（湖南省衡陽市南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科一病區(qū)，湖南 衡陽 421000）

宮頸細胞癌及宮頸上皮內(nèi)腫瘤組織中HPV16感染與hTERT、Ki67表達的關(guān)系

黃冠青

（湖南省衡陽市南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科一病區(qū)，湖南 衡陽 421000）

目的 研究宮頸鱗狀細胞癌與宮頸上皮內(nèi)腫瘤組織中 HPV16 感染情況與 hTERT 和 Ki67 在組織中表達的關(guān)系。方法 以 2008 年 1月至 2013 年 10 月在我院進行治療的 73 例婦科腫瘤患者和同期內(nèi)在我院進行常規(guī)婦科檢查的 35 例正常患者的宮頸組織為研究標本。研究采用免疫組化技術(shù)，組織芯片技術(shù)以及原位雜交方法等。結(jié)果 病理宮頸組織（除 CIN Ⅰ以外）中檢測出的 HPV16 陽性率均比正常宮頸組織高（P＜0.05）。病變宮頸組織中 CIN Ⅱ、CIN Ⅲ、原位癌、宮頸浸潤鱗癌的 hTERT 表達以及 Ki67 表達均高于正常宮頸組織（P＜0.05）。浸潤鱗癌組織中的 hTERT 表達量顯著高于原位癌組織中的 hTERT 表達量（P＜0.01）。浸潤鱗癌、原位癌的 Ki67 表達量比正常宮頸組織中的 Ki67 表達量檢測值高（P＜0.05）。HPV16 陽性患者 hTERT 表達顯著高于 HPV16 陰性患者（P＜0.01），且 HPV16 感染情況與 hTERT表達情況呈顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.372）。HPV16 感染情況與 Ki67 表達也存在統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而 HPV16 感染情況與 Ki67 表達無相關(guān)性（r=0.092）。此外，在病理宮頸組織中 hTERT 表達與 Ki67 表達有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），但存在顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.396）。結(jié)論 HPV16 感染可能導(dǎo)致 CIN 的發(fā)生并逐步發(fā)展為 SCC，而 HPV16 感染后組織中 hTERT、ki67 表達會發(fā)生改變，通過 hTERT、ki67 指標檢測有助于宮頸癌癌前發(fā)現(xiàn)，對治療和判斷預(yù)后也有一定的作用。

宮頸上皮內(nèi)腫瘤；宮頸鱗狀細胞癌；HPV16；hTERT；ki67

高危型人類乳頭瘤病毒（HPV）感染可能導(dǎo)致女性宮頸病變，早期常見的是導(dǎo)致宮頸上皮內(nèi)腫瘤（CIN）的發(fā)生，隨后可逐漸演變?yōu)閷m頸鱗狀細胞癌（SCC）。因此對HPV的感染情況檢測以及CIN的發(fā)生和CIN演變SCC的過程與程度研究，對治療和判斷預(yù)后有著重要的意義。目前發(fā)現(xiàn)hTERT和Ki67與HPV16的感染以及CIN的演變有著重要的聯(lián)系，現(xiàn)在以我院73例宮頸病變組織與35例正常患者宮頸組織為標本探討HPV16感染與hTERT、Ki67表達的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以我院病理科提供的2008年1月至2013年10月在我院進行治療的73例宮頸病變患者和30例正?；颊叩膶m頸組織作為研究材料。73份病理性宮頸組織中最終確定為CINⅠ15份，CINⅡ14份，CINⅢ12份，原位4癌份以及浸潤癌28份。分型的確定為我院病理科經(jīng)驗豐富的專家以備份病理組織進行切片和HE染色觀察。

1.2 方法

組織芯片技術(shù)：對將分析的病理組織分別切片，HE染色，目標組織標記，石蠟微陣列設(shè)計和打孔，隨后再是將預(yù)先備好的目標組織放入已經(jīng)打孔的石蠟微陣列中，再是進行切片裱褙于APES預(yù)先處理的玻片。原為雜交技術(shù)：首先是探針內(nèi)源性滅活，待標記探針變性后立即冰凍處理，隨后按照探針和雜交液1∶9比例配置混合后加于標準上，再將標準進行烘烤，目的是使RNA變性。然后分別按SSC 2.0倍、SSC 0.5倍、SSC 0.2倍進行充分洗滌，37 ℃下放置30 min左右滴加Strep-AP，再30 min左右通過NBT/BCIP顯色。免疫組化：分別將病理切進行脫蠟、水化、抗原修復(fù)，完成后滴加適量雙氧水，再加抗體，最后加增強劑和酶標，觀察顯色反應(yīng)并記錄。

