陳小英張瑞輝黎婉紅葉志瓊李泳斌

（1 云浮市人民醫(yī)院，廣東 云浮 527300；2 云浮市藥檢所，廣東 云浮 527300）

對廣金錢草不同部位總黃酮的含量分析

陳小英1張瑞輝1黎婉紅1葉志瓊1李泳斌2

（1 云浮市人民醫(yī)院，廣東 云浮 527300；2 云浮市藥檢所，廣東 云浮 527300）

目的用紫外分光光度法對廣金錢草中不同部位的總黃酮含量進行測定，以便更好地對廣金錢草開發(fā)和利用。方法以蘆丁為對照品，用三氯化鋁為絡合劑，HAc-NaAc（pH=5.5）為緩沖液，采用紫外分光光度法測定。結果廣金錢草的因環(huán)境條件等差異總黃酮量亦不同，野生連錢草的含量無論部位和平均含量都較種植要高，比較測量二者莖、葉、全草的含量分別為種植：10.81、15.85、13.29 mg/g，而野生：15.49、22.89、18.69 mg/g。結論廣金錢草總黃酮含量分布表明葉＞全草＞莖。該方法操作性強，有助于對其藥材質(zhì)量控制，更好地對廣金錢草的開發(fā)和利用。

廣金錢草；不同部位；總黃酮；含量分析

1 儀器與試劑

1.1 儀器：UV-2102PCS型紫外可見分光光度計（上海兄尼柯儀器有限公司），EX223電子分析天平（上海奧豪斯儀器有限公司），DHG-9003型電熱恒溫。鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司），VCY-100超聲波處理器VCY-100超聲波處理器VCY-100超聲波處理器VCY-900（上海研永超聲設備有限公司），玻璃柱（1.5 cm× 20 cm，江陰市新輝層析設備有限公司），柱層析用聚酰胺（100-200目），F(xiàn)w-100高速萬能粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）。樣品野生品采自云浮市新興縣車崗鎮(zhèn)街附近，培養(yǎng)種植品購于云浮一卓醫(yī)藥公司，采集時間均為采收期9月中旬，后由云浮藥檢所李泳斌檢驗員鑒定為廣金錢草正品。

1.2 試劑：蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所）；乙醇、純化水、氯化鋁、HAc-NaAc緩沖液等，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備：精密稱取在120 ℃下干燥至恒重的標準品蘆丁6.29 mg，置于25 mL容量瓶中，加入50%乙醇適量后水浴上加熱，溶解后靜置冷卻，向容量瓶加再入50%乙醇至刻度，定容，制得濃度為0.2516 mg/mL的無水蘆丁對照品。

2.2 樣品試液的制備

2.2.1 樣品預處理：將采集鮮品按莖、葉和地上部位（全草）分離后晾置10 d，分別置于電熱恒溫干燥箱100 ℃烘干，用粉碎機粉碎成0.45 mm粉末，混勻，分別裝入干凈的廣口瓶，存放在干燥器里，待用。

表1 對照品和供試品的某—濃度吸光度的變化

表2 加樣回收實驗結果

2.2.2 總黃酮的提?。悍謩e各樣品粉末精密稱取0.4 g，置于塞錐形瓶中，精密加入50%的乙醇20 mL，密塞，稱定重量，超聲處理40 min，取出，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液10 mL，過聚酰胺柱（濕法裝柱法），以50%乙醇洗脫，收集洗脫液并定容至50 mL，搖勻，靜置[4]。

2.3 波長的選擇：參考文獻選擇在272 nm處作為測得最大吸收度的波長[5]。

2.4 線性關系的考察：精確量取對照品溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL分置于25 mL容量瓶中，分別加入三氯化鋁（0.1 mol/L）1.0 mL，HAc-NaAc緩沖液（pH=5.5）1.0 mL，以水稀釋至刻度，搖勻，以試劑作空白，在272 nm波長處測定。以對照品濃度和其吸光度值關系得回歸方程：Y=0.037X-0.034，r=0.996蘆丁濃度在5.032～25.16μg/mL（吸光度A：0.152～0.896）范圍內(nèi)有良好的線性關系。

2.5 精密度的考察：取蘆丁對照品適量，配成測定范圍濃度對照品試液；另取預供試品（全草）適量，按照2.2.2方法配制成供試液。各取適量溶液在60 min內(nèi)分別測量5次，觀察其測定吸收度變化。結果表明，該法的精密度良好，其測量吸收度RSD分別為：0.23%，0.26%（表1）。

2.6 穩(wěn)定性試驗：精密量取各部分供試品溶液3 mL三份，加入顯色劑后于0、10、20、30、40、50、60、70、80、90 min時分別測定吸光度。結果表明，樣品的總黃銅化合物與鋁離子形成的在70 min內(nèi)穩(wěn)定，RSD為1.32%（n=6）。

