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        星點設計-效應面法優(yōu)化百蕊草總黃酮提取工藝

        2014-04-12 02:51:09蘭艷素李長江宋坤鵬管超建
        中成藥 2014年12期
        關鍵詞:星點液料黃酮

        蘭艷素, 李長江, 宋坤鵬, 管超建

        (黃山學院化學化工學院, 安徽 黃山 245041)

        星點設計-效應面法優(yōu)化百蕊草總黃酮提取工藝

        蘭艷素, 李長江, 宋坤鵬, 管超建

        (黃山學院化學化工學院, 安徽 黃山 245041)

        目的 利用響應面分析法對百蕊草總黃酮的提取工藝進行優(yōu)化。方法 在單因素試驗基礎上,確定乙醇體積分數(shù)、 液料比、 提取時間為 3 個自變量, 總黃酮得率為因變量, 通過星點設計-響應面法優(yōu)化總黃酮提取工藝條件, 并進行預測分析。 結果 液料比和提取時間對百蕊草總黃酮的提取影響極顯著, 最優(yōu)提取工藝為 乙醇體積分數(shù) 70%,提取時間 40min, 液料比 20 ∶1 ( mL/g)。 在此條件下, 黃酮提取量達到 13.58mg/g。 結論 該方法合理、 簡便、 快速,可預測性較優(yōu)。

        百蕊草;總黃酮;星點設計;響應面法

        百蕊草為檀香科植物百蕊草 Thesium chinensis Turcz.的全草[1], 又叫百乳草、 細須草、 地石榴等[2], 多生于沙地草叢中或石坎邊,我國南北各省區(qū)等地均有分布,而且產量較高[3]。 百蕊草最早載于 《 圖經本草》, 味微澀苦, 性溫, 常被稱為 “ 植物抗生素”[4-5], 是 我 國 民 間 常 用 中 藥。具有很好的抗菌、消炎、解熱、鎮(zhèn)痛以及補氣益腎等作用[6-7], 臨床上 經 常 用 于 治 療 急 性 乳 腺 炎、 腎虛腰痛、 肺炎、乳癰、遺精、肺膿瘍、黃疸、扁桃體炎以及各種上呼吸道感染等病癥[8-10]。

        百蕊草中含有的化學成分有黃酮、多糖、苷類、生物堿及礦質元素等, 其中黃酮類化合物的量最為豐富[11]。 到目前為止, 已經從百蕊草中分離得到 10 個黃酮類化合物[3,12], 且所含的黃酮類化合 物 具有較好 的 抗 菌、 消炎活性[13]。 因此, 對百蕊草中總黃酮的研究具有重大意義。

        本實驗采用超聲波輔助提取百蕊草總黃酮,在單因素試驗基礎上,以乙醇體積分數(shù)、液料比、提取時間為自變量,總黃酮得率為因變量,采用星點試驗設計,通過效應面法進行數(shù)據分析,優(yōu)化百蕊草總黃酮的提取工藝,以期為百蕊草的進一步開發(fā)利用提供參考依據。

        1 材料與儀器

        1.1 材料 百蕊草產于安徽, 購于亳州萬生中藥飲片有限公司, 批號 100601, 經生命與環(huán)境工程學院方建新老師鑒定為檀香科植物百蕊草的全草。 蘆丁對照品 (批號 10080-200707, 購于中國藥品生物制品檢定所); 乙醇購自黃山酒精廠;亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉均為分析純;重蒸餾水自制。

        1.2 儀器 UV-2100 型紫外可見分光光度計 (北京北分瑞利分析儀器有限公司);KH-500B超聲波清洗器 (昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司);TG165 高速離心機 (長沙平凡儀器儀表有限公司); 電子分析天平 (上海梅特勒-托利多儀器有限公司);GZX-9030 MBE電熱鼓風干燥箱 (上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠);FW100 型高速萬能粉碎機 (天津市泰斯特儀器有限公司)。