1.3 結(jié)果評定

表1 正常宮頸組織、CIN、SCC中與HPV16感染、Ki67、hTERT的表達情況

將每個標本組織于高倍鏡下選定3個視野進行觀察，每視野計數(shù)200個細胞。HPV感染陽性判定依據(jù)為在視野中觀察的細胞其細胞核出現(xiàn)紫藍色。hTERT、Ki67陽性判斷依據(jù)為所觀察的細胞其核現(xiàn)棕黃色為標準。均以觀察的反應(yīng)細胞出現(xiàn)特定表象占每視野總計數(shù)細胞個數(shù)＞50.00%為（+++），25.00%～50.00%為（++），10.00%～25.00%為（+），＜10.00%為（-）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

將所有觀察數(shù)據(jù)錄入統(tǒng)計學(xué)分析軟件SPSS19.0進行數(shù)據(jù)處理與分析。計數(shù)資料的比較差異卡方檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。相關(guān)性分析采用Speaman等級相關(guān)分析，以P＜0.05為具有相關(guān)性。

2 結(jié) 果

正常宮頸組織、CIN、SCC中與HPV16感染、Ki67、hTERT的表達情況具體見表1。統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，病變宮頸組織中檢測出的HPV16陽性率均比正常宮頸組織高（除CINⅠ以外），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。病變宮頸組織中CINⅡ、CINⅢ、原位癌、宮頸浸潤鱗癌的hTERT表達以及Ki67表達與正常宮頸組織中上述兩種標志物結(jié)果差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。還有，浸潤鱗癌組織中的hTERT表達量顯著高于原位癌組織中的hTERT表達量，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。此外，浸潤鱗癌、原位癌的Ki67表達量比正常宮頸組織中的Ki67表達量檢測值高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

病理宮頸組織HPV16感染情況與hTERT、Ki67表達的相關(guān)性分析結(jié)果具體見表2。結(jié)果顯示，HPV16感染情況（陰性和陽性）與hTERT表達差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=11.974，P=0.007＜0.01），即HPV16陽性患者hTERT表達顯著高于HPV16陰性患者，且HPV16感染情況與hTERT表達情況呈顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.372，P=0.001＜0.01）。HPV16感染情況與Ki67表達差異也存在統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=9.494，P=0.023＜0.05），而HPV16感染情況與Ki67表達無相關(guān)性（r=0.092，P=0.483＞0.05）。

表2 HPV16感染與hTERT、Ki67表達的相關(guān)性分析

hTERT表達與Ki67表達的關(guān)系分析具體見表3。統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，在病理宮頸組織中hTERT表達與Ki67表達有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=17.869，P=0.037＜ 0.05），但相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，這兩種標志物在病理宮頸組織中的表達卻存在顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.396，P=0.001＜0.01）。

3 討 論

CIN的發(fā)生及SCC的演變可能與HPV16感染有著非常密切的聯(lián)系[1]。但直接對HPV16感染情況的檢測也不足與說明其與CIN的發(fā)生有密切的關(guān)系。目前較多的研究集中于腫瘤標志物的檢測以探討HPV16感染與CIN發(fā)生的關(guān)系以及CIN演變?yōu)镾CC的相關(guān)性。

