鄭榮波 宋麗莉
[摘要] 目的 研究制訂小兒健胃糖漿的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 方法 對山楂、麥冬藥材進(jìn)行薄層色譜鑒別;高效液相法采用雙波長、梯度洗脫,同時(shí)測定白芍和牡丹皮中的芍藥苷、陳皮藥材中的橙皮苷含量。 結(jié)果 薄層色譜鑒別分離度好,專屬性強(qiáng),方法可行;含量測定在檢測波長芍藥苷(230 nm)、橙皮苷(283 nm)條件下,分別在7.68~491.76、7.66~491.72 μg呈良好的線性關(guān)系,回歸方程為Y=11.305X-21.52、R2=0.9995(n=7),Y=16.843X+6.952、R2=0.9999(n=7),平均回收率為99.14%,RSD=1.99%、99.85%,RSD=2.57%。 結(jié)論 本方法操作簡單、數(shù)據(jù)精確、專屬性強(qiáng),可為提高小兒健胃糖漿質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供合理依據(jù)。
[關(guān)鍵詞] 小兒健胃糖漿;山楂;麥冬;陳皮、白芍;薄層色譜法;雙波長高效液相法。
[中圖分類號] R927.11 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721(2014)03(a)-0008-04
小兒健胃糖漿是由山楂、麥冬、陳皮、白芍、牡丹皮等11味藥材組成的中藥制劑,具有健脾消食,清熱養(yǎng)陰之功效,主要用于脾胃陰虛所致的食欲減退、消化不良。該處方于1995年收載于原衛(wèi)生部《藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第10冊[1],是本公司主要品種之一。由于歷史原因,該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有糖漿劑的常規(guī)檢查項(xiàng)目,不符合目前藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。本實(shí)驗(yàn)是在原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行提高與完善、研究與探索,同時(shí)增加薄層色譜鑒別和高效液相含量測定檢驗(yàn)項(xiàng)目,以力求科學(xué)、客觀地評價(jià)新質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可行性和適用性。
1 儀器、試劑與藥品
高效液相色譜儀:Agilent 1100型號,DAD檢測器;電子天秤:Sartorius-CPA225D,十萬分之一;CMAG REPROSTARⅡ型號成像系統(tǒng);硅膠G板(Merck薄層板,德國進(jìn)口);乙腈(色譜純),水(超純水);C18固相萃取小柱(Water Sep-pak);其余試劑均為分析純;麥冬和山楂對照藥材(中國藥品生物制品檢定所,批號:121013-201009、1138-20000,供鑒別用),芍藥苷和橙皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110736-201035、110721-201014,供含量測定用);小兒健胃糖漿和缺麥冬、山楂、陳皮、白芍和牡丹皮陰性樣品(由廣州王老吉藥業(yè)股份有限公司提供)。
2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
2.1 麥冬薄層色譜鑒別
取本品50 ml,加水40 ml、鹽酸0.5 ml,乙醚30 ml,加熱回流30 min,放冷,分取乙醚液,酸水層再用乙醚萃取2次,每次20 ml,合并乙醚液,揮干,殘?jiān)右宜嵋阴? ml溶解。作為供試品溶液[2-4]。取麥冬對照藥材2 g,加甲醇15 ml,超聲處理30 min,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)铀?0 ml溶解,自“鹽酸0.5 ml……”起,同法制成對照藥材溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各6 μl,分別條狀點(diǎn)樣于同一硅膠G板上,以二氯甲烷-甲醇(40∶1)為展開劑,展開,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰,放冷。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性無干擾。結(jié)果具體見圖1。
2.2 山楂薄層色譜鑒別
取“2.1”項(xiàng)下的樣品作為供試品溶液。另取山楂對照藥材2 g,加1%鹽酸乙醇液30 ml,超聲處理30 min,濾過,蒸干,殘?jiān)訜o水乙醇1 ml溶解,作為對照藥材溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》一部附錄ⅥB)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各8 μl,分別條帶狀點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上,以乙醚-二氯甲烷-甲酸(5∶5∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,于105℃加熱15 min,噴以溴酚藍(lán)試液。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)[5]。陰性無干擾。結(jié)果具體見圖2。
2.3 白芍、牡丹皮、陳皮含量的測定
2.3.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)
