王永超高 政*

（1 大連市第二人民醫(yī)院，遼寧 大連 116011；2 大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，遼寧 大連 116031）

阿托伐他汀預(yù)處理對SD大鼠局部腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究

王永超1高 政2*

（1 大連市第二人民醫(yī)院，遼寧 大連 116011；2 大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，遼寧 大連 116031）

目的研究阿托伐他汀預(yù)處理對SD大鼠局部腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。方法120只雄性健康SD大鼠隨機(jī)分成阿托伐他汀組（A組）、對照組（C組）、假手術(shù)組（S組），每組40只。A組和C組均按缺血2 h，再灌注0、2、6、12、24 h五個(gè)時(shí)間點(diǎn)（8只/組）分別制備腦缺血再灌注模型，進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分，測量腦梗死體積，觀察腦組織病理形態(tài)。結(jié)果再灌注12、24 h，A組較C組神經(jīng)功能缺損評分降低（P＜0.05）、腦梗死體積減?。≒＜0.05）。A組與C組比較，缺血側(cè)腦組織間水腫減輕，變性、壞死的神經(jīng)元數(shù)量減少，空泡樣改變減輕。結(jié)論阿托伐他汀預(yù)處理對SD大鼠局部腦缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。

阿托伐他??；腦缺血再灌注

阿托伐他汀屬3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A（HMG-COA）還原酶抑制劑，能有效降低血中低密度脂蛋白和膽固醇水平，并能增高高密度脂蛋白水平和中度降低三酰甘油，故臨床上主要用于調(diào)脂治療。大量證據(jù)顯示包括阿托伐他汀在內(nèi)的他汀類藥物有不依賴于其降脂作用的血管和神經(jīng)保護(hù)作用[1]。本實(shí)驗(yàn)對大鼠進(jìn)行阿托伐他汀預(yù)處理，觀察其局部腦缺血再灌注后神經(jīng)功能缺損評分、腦組織病理形態(tài)、腦梗死體積等，從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)角度研究預(yù)防性應(yīng)用阿托伐他汀是否對腦缺血再灌注損傷具有神經(jīng)保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：雄性健康SD大鼠120只（由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），鼠齡在4個(gè)月，體質(zhì)量220～260 g，隨機(jī)分成3組：阿托伐他汀組（A組）、對照組（C組）、假手術(shù)組（S組），每組40只，各組分別包括缺血2 h再灌注0、2、6、12、24 h各5個(gè)亞組，每亞組8只。

1.2 給藥方法：A組于術(shù)前14 d開始給予阿托伐他汀10mg/（kg·d），（生理鹽水配制成0.5 mg/mL混懸液）灌胃，C組和S組則每天予等容量生理鹽水灌胃。

1.3 腦缺血再灌注模型制備：大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞模型（MCAO）的制備采用改良longa-Zea氏線栓法，A組和C組大鼠均栓塞右側(cè)大腦中動(dòng)脈。模型成功的標(biāo)志是動(dòng)物蘇醒后出現(xiàn)對側(cè)以前肢為重的偏癱和同側(cè)的Horner征（眼裂變小，眼球內(nèi)陷）。S組只暴露血管，不結(jié)扎、不插栓線。

1.4 神經(jīng)功能缺損評分：采用Longa 5分制法分別于再灌注0、2、6、12、24 h進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分。

1.5 腦梗死體積測定：10%水合氯醛處死大鼠后即刻取腦，速凍15 min后經(jīng)冠狀面由視交叉水平切A、B、C、D、E 5個(gè)腦片，厚度約1.5 mm，C片石蠟包埋后做HE染色，余四個(gè)腦片行TTC染色、溫育30min并用福爾馬林固定。腦組織梗死部位不會著色。正反面拍照各腦片，采用MIAS圖像分析軟件計(jì)算出梗死比率。

1.6 觀察腦組織病理形態(tài)：光鏡下觀察經(jīng)HE染色的腦組織切片，觀察腦組織神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)，神經(jīng)元受損等特征。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以（xˉ±s）表示；腦梗死體積的比較采用t檢驗(yàn)；神經(jīng)功能缺損評分采用秩和檢驗(yàn)；各指標(biāo)在兩組的動(dòng)態(tài)變化采用單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 神經(jīng)功能缺損評分：C組較S組在相同再灌注時(shí)點(diǎn)神經(jīng)功能缺損癥狀明顯（P＜0.01）；A組較C組神經(jīng)功能缺損評分在再灌注12 h及24 h時(shí)點(diǎn)降低 （P＜0.05）。見表1。