表3 hTERT與Ki67表達的關(guān)系分析

目前的研究主要認為，端粒酶的激活與宮頸癌變早期有密切關(guān)系，并且因為在病變后期端粒酶表達更強，這就可能預(yù)示著CIN與SCC的病變過程與端粒酶的激活有關(guān)系[2]。而關(guān)鍵的就在于HPV編碼的E6蛋白能通過myc與Sp1cis元件激活端粒酶[3]。此外，hTERT與端粒酶的活性相關(guān)[4]。那么就可以說一方面E6蛋白激活端粒酶，另一方面hTERT可決定端粒酶的活性。也就是說端粒酶激活是誘導(dǎo)宮頸組織細胞發(fā)生變化的直接因素[5]，而這個因素的源頭就是HPV。CIN進一步發(fā)展演變?yōu)镾CC，在這個過程中Ki67的檢測就十分有意義，因為Ki67能衡量細胞的增生程度。也就是說通過Ki67表達水平的檢測，能有效判斷細胞的癌變進展情況。本研究標準結(jié)果顯示，各型病變宮頸組織檢出的HPV16陽性均比正常宮頸組織偏高，也能說明宮頸病變一定與HPV16感染存在關(guān)聯(lián)。此外，除CINⅠ以外其他各型病變宮頸組織的hTERT水平與Ki67水平均比正常宮頸組織高，也就是說通過檢測病變組織中hTERT水平與Ki67水平對判斷宮頸癌的發(fā)展有重要的參考意義。

綜合分析，可以認為HPV16感染是導(dǎo)致CIN發(fā)生的重要因素。通過檢測組織Ki67、hTERT水平有助于判斷病變的發(fā)展情況和預(yù)后的判斷。

[1] Wolf JK,Ramirez PT.The molecular biology of cervical cancer[J]. Cancer Invest,2001,19 (6):621- 629.

[2] Nagai N,Oshita T,Murakami J,et al.Semiquant it ative analysis of telomerase activity in cervical cancer and precancerous lesions[J]. Oncol Rep,1999,6(2) :325-328.

[3] Oh ST,Kyo S,Laimins LA.Telomerase activation by human papillomavirus type 16 E6 prot ein: induction of human telomerase reverse transcriptase expression through Myc and GC-rich Sp1 binding sites[J].J Virol,2001,75(12):5559-5566.

[4] Veldman T,Horikawa I,Barrett JC,et al.Transcriptional activation of the telomerase hTERT gene by human papillomavirus type 16 E6 oncoprotein[J].J Virol,2001,75(9):4467-4472.

[5] Wolf JK,Ramirez PT.The molecular biology of cervical cancer [J]. Cancer Invest igation,2001,19 (6):621- 629.

Relations Cervical Carcinoma hTERT and HPV16 Infection and Cervical Intraepithelial Tumor Tissue, Ki67 Expression

HUANG Guan-qing
(Department of Obstetrics and Gynecology, the First Affiliated Hospital of Nanhua University, Hengyang 421000, China)

Objective The relationship between HPV16 infection and expression of hTERT and Ki67 in the tissue of cervical squamous cell carcinoma and cervical intraepithelial neoplasia tissues. Methods From 2008 January-2013 year in October for routine gynecological examination in our hospital for treatment of 73 cases of gynecological cancer patients and the same period in our hospital 35 cases of normal cervical tissue specimens of patients. Study used immunohistochemical techniques, tissue microarray and in situ hybridization method. Results The pathological cervical tissues (except CIN Ⅰ outside) the positive rate of HPV16 was detected in normal cervical tissue were higher than high (P＜0.05). Higher than normal cervical tissue hTERT expression of CIN II, CIN III, carcinoma in situ, invasive cervical squamous cell carcinoma and the expression of Ki67 in cervical lesion tissues(P＜0.05). Invasivesquamous cell carcinoma hTERT expression was significantly higher than that of in situ carcinoma hTERT expression(P＜0.01). Carcinoma in situ squamous cell carcinoma, Ki67 expression detection value higher than normal cervicaltissue Ki67 (P＜0.05). Expression of HPV16 in hTERT positive patients was significantly higher than that in HPV16 negative patients (P＜0.01), and the status of HPV16 infection and the expression of hTERT was significant lypositive correlation (r=0.372). There are also significant HPV16 infection and the expression of Ki67 (P＜0.05), but there was no correlation between the expression status of HPV16 infection and Ki67 (r=0.092). In addition, in pathological cervical tissue hTERT expression and Ki67 expression was statistically significant(P＜0.05), but there was a significant positive correlation between (r=0.396). Conclusion HPV16 infection may lead to the occurrence of CIN and the progressive development of SCC, hTERT, Ki67 expression change of HPV16 infected tissues by hTERT, Ki67, index detection helps to cervical precancerous found, also has a certain effect on the treatment and prognosis.

Cervical intraepithelial neoplasm; Squamous cell carcinoma; HPV16; hTERT; Ki67

R737.33

：B

：1671-8194（2014）30-0024-02