色譜柱:Phenomenex Luna柱(250 mm×4.6 mm×5 μm);以乙腈為流動(dòng)相A,0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相B;流動(dòng)相設(shè)置具體見表1。按表1中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;流速為1 ml/min,檢測波長:230 nm(芍藥苷)、283 nm(橙皮苷);柱溫為35℃。理論板數(shù)以芍藥苷計(jì)算應(yīng)≥3000,芍藥苷與相鄰峰之間的分離度均>1.5。
2.3.2 檢測波長的確定
高效液相色譜儀:Agilent 1100,DAD檢測器,對芍藥苷、橙皮苷對照溶液進(jìn)行光譜掃描,波長范圍為200~400 nm,結(jié)果芍藥苷在230 nm處有最大吸收,橙皮苷在283 nm處有最大吸收。結(jié)果具體見圖3、圖4。
2.3.3 專屬性試驗(yàn)
2.3.3.1 對照品溶液的配制 取芍藥苷和橙皮苷對照品各適量,精密稱定,加甲醇制成每毫升各含30 μg的混合溶液,搖勻,即得(圖5)。
2.3.3.2 供試品溶液的配制 精密量取本品10 ml,通過已處理好的C18小柱(規(guī)格:500 mg,先用甲醇10 ml沖洗,再用水10 ml沖洗,備用),依次用水、5%甲醇、60%甲醇各15 ml進(jìn)行洗脫,收集60%甲醇洗脫液,蒸干,殘?jiān)?0%甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5 ml量瓶中,用60%甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得(圖6)。
2.3.3.3 陰性對照溶液的制備 ①取缺白芍和牡丹皮藥材的處方制劑,按一定的比例制成陰性樣品、再按供試品溶液的配制方法制成缺白芍和牡丹皮陰性對照溶液;②取缺陳皮藥材的處方制劑,按一定的比例制成陰性樣品、再按供試品溶液的配制方法制成缺陳皮陰性對照溶液。
2.3.3.4 將以上3種溶液分別注入高效液相色譜儀中,得色譜圖(圖7、圖8)。結(jié)果:白芍和牡丹皮、陳皮均陰性無干擾,該方法專屬性強(qiáng)。
2.3.4 線性關(guān)系的考察
2.3.4.1 芍藥苷 取芍藥苷對照品適量,分別配制成每毫升各含7.68、15.37、30.74、61.47、122.94、245.88、481.76 μg溶液,進(jìn)樣量為10 μl。以對照品量(μg)為橫坐標(biāo)(X),峰面積為縱坐標(biāo)(Y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線;芍藥苷的線性方程:Y=11.305X-21.52,R2=0.9995。結(jié)果芍藥苷在7.68~491.76 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.3.4.2 橙皮苷 取橙皮苷對照品適量,分別配制成每毫升各含7.66、15.33、30.67、61.34、122.68、245.36、481.72 μg溶液,進(jìn)樣量為10 μl。以對照品量(μg)為橫坐標(biāo)(X),峰面積為縱坐標(biāo)(Y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線;橙皮苷的線性方程:Y=16.843X+6.952,R2=0.9999。結(jié)果橙皮苷在7.66~491.72 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)
取同一批號樣品6份,精密量取,按供試品溶液制備方法,測定,計(jì)算。芍藥苷含量的RSD=1.26%;橙皮苷含量的RSD=0.69%。
2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)
取同一供試品溶液,在0、2、4、8、16、24、48 h分別進(jìn)樣,測定,計(jì)算,結(jié)果芍藥苷含量的RSD=1.78%;橙皮苷含量的RSD=0.44%,說明供試品溶液至少在48 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.3.7 精密度考察
取對照品溶液10 μl,連續(xù)進(jìn)樣5次,測定芍藥苷和橙皮苷峰面積值,分別計(jì)算得RSD=0.72%、0.33%。結(jié)果所建立方法具有良好的精密度。
2.3.8 加樣回收率考察
精密量取樣品5 ml(已知含量),分別精密加入一定量的芍藥苷和橙皮苷對照品,測定,計(jì)算回收率,結(jié)果見表2、表3。
3 討論
小兒健胃糖漿對于嬰幼兒的脾胃陰虛所致的食欲減退、消化不良有良好的治療作用,本研究在原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上,增加了麥冬和山楂的薄層鑒別,白芍和牡丹皮、陳皮的含量測定。
處方中的白芍具有養(yǎng)血柔肝、緩中止痛、斂陰收汗的功能;陳皮具有理氣和中,燥濕化痰,利水通便的功能[6],均為處方中的主要成分,曾有許多文獻(xiàn)分別報(bào)道了檢測白芍和陳皮含量的方法[7-9]。但本實(shí)驗(yàn)采用雙波長,梯度洗脫方法測定白芍和陳皮的含量,達(dá)到減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間的目的。
橙皮苷同時(shí)在波長230 nm和283 nm處有吸收峰,但230 nm波長,有干擾而分離度差,283 nm無干擾、分離度好,并與《中國藥典》中“陳皮”藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的吸收波長一致[10],故該方法中陳皮的吸收波長確定為283 nm。
由于該制劑為糖漿劑,曾采用正丁醇萃取、D101大孔樹脂柱分離法、固相萃取法等三種方法,分別同時(shí)提取白芍和牡丹皮中的芍藥苷和陳皮中的橙皮苷,再采用雙波長檢測、梯度洗脫,進(jìn)行含量測定,結(jié)果三種提取方法數(shù)據(jù)基本一致,重現(xiàn)性好,數(shù)據(jù)精確,但是固相萃取法操作簡單,方便快捷。
[參考文獻(xiàn)]
[1] 衛(wèi)生部.藥品標(biāo)準(zhǔn)——中藥成方制劑(第10冊)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1995:11.
