陳榮倉(cāng) 林碧 張鋒 鄭璐 徐思莉 陳通

溫州地區(qū)獻(xiàn)血者Kidd血型基因頻率調(diào)查與輸血風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

陳榮倉(cāng) 林碧 張鋒 鄭璐 徐思莉 陳通

目的 調(diào)查溫州地區(qū)獻(xiàn)血者Kidd血型基因頻率的分布，對(duì)Kidd血型不配合的輸血風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估。方法采用尿素溶血試驗(yàn)，對(duì)36 235例獻(xiàn)血者進(jìn)行Jk（a-b-）稀有血型進(jìn)行篩選，隨機(jī)抽取672例獻(xiàn)血者的標(biāo)本采用微量板法進(jìn)行Kidd血型抗原的鑒定，再用血清學(xué)方法對(duì)JK（a-b-）表型和可疑的Kidd血型抗原的確認(rèn)。結(jié)果在36 235例獻(xiàn)血者中篩選出5例Jk（a-b-）表型，分布頻率為0．014%，基因頻率為0．012。672例獻(xiàn)血者中，Jka和Jkb的基因頻率分別為0．44和0．56。Jka和Jkb不配合的概率分別為0．21和0．16，Jka和Jkb不配合的概率合計(jì)為0．37。結(jié)論Kidd血型系統(tǒng)基因頻率符合Hardy-weinberg群體遺傳平衡法則；若懷疑為Kidd血型系統(tǒng)抗體時(shí)，應(yīng)采用多種配血方法，以確保輸血的安全。

獻(xiàn)血者 Kidd血型 尿素溶血試驗(yàn) 基因頻率 輸血風(fēng)險(xiǎn)

Kidd血型系統(tǒng)在輸血中具有重要的意義，其紅細(xì)胞上有2個(gè)常見(jiàn)的抗原：Jka抗原和Jkb抗原；其免疫原性微弱,一般對(duì)外來(lái)抗原免疫能力強(qiáng)的人才產(chǎn)生抗-Jka和抗-Jkb。通常情況下，是由懷孕或輸血致敏后產(chǎn)生Jka或Jkb抗體，偶爾引起中等強(qiáng)度的新生兒溶血病（HDN）[1]，但可引起嚴(yán)重的溶血性輸血反應(yīng)，特別是嚴(yán)重的遲發(fā)性輸血反應(yīng)[2-4]。因此，筆者對(duì)溫州地區(qū)獻(xiàn)血者Kidd血型抗原的基因頻率進(jìn)行調(diào)查，同時(shí)評(píng)估在隨機(jī)輸血中Kidd血型不配合引起輸血反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 采取整體抽樣的原則，收集2013-03—09溫州地區(qū)36 235例獻(xiàn)血者，年齡18～55歲，且無(wú)親緣關(guān)系的血液標(biāo)本，均采用乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝的靜脈血，4℃保存。

1.2 試劑和儀器 分析純尿素試劑（上海達(dá)瑞精細(xì)化學(xué)品有限公司，批號(hào)：20120912）使用前配制為2mol/L的溶液（稱(chēng)取尿素125g，溶解于1 000ml的蒸餾水中配制而成）；Liss溶液（上海血液生物醫(yī)藥有限公司，批號(hào)：20130701）；抗-Jka試劑血清（英國(guó)Millipore公司，批號(hào)：BIB1102B）和抗-Jkb試劑血清（德國(guó)Bio-Rad公司，批號(hào)：2246091）；96孔U型微量板（德國(guó)greiner Bio-Rad公司）；Galileo Neo全自動(dòng)加樣儀（美國(guó)Immucor公司）；TL-5.0臺(tái)式平板離心機(jī)（上海市離心機(jī)械研究所）；振蕩器（德國(guó)Hettich公司）；KA2200臺(tái)式離心機(jī)（日本久保田株式會(huì)社）。