2.2 腦梗死體積：A組與C組均在腦缺血2h時(shí)開始出現(xiàn)梗死灶，C組腦梗死灶隨再灌注時(shí)間的延長逐漸增大，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；A組梗死灶則在再灌注6 h達(dá)高峰，此后呈下降趨勢，但24 h時(shí)其腦梗死體積仍大于再灌注2 h時(shí)，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；C組較S組相同時(shí)間點(diǎn)腦梗死體積明顯增大（P＜0.01）；A組較C組在再灌注12h及24h時(shí)腦梗死體積減?。≒＜0.05）。見表2。

表1 神經(jīng)功能缺損評分（）

注：組間比較，▲表示P＜0.05，■表示P＜0.01

組別 再灌注0 h 再灌注2 h 再灌注6 h 再灌注12 h 再灌24 h S組 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 C組 1.81±0.40■ 2.16±0.40■ 2.81±0.39■ 3.15±0.73■ 3.18±0.42■A組 1.49±0.56 1.66±0.49 2.49±0.56 2.16±0.40▲ 2.00±0.61▲

表2 腦梗死體積比率（腦梗死體積/總體積， ）

2.3 腦組織病理形態(tài)：C組缺血側(cè)腦組織神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，神經(jīng)細(xì)胞皺縮、核固縮，組織間水腫明顯，可見空泡樣化，且神經(jīng)元損害隨著時(shí)間延長而漸加重，大多數(shù)神經(jīng)細(xì)胞變性壞死；A組神經(jīng)元受損程度也隨再灌注時(shí)間延長而加重，但A組較C組變性、壞死的神經(jīng)元少，組織間水腫及空泡化均輕。見圖1。

圖1 HE染色示各組腦組織病理形態(tài)（10×40倍光鏡）

3 討 論

近幾年大量循證醫(yī)學(xué)證據(jù)證實(shí)他汀類藥物具有抗動(dòng)脈硬化、預(yù)防腦卒中作用[2]，且無論患者血清膽固醇水平高低，都能明顯降低缺血性卒中的發(fā)病率[1]。該類藥物除了通過其傳統(tǒng)的降脂作用減少心腦血管事件的發(fā)生外，還具有不依賴于其降脂作用的血管和神經(jīng)保護(hù)作用[3-4]。阿托伐他汀為3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A（HMG-COA）還原酶抑制劑，是一種強(qiáng)效他汀類調(diào)脂藥。除本身的調(diào)脂作用外，該藥尚具有獨(dú)立于降脂作用外的多向性效應(yīng)，包括影響細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及細(xì)胞增殖、抑制炎性反應(yīng)、穩(wěn)定斑塊等多項(xiàng)非調(diào)脂作用[5-6]，抑制平滑肌細(xì)胞增殖和新生內(nèi)膜增生、抑制血小板聚集及改善內(nèi)皮功能[7-8]。

有研究表明，分別服用阿托伐他汀、辛伐他汀、氟伐他汀、普伐他汀及洛伐他汀這幾種目前臨床上常用的他汀類藥物治療后5年的效果，阿托伐他汀降低腦卒中發(fā)病率效果最好，能明顯提高患者預(yù)期壽命，改善健康狀況[9]。強(qiáng)化降低膽固醇預(yù)防腦卒中的SPARCL研究發(fā)現(xiàn)，近期腦卒中或一過性缺血發(fā)作患者，服用阿托伐他汀80 mg/d可降低腦卒中16%[10]。黃方等[11]報(bào)道分析15例＞80歲抗磷脂綜合征患者的臨床資料，經(jīng)常發(fā)生心腦血管缺血事件，在抗血小板、抗凝等治療的基礎(chǔ)上，每晚加服阿托伐他汀鈣20 mg后，心腦血管缺血事件的發(fā)生明顯減少。國內(nèi)亦有研究報(bào)道，阿托伐他汀能明顯降低神經(jīng)功能缺損癥狀，縮小腦梗死體積[12]。