        2 方法

        2.1 供試液的制備

        2.1.1 蘆丁對照品溶液的制備 將蘆丁對照品置于真空干燥箱中, 在 105 ℃條件下干燥至恒定質量, 精密稱取 12.5 mg干燥后的蘆丁對照品于干凈燒杯中, 用 60%乙醇溶解,轉移至 50 mL量瓶中, 60%乙醇定容至刻度線, 搖勻即得蘆丁對照品溶液, 該溶液質量濃度為 0.25 mg/m L, 備用。

        2.1.2 百蕊草總黃酮的提取 稱取干燥后的百蕊草粉末樣品 1.0 g, 在 100 mL圓底燒瓶中, 分別在一定的乙醇體積分數(shù)、提取時間、液料比條件下,采用超聲法輔助提取百蕊草總黃酮, 提取液冷卻, 離心機低速離心 10 m in 后, 移取上層清液5mL置于50mL量瓶中, 乙醇定容刻度線, 作為待測溶液。

        2.2 總黃酮定量測定

        2.2.1 標準曲線的制作 分別精密移取 0.25 mg/mL蘆丁對照品溶液 0.0、 0.5、 1.0、 2.0、 3.0、 4.0、 5.0 mL, 置于 25 mL量瓶中, 分別加 60%乙醇至 6 mL, 加入 5%亞硝酸鈉溶液 1.0 mL, 搖勻, 放置 6 min, 然后加入 10%硝酸鋁溶液 1.0mL, 搖勻后放置 6min, 再加 4%的氫氧化鈉溶液 10 m L, 最后用 60%乙醇溶液定容至刻度線, 搖勻, 放置 15 m in, 以空白液作參照, 在 510 nm波長處測定吸光度值[14]。 制作蘆丁標 準 工作曲線, 得 線性回歸 方 程:y= 10.107x+0.045 9, r2=0.999 7, 線性關系良好。

        2.2.2 樣品中總黃酮量的測定 用移液管移取 5.0 mL待測液于25 mL量瓶中, 按 “2.2.1” 項下的操作方法, 分別加入亞硝酸鈉、 硝酸鋁和氫氧化鈉, 靜置 15 min 后在 510 nm處測定提取液的吸光度 A值, 由標準曲線方程計算得出樣品溶液的質量濃度,再計算出樣品中總黃酮的量。計算公式為: 樣品中總黃酮量 (以蘆丁計)

        式中:Y為黃酮提取量 (mg/g);A為吸光度;V為離心之后的上清液體積 (mL);m為樣品質量 (g)。

        2.3 方法學考察

        2.3.1 精密度試驗 精密移取 0.25 mg/mL蘆丁對照品溶液 1.0mL于 25mL量瓶中, 按照 “2.2.1” 項下方法測定溶液在510 nm處的吸光度值。 結果 RSD為1.2% (n=6),表明儀器精密度良好。

        2.3.2 穩(wěn)定性試驗 取制備好的百蕊草提取液 1.0 mL,置于25 mL量瓶中, 按 “2.2.1” 項下方法操作, 顯色后每隔 15 min 測定溶液在 510 nm處的吸光度值。 實驗結果顯示, RSD為 1.1% (n=6), 表明供試品溶液在 1.5 h 內穩(wěn)定。

        2.3.3 重復性試驗 移取制備好的百蕊草提取液 6 份, 每份 1 mL, 按照 “2.2.1” 項下方法測定溶液在 510 nm處的吸光度值, 結果 RSD為 1.0%, 表明方法重復性良好。

        2.3.4 加樣回收率試驗 精密量取已知總黃酮量的百蕊草提取液 6 份, 再分別加入 0.25 mg/mL蘆丁對照品溶液 1.0 mL, 按照 “2.2.1” 項下方法測定溶液在 510 nm處的吸光度值, 計算回收率, 平均回收率為 99.9%, RSD為 1.1%。