1.3 方法

1.3.1 2mol/L尿素溶血試驗(yàn)[5]對(duì)Jk(a-b-)表型的篩選采用微量板法。通過(guò)Galieo Neo全自動(dòng)加樣儀處理標(biāo)本和試劑：將EDTA-K2抗凝血用0.9%氯化鈉溶液將每份標(biāo)本制成2%紅細(xì)胞懸液（壓積紅細(xì)胞4μl+0.9%氯化鈉溶液200μl），并將2%紅細(xì)胞懸液20μl加入到微量板相應(yīng)的U型孔中，再分別加入2mol/L尿素溶液100μl，完成標(biāo)本和試劑分配的微孔板由有傳送帶自動(dòng)傳出后，置于震蕩器上，微震混勻后靜置1～2min，在平板離心機(jī)上2 000r/min離心1 min，溶血為陽(yáng)性，反之為陰性。

1.3.2 Kidd血型抗原的檢測(cè) 采用微孔板法。通過(guò)Galieo Neo全自動(dòng)加樣處理標(biāo)本和試劑：將EDTA-K2抗凝血用Liss溶液將每份標(biāo)本制成2%紅細(xì)胞懸液（壓積紅細(xì)胞4μl+Liss溶液200μl），并將2%紅細(xì)胞懸液20μl加入到96孔U形微孔板孔中，分別將抗-Jka和抗-Jkb試劑血清各20μl加入96孔U形微孔板相應(yīng)孔中，完成標(biāo)本和試劑分配的微孔板由有傳送帶自動(dòng)傳出后，置于震蕩器，振蕩混勻后，置于4℃冰箱60min，其間微量板微振混勻3次，取出微孔板，置于平板離心機(jī)2 000r/mim離心1min，微振后肉眼觀察結(jié)果，發(fā)生凝集為有相應(yīng)的抗原，反之為無(wú)相應(yīng)的抗原。

1.3.3 對(duì)JK（a-b-）表型和可疑的Kidd血型抗原的確認(rèn) 采用鹽水試管法。取2支潔凈試管，分別加入抗-JKa血清和抗-JKb血清各50μl，再加入2%受檢者紅細(xì)胞懸液50μl，混勻，3 500r/min離心18s，肉眼觀察結(jié)果。用已知的JK（a+b-）和JK（a-b+）紅細(xì)胞（上海血液生物醫(yī)藥有限公司）作為對(duì)照。

1.4 JKa、JKb抗原在隨機(jī)輸血中不配合的概率計(jì)算根據(jù)Kidd血型基因頻率計(jì)算隨機(jī)輸血中Kidd抗原不配合的概率[6]。在隨機(jī)輸血中，Jka抗原不配合的概率為Pa=b2（1-b2）；Jkb抗原不配合的概率為Pb=a2（1-a2）。Jka、Jkb抗原不配合概率合計(jì)Pa+Pb=2ab（1-ab）（a和b分別代表Jka、Jkb基因頻率）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SSPS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。參照文獻(xiàn)[7]進(jìn)行基因頻率計(jì)算，經(jīng)χ2檢驗(yàn)比較表型分布的期望值與觀察值，驗(yàn)證是否符合Hardy-weinberg平衡法則。

2 結(jié)果

2.1 Jk（a-b-）表型的篩選 使用2mol/L尿素溶血試驗(yàn)從36 235例標(biāo)本中篩選出5例Jk（a-b-）表型陰性樣本，再經(jīng)鹽水試管法血清學(xué)鑒定，均確認(rèn)為Jk（a-b-）表型，分布頻率為0.014%，基因頻率為0.012。

2.2 Kidd血型抗原檢測(cè) 從36 235例標(biāo)本中，隨機(jī)抽取的672例獻(xiàn)血者標(biāo)本共檢測(cè)到3種表現(xiàn)型：Jk（a+ b-）、Jk（a-b+）和Jk（a+b+），未檢測(cè)到Jk（a-b-）表現(xiàn)型?；蝾l率Jka=0.44，Jkb=0.56，Jkb＞Jka，各表型觀察值與期望值的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），資料符合Hardy-weinberg分布，詳見(jiàn)表1。

表1 672例獻(xiàn)血者Kidd血型分布和基因頻率分布

2.3 Jka和Jkb血型抗原不配合的概率 Jka不配合的概率為0.21，Jkb不配合的概率為0.16，Jka和Jkb不配合的概率合計(jì)為0.37。抗-Jka隨機(jī)輸血不配合的概率為0.68，抗-Jkb隨機(jī)輸血不配合的概率為0.80。

