易遠紅

（四川省成都中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，四川成都 610072）

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赤首烏與白首烏的HPLC指紋圖譜鑒定

易遠紅

（四川省成都中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，四川成都 610072）

【摘要】目的分析研究白首烏和赤首烏的HPLC指紋圖譜的鑒定方法。方法采取DAD（RP-HPLC）方法，對赤首烏和白首烏進行測定和對比分析。結果何首烏的各個樣品指紋圖譜相似，白首烏的指紋圖譜有一定區(qū)別，兩者加工之前和以后也有不同。結論對赤首烏和白首烏可以采取HPLC指紋圖譜鑒定。

【關鍵詞】指紋圖譜；HPLC；赤首烏；白首烏

根據相關報道表明[1]，何首烏一共分為兩種，其中包括赤首烏和白首烏。其具有益氣、延年益壽以及滋補肝腎等功效，屬于一種常用中藥。本文筆者采取HPLC方法對白首烏和赤首烏的指紋圖譜給予分析研究，現將具體情況報告如下。

1　材料

何首烏采自河南、廣東、四川、廣西等地方或者為市場銷售品種，一共分為十份樣品，經過本文作者鑒定全部為蓼科植物何首烏當中的塊根。制作何首烏來自安徽，經過鑒定屬于其加工產品。白首烏采取河北以及山東等相關地方。何首烏粉來自市場銷售產品，來自長沙博健生物科技有限公司，生產許可證編號QS：430114020021。

2　炮制加工方法和結果

2.1色譜條件

色譜柱：安捷倫zorbax extend-c18分析柱（250毫米×4.6毫米，5μm）。流動相：A（水）和B（乙腈）梯度洗脫，其條件0分鐘→60分鐘，水（%）97-0，乙腈（%）2-100,60分鐘→80分鐘，水（%）0-0，乙腈（%）100→100。體積流量：每分鐘一毫升。色譜柱溫度：25°C。檢測波長：210納米。參比波長：360納米。分析時間為80分鐘。進樣量為20μL。

2.2供試品制備

采取藥材粗粉5克，置入燒瓶當中，加入酒精100毫升，采取水浴加熱回流，一共提取三次，同時聯合濾液，把其濃縮到小體積，采取氯仿40毫升，并提煉兩次，將提煉液合并，采取無水硫酸鈉脫水，濾過，濾過液一直濃縮到合適體積，蒸干，剩余殘渣加入異丙醇進行溶解，一定要溶解到25毫升容量瓶當中。采取濾膜（微孔）進行過濾，其過濾液當做供試品[2]。

2.3對照品制備

對照物品采取大黃素，其一定要適量，加入甲醇，制作成為溶液，每毫升為20μg。

2.4方法學

采取廣東產出得何首烏藥材當做樣品，對其儀器精密度、穩(wěn)定性以及實驗方法重現性進行考察，實驗結果顯示，穩(wěn)定性和重現性明顯；（1）穩(wěn)定性實驗：采取相同溶液（供試品），分別在0h、2h、4h、7h、11h、16h、22h、29h、36h給予檢測，對色譜峰保留時間是否一致進行考察，各個色譜峰的時間RSD為0.2%-2.9%；（2）精密度實驗：采取相同溶液（供試品），一共進樣五次，對色譜峰保留時間是否一致進行考察，各個色譜峰的時間RSD全部在3%以下；（3）重現性實驗：采取相同溶液（供試品），一共五分，采取同一方法進行檢測，對色譜峰保留時間是否一致進行考察，以tR為36.2分鐘的大黃素峰當做對照組，各個色譜峰的時間RSD全部在3%以下。對疊加色譜圖進行觀察，這樣能夠對峰位明顯重合進行判斷[3]。

2.5建立指紋圖譜

將兩種實驗品溶液分別吸取20μL，注入HPLC，按照選擇好的色譜條件給予檢測，具體情況見圖1。

2.6指紋圖譜分析

2.6.1共同擁有指紋峰標定經過和對照品進行對照組，何首烏標定九個共同擁有峰當做其特征峰，炮制何首烏標定五個共同擁有指紋特征峰。和對照品峰當中的五號峰作對比，其當中的八個共同擁有指紋峰相對應的保留時間包括栽培品：0.118、0.642、0.732、0.928、1.152、1.487、1.521以及2.079，野生品：0.102、0.715、0.854、0.906、1.125、1469、1.516以及2.028。炮制何首烏其他四個共同擁有指紋峰相對應的保留時間包括:0.852、1.137、1.484以及2.039。白首烏的色譜圖標定八個共同擁有指紋特征峰，以供試品當中保留時間在38分鐘的共同擁有指紋峰當做參照，和三號峰相對比，其余七個共同擁有指紋峰相對應的保留時間包括：0.100、0.338、1.065、1.231、1.276、1.389以及1.779；

圖1　赤首烏和白首烏高效液相色譜儀指紋圖譜

2.6.2其相似程度評價把十個批次樣品測試數據放到中藥指紋圖譜相似度計算軟件，通過選峰，并設置模板（匹配），把譜峰自主匹配。之后根據設置好的模板，對其差異和相似給予評價。兩種何首烏指紋圖譜對比：根據各個指紋圖譜當中，能夠發(fā)現，兩種何首烏指紋圖譜存在差異，其特征峰部位、數目以及積分值都有明顯不同，何首烏當中存在大黃素，然而白首烏無大黃素。

3　討論

在優(yōu)化色譜條件期間，第一是對何首烏的色譜圖進行考察，之后對白首烏色譜峰分離情況進行分析。通過實驗對比，以乙腈和水當做流動相，根據以上數據實施梯度洗脫，可以將其當中的各個色譜峰進行分離，同時出峰非常多。然而采取DAD對波長進行考察，同時對不是同一波長的色譜圖進行對比，實驗結果在230納米之下，何首烏色譜圖當中的峰非常多，信息也相對較多，因此，采取230納米當做對波長的檢測標準。

本文結果顯示，何首烏當中不同樣品的指紋圖譜相似度明顯，然而其和白首烏指紋圖譜有較大差異，炮制何首烏之前和以后，白首烏加工之前和以后的指紋圖譜有明顯區(qū)別。其顯示的區(qū)別，通常是因為其采取炮制以后聯合型蒽醌量下降，然而游離型蒽醌量增多。另外，白首烏在加工期間，C21甾苷類流失較多造成的。因此，可以表明對赤首烏和白首烏可以采取HPLC指紋圖譜鑒定，并操作非常簡便，重現性和特征性良好。

參考文獻

［1］劉訓紅,陳斌,蔡寶昌,王玉璽.赤首烏和白首烏的HPLC指紋圖譜鑒定研究[J].中草藥，2011,36（11）：1705.

［2］劉旭.不同產地首烏藥材HPLC指紋圖譜的研究[J].中華醫(yī)藥雜志，2011,34（2）：153.

［3］何文斐，李士敏.中藥色譜指紋圖譜的研究進展[J].時珍國醫(yī)國藥，2013，14（4）：238.

作者簡介：易遠紅，1973年生，男，本科學歷，主要從事醫(yī)院相關中藥學等工作。