本研究顯示腦缺血2 h后，對照組較假手術(shù)組神經(jīng)功能缺損癥狀明顯，腦組織損傷病理形態(tài)嚴(yán)重，腦梗死體積明顯。再灌注24 h內(nèi)，隨著再灌注時(shí)間的延長，對照組神經(jīng)功能缺損癥狀、腦梗死體積均有明顯加重趨勢。這不僅表明缺血本身可引起腦損傷，且隨著再灌注時(shí)間延長呈加重趨勢。而阿托伐他汀組同比對照組可見在應(yīng)用阿托伐他汀后各再灌注時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能缺損癥狀減輕，腦梗死體積減小。進(jìn)一步觀察阿托伐他汀組缺血側(cè)腦組織發(fā)現(xiàn)，再灌注24 h內(nèi)，腦梗死體積并不是隨著再灌注時(shí)間的延長持續(xù)擴(kuò)大，而是于再灌注6 h達(dá)高峰并出現(xiàn)拐點(diǎn)，隨后逐漸縮小，腦組織損傷病理形態(tài)亦有所減輕。但具體機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

綜上所述，預(yù)防性應(yīng)用阿托伐他汀可減輕腦缺血再灌注后神經(jīng)功能缺損癥狀，減輕腦組織損傷病理形態(tài)，減小腦梗死體積。這充分證明了阿托伐他汀預(yù)處理對于腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，為缺血性腦血管病的臨床防治提供可行方法。

[1] Amin Hanjani S,Stagliano NE,Yamada M,et al.Mevastatin,an HMG-CoA reductase inhibitor,reduces stroke damage and upregulates endothelial nitric oxide synthase in mice[J].Stroke,2001, 32(4):980-986.

[2] 王蕾,徐朝,高勵(lì).不同劑量阿托伐他汀對頸動(dòng)脈粥樣斑塊的影響[J].藥物研究,2010,19(7):9-l0.

[3] Sacco RL,Adams R,Albers G,et al.Guidelines for prevention of stroke in patients with ischemic stroke or transient ischemic attack:a statement for healthcare professionals from the American Heart Association/ American Stroke Association Council on Stroke:co-sponsored by the Council on Cardiovascular Radiology and Intervention:the American Academy of Neurology affmns the value of this guideline[J].Circulation,2006,113:e409-449.

[4] 許竹梅,趙水平,聶賽,等.阿托伐他汀增加單核細(xì)胞過氧化物酶增殖體激活受體γ表達(dá)改善炎性反應(yīng)[J].中華心血管病雜志, 2004,32(4):329-332.

[5] 王震宇,禹同生,王健,等.阿托伐他汀的藥理作用及臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].中國新藥雜志,2010,19(18):1684-1687.

[6] Charbonneau F,Anderson TJ,Title L,et al.Modulation of arterial reactivity using amlodipine and atorvastatin measured by ultrasound examination (MARGAUX)[J].Atherosclerosis,2008,197(1): 420-427.

[7] 王少珍,章成國.他汀類藥物在腦卒中二級預(yù)防中的作用[J].廣東醫(yī)學(xué),2011,32(2):271-272.

[8] 韋朝威.阿托伐他汀的藥理作用及臨床應(yīng)用分析[J].中國醫(yī)藥指南,2012,10(13):78-79.

[9] 謝堅(jiān),章成國.他汀類藥物預(yù)防缺血性腦卒中的評價(jià)[J].臨床神經(jīng)病學(xué)雜志,2005,18(6):471-472.

[10] Ameaance P,Amarenco P,Bogousslavsky J,et al.High-dose atorvastatin after stroke or transient ischemic attack [J].N Engl J Med,2006,355:549-559.

[11] 黃方,張緩,劉永華,等.阿托伐他汀鈣治療80歲以上抗磷脂綜合征患者缺血事件的研究[J].實(shí)用老年醫(yī)學(xué),2010,24(4):283-285.

[12] 王德超,李會敏,王彬生,等.阿托伐他汀對大鼠局灶性腦缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用[J].廣東醫(yī)學(xué),2007,28(5):687-689.

R743.3

B

1671-8194（2014）13-0082-02

*通訊作者