3 討論

1951年Allen等首先報(bào)道了Jka抗原，兩年后Plaut等報(bào)道了其對(duì)偶Jkb抗原[8]。1997年，國(guó)際輸血協(xié)會(huì)（ISBT）確定Kidd血型3種血型抗原，分別是Jka（Jk1）、Jkb（Jk2）和Jk3（Jk3），存在4種不同的表型：Jk（a+b-）、Jk（a-b+）、Jk（a+b+）和Jk（a-b-）。其中Jk（a-b-）表型是Pinkerton等于1959年首先在菲律賓人中報(bào)道的，是由遺傳同型的隱性對(duì)偶基因形成，JK（a-b-）表型的人沒(méi)有Jka、Jkb和Jk3抗原；隨后有文獻(xiàn)報(bào)道，罕見(jiàn)Jk（ab-）表型分布頻率存在種族和人群的差異，在太平洋的波利尼西亞人群中，分布頻率高達(dá)0.1%～1.4%，而歐洲人群中，該表型的分布頻率極低，在芬蘭人群中為0.03%[9]。而東亞人群中，北方人群顯示較低的分布頻率，如日本（0.0022%）[10]、上海（0.0039%）[11]和長(zhǎng)春（0.005%）[12]。而南方人群顯示有相對(duì)較高的分布頻率，如成都（0.022%）[13]、中國(guó)臺(tái)灣（0.023%）[14]和泰國(guó)（0.025%）[15]。而溫州地區(qū)尚無(wú)此相關(guān)數(shù)據(jù)。根據(jù)Jk（a-b-）表型的人紅細(xì)胞對(duì)2mol/L尿素的溶血有抵抗性，筆者使用2mol/L尿素試驗(yàn)篩查36 235例獻(xiàn)血者標(biāo)本，篩選出5例Jk（a-b-）表型樣本，分布頻率為0.014%，低于成都、中國(guó)臺(tái)灣和泰國(guó)，但明顯高于日本、上海和南京長(zhǎng)春等其他地區(qū)，調(diào)查結(jié)果提示在不同地域、不同人群之間存在一定的差異。為解決這一類(lèi)患者的臨床輸血問(wèn)題，筆者建議開(kāi)展Jk（a-b-）稀有表型的篩選，建立紅細(xì)胞稀有血型檔案庫(kù)的兄弟血站實(shí)施全省或全國(guó)信息聯(lián)網(wǎng)，可以有效地解決臨床上對(duì)該類(lèi)血型患者輸血問(wèn)題的迫切需求，為搶救患者生命贏得寶貴的時(shí)間是非常有意義的。

在不同種族中，Kidd血型分布存在一定的差異，一般在西方人群中Jka＞Jkb（分別為0.50～0.74和0.26～0.50），在東方人群中則Jkb＞Jka（分別為0.50～0.69和0.31～0.50）[16]。筆者用抗-Jka和抗-Jkb血清分別對(duì)隨機(jī)抽取672例獻(xiàn)血者的標(biāo)本采用微量板法進(jìn)行Kidd血型抗原的鑒定，結(jié)果顯示溫州地區(qū)獻(xiàn)血者Kidd血型表型分布為Jk（a+b+）＞Jk（a-b+）＞Jk（a+b-），未發(fā)現(xiàn)Jk（a+ b-）；基因頻率Jkb＞Jka，符合東方人群Kidd血型基因頻率的分布規(guī)律。經(jīng)Hardy-weinberg吻合度檢驗(yàn)驗(yàn)證，Kidd血型分布狀況及基因頻率相對(duì)穩(wěn)定，符合Hardyweinberg群體遺傳平衡法則。與我國(guó)部分地區(qū)人群相比較，溫州地區(qū)與柳州地區(qū)（Jka=0.47、Jkb=0.53）[17]、四川地區(qū)（Jka=0.45、Jkb=0.55）[18]和上海地區(qū)（Jka=0.48、Jkb= 0.52）[19]和成都地區(qū)（Jka=0.44、Jkb=0.56）[20]Jka、Jkb抗原基因頻率比較接近，與浙江地區(qū)（Jka=0.49、Jkb=0.51）[21]、廣東深圳（Jka=0.41、Jkb=0.59）[16]和寧波地區(qū)（Jka=0.50、Jkb=0.50）[22]比較差距較大，說(shuō)明Kidd血型系統(tǒng)基因頻率存在多態(tài)性分布，具有在不同的人群、不同的地域之間存在一定的差異，這可能由于地域不同、群體遷徙和人口流動(dòng)情況不同而造成。

