，結(jié)果表明地喹氯銨平均含量為標(biāo)示量的97.9%，符合要求。見圖2。

圖2 地喹氯銨含片液相色譜

3 討論

地喹氯銨是常用的陽離子表面活性劑之一，其產(chǎn)生的陽離子可改變細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)及通透性，從而有效抑制病原體的糖酵解和呼吸作用，使細(xì)胞內(nèi)的代謝物滲出，改變菌體蛋白質(zhì)性質(zhì)，進而殺死細(xì)菌。地喹氯銨對堿金屬離子具有較強的絡(luò)合能力，可建立堿金屬離子滲透通道，將離子順利輸送至膜內(nèi)，從而增加膜內(nèi)滲透壓，造成細(xì)胞膜破損，起到殺菌作用。

3.1 檢測波長選擇[3]

對稀釋后的地喹氯銨溶液進行紫外掃描，波長范圍為200～400nm，結(jié)果表明地喹氯銨在240nm波長處吸光度最大，因此選擇240nm為檢測波長。

3.2 流動相選擇

采用國家藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的含量測定方法，即流動相為0.005mol/L庚烷磺酸鈉溶液-甲醇-乙腈-三乙胺(20∶60∶20∶0.5)進行含量測定，不論是改變流動相比例、pH值，還是更換色譜柱，地喹氯銨主峰仍不能與溶劑峰分開，因此筆者參照EP5.0的流動相條件，并對流動相比例和pH值進行優(yōu)選[4]，得出最佳色譜條件為：0.67%己烷磺酸鈉溶液-甲醇(30∶70)。結(jié)果表明，采用優(yōu)化后的色譜條件，主峰與雜質(zhì)分離效果良好，峰形對稱，保留時間適宜，適用于地喹氯銨含片含量測定。

3.3 耐用性考察

采用多種品牌、不同國家生產(chǎn)的十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱測定同一樣品，測定結(jié)果間相差較小，說明該法具有較好的耐用性。

綜上所述，采用HPLC法測定地喹氯銨含片中地喹氯銨含量精密度高，能有效分離主峰和干擾峰，且穩(wěn)定性、重復(fù)性及耐用性均較好，可廣泛推廣和使用。

[1] 李超,黃永旺.復(fù)方地喹氯銨含片臨床應(yīng)用[J].天津藥學(xué),2002,14(4):54-55.

[2] 白若琬,李永春,朱建東,等.HPLC法測定洛度沙胺氨丁三醇滴眼液的含量[J].食品與藥品,2005,7(7):42-44.

[3] 張琳,薛榮奇,董金鳳. 地喹氯銨噴霧劑治療急性咽炎30例[J]. 陜西醫(yī)學(xué)雜志,2006,35(10):1344-1345.

[4] 王敬風(fēng).奧美拉唑鈉腸溶片中奧美拉唑鈉含量測定方法的改進[J]. 河北化工,2011,34(1):46-47.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

2014-04-29

劉佳琪(1990-)，男，湖北省武漢市中醫(yī)醫(yī)院藥師，研究方向為醫(yī)院藥學(xué)。

R927.2

A

1673-2197(2014)16-0028-02