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[3] 熊銀鷹,趙冰清.麥冬與山麥冬的鑒別[J].湖南中醫(yī)雜志,2003,19(1):53.
[4] 潘會(huì)朝,鄧戈.麥冬類藥材的薄層色譜與紫外光譜鑒別[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘,2003,2(5):838.
[5] 國家藥典委員會(huì).中國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:611、附錄ⅥB、ⅥD.
[6] 王玉琴.小兒止咳糖漿的藥理研究[J].黑龍江科技信息,2012,(10):64.
[7] 嚴(yán)玉平,由會(huì)玲,李國川,等.芍藥及不同炮制品中在芍藥甘草湯中芍藥苷含量的差異研究[J].中國藥房,2009, 20(6):463-465.
[8] 梁晨,徐思思,聶詩明.高效液相色譜法測定香砂養(yǎng)胃丸中橙皮苷的含量[J].數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志,2012,(6):688-690.
[9] 劉志才.平胃膠囊中橙皮苷的含量測定[J].黑龍江醫(yī)藥,2003,16(5):437-438.
[10] 項(xiàng)菲,肖燕.高效液相色譜法測定小兒止咳糖漿橙皮苷的含量[J].中國民族民間醫(yī)藥雜志,2008,17(7):31-32.
(收稿日期:2014-01-02 本文編輯:林利利)
2.3.4 線性關(guān)系的考察
2.3.4.1 芍藥苷 取芍藥苷對照品適量,分別配制成每毫升各含7.68、15.37、30.74、61.47、122.94、245.88、481.76 μg溶液,進(jìn)樣量為10 μl。以對照品量(μg)為橫坐標(biāo)(X),峰面積為縱坐標(biāo)(Y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線;芍藥苷的線性方程:Y=11.305X-21.52,R2=0.9995。結(jié)果芍藥苷在7.68~491.76 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.3.4.2 橙皮苷 取橙皮苷對照品適量,分別配制成每毫升各含7.66、15.33、30.67、61.34、122.68、245.36、481.72 μg溶液,進(jìn)樣量為10 μl。以對照品量(μg)為橫坐標(biāo)(X),峰面積為縱坐標(biāo)(Y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線;橙皮苷的線性方程:Y=16.843X+6.952,R2=0.9999。結(jié)果橙皮苷在7.66~491.72 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)
取同一批號樣品6份,精密量取,按供試品溶液制備方法,測定,計(jì)算。芍藥苷含量的RSD=1.26%;橙皮苷含量的RSD=0.69%。
2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)
取同一供試品溶液,在0、2、4、8、16、24、48 h分別進(jìn)樣,測定,計(jì)算,結(jié)果芍藥苷含量的RSD=1.78%;橙皮苷含量的RSD=0.44%,說明供試品溶液至少在48 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.3.7 精密度考察
取對照品溶液10 μl,連續(xù)進(jìn)樣5次,測定芍藥苷和橙皮苷峰面積值,分別計(jì)算得RSD=0.72%、0.33%。結(jié)果所建立方法具有良好的精密度。
2.3.8 加樣回收率考察
精密量取樣品5 ml(已知含量),分別精密加入一定量的芍藥苷和橙皮苷對照品,測定,計(jì)算回收率,結(jié)果見表2、表3。
3 討論
小兒健胃糖漿對于嬰幼兒的脾胃陰虛所致的食欲減退、消化不良有良好的治療作用,本研究在原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上,增加了麥冬和山楂的薄層鑒別,白芍和牡丹皮、陳皮的含量測定。
處方中的白芍具有養(yǎng)血柔肝、緩中止痛、斂陰收汗的功能;陳皮具有理氣和中,燥濕化痰,利水通便的功能[6],均為處方中的主要成分,曾有許多文獻(xiàn)分別報(bào)道了檢測白芍和陳皮含量的方法[7-9]。但本實(shí)驗(yàn)采用雙波長,梯度洗脫方法測定白芍和陳皮的含量,達(dá)到減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間的目的。