JK抗體的產(chǎn)生不只是由于Jk（a-b-）、Jk（a+b-）和Jk（a-b+）同樣可產(chǎn)生相對(duì)應(yīng)的抗體，Jk（a+b-）可產(chǎn)生抗Jkb抗體，Jk（a-b+）可產(chǎn)生抗Jka抗體[23]。根據(jù)本次的調(diào)查結(jié)果，估計(jì)在隨機(jī)輸血中Jka和Jkb抗原之間的不配合輸血的風(fēng)險(xiǎn)可能性為0.37。一旦產(chǎn)生抗體，對(duì)于抗-JKa來(lái)說(shuō)，隨機(jī)輸血不配合的可能性為0.68，即Jk（a+ b-）和Jk（a+b+）的表型頻率之和。同理，對(duì)于抗-Jkb來(lái)說(shuō)，隨機(jī)輸血不配合的可能性為0.80，即Jk（a-b+）和Jk（a+b+）的表型頻率之和，因此我們?cè)谂R床輸血中應(yīng)引起高度重視。與大多數(shù)血型抗體不同，抗-Jka、抗-Jkb在活體內(nèi)產(chǎn)生后很快會(huì)消失的特性，經(jīng)輸血免疫后鑒定出的強(qiáng)抗體，可能在數(shù)周或數(shù)月后難以鑒定，這些都是Kidd血型抗體具有臨床意義的原因[24]。因此，對(duì)有輸血史或妊娠史的患者必需進(jìn)行抗體篩查，懷疑為Kidd血型系統(tǒng)抗體時(shí)，實(shí)驗(yàn)室可以通過(guò)加入新鮮血清提高補(bǔ)體的濃度，以及使用鹽水介質(zhì)法、快速聚凝胺法或者卡式配血法的同時(shí)，結(jié)合酶法以及經(jīng)典的抗球蛋白法，采用多種配血方法聯(lián)合檢測(cè)此類(lèi)抗體，防止抗-JKa和抗-JKb漏檢，以保障臨床輸血安全。

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Gene frequency of Kidd blood group and risk assessment of transfusion in blood donors of Wenzhou area

Objective To investigate the gene frequency of Kidd blood group and to assess the risk of mismatched transfusion in Wenzhou area．MethodsBlood samples were collected from 36235 donors in Wenzhou area．The Jk(a-b-) individuals were screened by urea lyses test and Kidd blood group antigens were identified in 672 randomly selected samples by microplate method．The Jk(a-b-)phenotype and suspicious Kidd blood group antigens were confirmed by serological method．ResultsFive individuals with Jk(a-b-)phenotype were screened from 36235 donors,the frequency of Jk(a-b-) was 0．014%and the gene frequency was 0．012．The gene frequency of Jka and Jkb in 672 blood donors was 0．44 and 0．56 respectively．The rate of Jka and Jkb mismatches was 0．21 and 0．16 respectively，with a total mismatch rate of 0．37．ConclusionThe gene frequency of Kidd blood group were consistent with the Hardy-weinberg population-based genetic equilibrium in Wenzhou area．The antibodies of Kidd blood group systems being suspected,it should use a variety of matching method in order to ensure the safety of blood transfusion．

Blood donors Kidd blood group Urea lyses testGene frequency Transfusion risk

2014-01-07）

（本文編輯：嚴(yán)瑋雯）

溫州市醫(yī)藥衛(wèi)生科研資助項(xiàng)目（2013B37）

325027 溫州市中心血站

陳榮倉(cāng)，E-mail：crc1223@126.com