2.7 重現(xiàn)性試驗：取本品同一批樣品（全草）5份.按“2.2.2”項平行值得供試品，測定吸收度.并計算含量，其含量的RSD%為1.3%，顯示實驗重復性好。

2.8 加樣回收率實驗：精密稱取已知含量的廣金錢草（13.82 mg/g）藥材5份，約0.3 g，制成供試液后分別定量加入適量對照品溶液1、2.5、5、7.5、10 mL（0.2516 mg/mL，采用高中低五組份量分別加樣）按測定法進行試驗，得平均回收率為102.2%，RSD1.73%，見表2。

2.9 廣錢草不同部位的總黃酮分析：分別取野生及種植廣金錢草各3批次，樣品分取莖、葉、全草不同部位經(jīng)預處理后，在優(yōu)化條件下的超聲波法提取總黃酮，標準濃度三氯化鋁液顯色，照標準曲線制各項下的方法，加入顯色劑依次測定，計算，結果如表3所示。

表3 不同生長條件的廣金錢草各部位總黃酮的分析

3 討論與總結

3.1 討論

3.1.1 采收期的確定：考慮廣金錢草的生長特性，通過對不同采收期總黃酮的含量抽樣監(jiān)測，選擇在9月中旬，另外從產(chǎn)量上來看，因此時為廣金錢草開始開花的時期，其葉茂盛、莖粗壯，便于采收。

3.1.2 提取黃酮的條件考察：目前，黃酮類提取方法較多，本研究選用較為高效的超聲波輔助提取廣金錢草的總黃酮，選取提取時間、超聲頻率、提取溫度、提取液濃度、提取次數(shù)比5個因素進行單因素正交試驗，考察5個因素對其總黃酮得率的影響，發(fā)現(xiàn)用超聲提取實驗條件在功率500 W，提取溫度40 ℃，超聲時間55 min，以乙醇50%濃度試劑提取兩次時的提取率最高，其中影響廣金錢草總黃酮提取率各因素主次關系為：提取溫度＞超聲時間＞溶劑濃度＞超聲頻率＞提取次數(shù)，故選為最佳提取條件。

3.2 測定方法的選定：目前黃酮類化合物的含量測定方法有高效液相法、比色法紫外分光法等，其中高效液相法操作要求和綜合實驗成本都較高，據(jù)研究，廣金錢草中的黃酮類成分較多，包括異牡荊苷、夏佛塔苷以及異葒草苷等化合物[6]，而采用傳統(tǒng)的亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉比色法因受非黃酮物質(zhì)雜質(zhì)的影響較大，容易造成實驗結果偏高。另外陳思妮，張振秋等[7]用異牡荊苷做為對照品雖可直接法測定總黃酮的含量，但尋找對照品較困難，故亦不采用。

本實驗含量測定結果可看出，廣金錢草中總黃酮的含量在l%～3%之間，與陳豐連等報道相符[6]，但野生和種植連錢草的總黃酮含有一定差異（表3），推測與特殊地理氣候、遺傳多樣性和人工育種密切相關?？傸S酮類成分葉片含量要高于根莖及全草，野生的要比種植含量要高，為充分開發(fā)利用提供重要參考。

[1] 中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:144.

[2] 崔秀梅.金錢草與廣金錢草的區(qū)別[J].光明中醫(yī),2011,26(3):606-607.

[3] 范樹國,王恩忠,邱璐,等.廣金錢草中生物堿的提取方法[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學,2011,2(1):301-303.

[4] 陳連豐.廣金錢草規(guī)范化種植與藥材質(zhì)量研究[J].廣州:廣州中醫(yī)藥大學,2006.

[5] 陳潔.紫外分光光度法測定石淋通片中總黃酮含量[J].中國民康醫(yī)學,2009,21(12):1456-1457.

[6] 陳豐連,馬鑫斌,徐鴻華,等.不同產(chǎn)地廣金錢草藥材質(zhì)量研究[J].廣東藥學院學報,2010,26(3):249-251.

[7] 陳思妮,張振秋.紫外分光光度法測定廣金錢草中總黃酮的含量[J].中華中醫(yī)藥學刊,2007,25(12):36-37.

R284

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1671-8194（2014）13-0077-02廣金錢草（Desmodium styracifolium（Osb.）Merr.）是一種廣泛應用的中藥材，來源豆科的山螞蝗屬植物的干燥地上部分[1]，分布于長江以南的地區(qū)，其中兩廣、福建、湖南為主產(chǎn)區(qū)[2]。具有清熱、除濕、利尿等功效。其入藥枝葉等含有生物堿、黃酮苷、酚類、鞣質(zhì)等多種活性成分[3]，其中所含黃酮類物質(zhì)更具有多種藥理活性，總黃酮成分具有顯著增加人體的冠脈血流量，并可抗炎，以及改善血液循環(huán)等臨床作用，本文對廣金錢草的全草、葉和莖中的總黃酮含量情況進行分析，以便更好地對廣金錢草開發(fā)和利用。