橙皮苷同時(shí)在波長230 nm和283 nm處有吸收峰,但230 nm波長,有干擾而分離度差,283 nm無干擾、分離度好,并與《中國藥典》中“陳皮”藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的吸收波長一致[10],故該方法中陳皮的吸收波長確定為283 nm。
由于該制劑為糖漿劑,曾采用正丁醇萃取、D101大孔樹脂柱分離法、固相萃取法等三種方法,分別同時(shí)提取白芍和牡丹皮中的芍藥苷和陳皮中的橙皮苷,再采用雙波長檢測、梯度洗脫,進(jìn)行含量測定,結(jié)果三種提取方法數(shù)據(jù)基本一致,重現(xiàn)性好,數(shù)據(jù)精確,但是固相萃取法操作簡單,方便快捷。
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(收稿日期:2014-01-02 本文編輯:林利利)
2.3.4 線性關(guān)系的考察
2.3.4.1 芍藥苷 取芍藥苷對照品適量,分別配制成每毫升各含7.68、15.37、30.74、61.47、122.94、245.88、481.76 μg溶液,進(jìn)樣量為10 μl。以對照品量(μg)為橫坐標(biāo)(X),峰面積為縱坐標(biāo)(Y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線;芍藥苷的線性方程:Y=11.305X-21.52,R2=0.9995。結(jié)果芍藥苷在7.68~491.76 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.3.4.2 橙皮苷 取橙皮苷對照品適量,分別配制成每毫升各含7.66、15.33、30.67、61.34、122.68、245.36、481.72 μg溶液,進(jìn)樣量為10 μl。以對照品量(μg)為橫坐標(biāo)(X),峰面積為縱坐標(biāo)(Y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線;橙皮苷的線性方程:Y=16.843X+6.952,R2=0.9999。結(jié)果橙皮苷在7.66~491.72 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)
取同一批號樣品6份,精密量取,按供試品溶液制備方法,測定,計(jì)算。芍藥苷含量的RSD=1.26%;橙皮苷含量的RSD=0.69%。
2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)
取同一供試品溶液,在0、2、4、8、16、24、48 h分別進(jìn)樣,測定,計(jì)算,結(jié)果芍藥苷含量的RSD=1.78%;橙皮苷含量的RSD=0.44%,說明供試品溶液至少在48 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.3.7 精密度考察
取對照品溶液10 μl,連續(xù)進(jìn)樣5次,測定芍藥苷和橙皮苷峰面積值,分別計(jì)算得RSD=0.72%、0.33%。結(jié)果所建立方法具有良好的精密度。
2.3.8 加樣回收率考察
精密量取樣品5 ml(已知含量),分別精密加入一定量的芍藥苷和橙皮苷對照品,測定,計(jì)算回收率,結(jié)果見表2、表3。
3 討論
小兒健胃糖漿對于嬰幼兒的脾胃陰虛所致的食欲減退、消化不良有良好的治療作用,本研究在原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上,增加了麥冬和山楂的薄層鑒別,白芍和牡丹皮、陳皮的含量測定。
處方中的白芍具有養(yǎng)血柔肝、緩中止痛、斂陰收汗的功能;陳皮具有理氣和中,燥濕化痰,利水通便的功能[6],均為處方中的主要成分,曾有許多文獻(xiàn)分別報(bào)道了檢測白芍和陳皮含量的方法[7-9]。但本實(shí)驗(yàn)采用雙波長,梯度洗脫方法測定白芍和陳皮的含量,達(dá)到減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間的目的。
橙皮苷同時(shí)在波長230 nm和283 nm處有吸收峰,但230 nm波長,有干擾而分離度差,283 nm無干擾、分離度好,并與《中國藥典》中“陳皮”藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的吸收波長一致[10],故該方法中陳皮的吸收波長確定為283 nm。
由于該制劑為糖漿劑,曾采用正丁醇萃取、D101大孔樹脂柱分離法、固相萃取法等三種方法,分別同時(shí)提取白芍和牡丹皮中的芍藥苷和陳皮中的橙皮苷,再采用雙波長檢測、梯度洗脫,進(jìn)行含量測定,結(jié)果三種提取方法數(shù)據(jù)基本一致,重現(xiàn)性好,數(shù)據(jù)精確,但是固相萃取法操作簡單,方便快捷。
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(收稿日期:2014-01-02 本文編輯:林利利)