        2.4 單因素試驗

        2.4.1 稱取百蕊草粗粉 6 份, 每份1.0 g, 分別加入20mL體積分數(shù)分別為 40%、 50%、 60%、 70%、 80%和 90%的乙醇溶液, 在溫度為 60 ℃條件下提取 30 min, 提取液按“2.2.1” 項下的操作方法顯色后測定溶液吸光度值, 并計算總黃酮量。

        2.4.2 稱取百蕊草粗粉 5 份, 每份 1.0 g, 分別加入 70%乙醇溶液 20 mL, 溫度為 60 ℃條件下分別提取 20、 30、40、 50 和 60 min, 提取液按 “2.2.1” 項下的操作方法顯色后測定溶液吸光度值,并計算總黃酮量。

        2.4.3 稱取百蕊草粗粉 5 份, 每份 1.0 g, 分別加入 10、15、 20、 25、 30、 35mL 70%乙醇溶液, 溫度為 60 ℃條件下提取 40 min, 提取液按 “2.2.1” 項下的操作方法顯色后測定吸光度值,并計算總黃酮量。

        3 結果

        3.1 單因素試驗結果

        3.1.1 乙醇體積分數(shù)對百蕊草總黃酮提取率的影響 由圖1可以看出,乙醇體積分數(shù)較低時,總黃酮的提取率很小,隨著乙醇體積分數(shù)的升高,總黃酮的提取率逐步增加,當乙醇體積分數(shù)為 70%時, 總黃酮的提取率達到最大值, 乙醇體積分數(shù)高于 70%時, 黃酮的量開始下降。 因此, 確定乙醇體積分數(shù)為 70%。

        圖1 乙醇體積分數(shù)對黃酮提取率的影響

        3.1.2 提取時間對百蕊草總黃酮提取率的影響 由圖 2 可知,提取時間很短時,黃酮得率較低,隨著提取時間的延長, 總黃酮提取量逐漸增加, 當提取時間為 40 min 時達到最大值。 40 min 后, 百蕊草總黃酮量趨于穩(wěn)定, 故提取時間選取 40 min。

        圖2 提取時間對黃酮提取率的影響

        3.1.3 液料比對百蕊草總黃酮提取率的影響 由圖 3 可見, 當液料比為10∶1 時, 黃酮得量很低, 之后快速增加,在 15 ∶1 到 30 ∶1 之間變化時, 黃酮提取率的變化不大,當液料比為20 ∶1 時提取率達到最大值, 原因可能是溶劑量越多,藥材和溶劑的接觸越充分,提取量呈上升趨勢,但是當溶劑達到一定量之后,再增加溶劑的量,對提高黃酮得率也沒有太大幫助,由于加大溶劑的量,會提高提取的成本, 因此, 液料比選 20 ∶1。

        圖3 液料比對黃酮提取率的影響

        3.2 星點設計試驗

        3.2.1 實驗設計與結果 在單因素試驗所得數(shù)據的基礎上,根據星點實驗設計原理,以百蕊草總黃酮得率為響應值,乙醇體積分數(shù)、液料比和提取時間為考察因素,分別用 X1、 X2、 X3表示, 每個因素設五水平, 并以 1.73、 1、0、 -1、 -1.73 表示自變量的高低水平, 各因素水平編碼見表 1。 星點實驗設計及結果見表 2。

        表1 因素水平

        表2 實驗設計與結果

        3.2.2 模型擬合 以總黃酮提取率為響應值, 采用 Design Expert軟件對試驗結果進行回歸分析, 得到乙醇體積分數(shù)、提取時間和液料比對總黃酮提取率影響的二項式方程,擬合后,得到回歸模型方程為:

        對該模型進行回歸方差分析和顯著性檢驗,結果見表3。

        由表 3 可知, 該模型 P<0.000 1, 表明實驗所得的回歸模型方程極顯著。在本實驗設定的區(qū)域范圍內,液料比和提取時間的 P值均小于 0.000 1, 對總黃酮得率的影響極顯著, 乙醇體積分數(shù) P值小于 0.01, 影響顯著, 總的來說,各因素對響應值的影響順序為:液料比>提取時間>乙醇體積分數(shù)。

        表3 響應面分析試驗方差分析結果

        交互項中乙醇體積分數(shù)與提取時間的交互作用對總黃酮得率的影響極顯著,乙醇體積分數(shù)與液料比次之,液料比和提取時間的交互作用對總黃酮得率不明顯,即在提取過程中,總黃酮得率可以忍受液料比和提取時間的微小變化,而不至于產生較大的影響。二次項中均小于 0.000 1, 對響應值的影響都極顯著, 所以乙醇體積分數(shù)、液料比和提取時間對總黃酮提取率的影響并非簡單線性關系,而應該是二次曲線關系。

        方程的失擬項 P值為 0.337 3, 失擬項不顯著, 說明其他未知因素對試驗結果的影響較小,擬合檢驗極顯著。所以,該方程與實際情況擬合很好,能夠較好地反映百蕊草總黃酮提取率與乙醇體積分數(shù)、液料比、提取時間的關系,可對百蕊草總黃酮的提取工藝參數(shù)進行較好預測。

        3.2.3 效應面優(yōu)化和預測 根據回歸方程, 利用 Design-Expert軟件, 繪制得到交互作用影響比較顯著的三維效應曲面, 見圖 4、 圖 5。

        圖4 提取時間與乙醇體積分數(shù)交互影響黃酮得率的響應面圖

        由圖4可見,當液料比一定,乙醇體積分數(shù)與提取時間的交互作用影響顯著,隨著提取時間延長和乙醇體積分數(shù)的增大,總黃酮提取率都呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢,而且乙醇體積分數(shù)在 60% ~80%之間變化時, 總黃酮得率的變化范圍較大,即乙醇體積分數(shù)對總黃酮得率的影響比液料比大。

        圖5 液料比與乙醇體積分數(shù)交互影響黃酮得率的響應面圖

        由圖5可見,液料比與乙醇體積分數(shù)的交互作用影響曲面開口往下,曲面較陡峭,影響顯著??傸S酮得率隨著乙醇體積分數(shù)、液料比的增大而增加,并分別在液料比為20 ∶1 (m L/g)、 乙醇體積分數(shù)為 70%附近出現(xiàn)最高點, 之后開始降低,且乙醇體積分數(shù)降低的程度更大一點,說明乙醇體積分數(shù)對響應值的影響比液料比強。

        總體來看,乙醇體積分數(shù)是3個因素當中對總黃酮提取率的影響最顯著。對回歸模型進行分析,黃酮提取率最大預測值為 13.58mg/g, 最優(yōu)提取工藝條件為: 乙醇體積分數(shù) 70.19%, 提 取 時 間 42.10 min, 液 料 比 18.83 ∶1(mL/g)。

        3.3 驗證試驗 為了檢驗該模型的準確度, 對模型優(yōu)化得到的最優(yōu)工藝結果做驗證性試驗,從具體操作條件來考慮,將工藝條件修正為乙醇體積分數(shù) 70%, 提取時間 40 min,液料比 20 ∶1 (mL/g), 在該條件下, 做 5 次平行試驗。 驗證試驗測得總黃酮的平均得率為 13.76 mg/g, 相對誤差1.6%, 與預測值基本一致, 說明該模型與實際試驗點擬合較好,模型方程可靠、實用。因此,基于星點設計所得的最佳工藝參數(shù)準確可靠,具有實用價值。

        4 討論

        正交設計法、均勻設計法經常被應用于中藥有效成分的提取工藝研究,雖然以上兩種方法的試驗次數(shù)少,但在設定的實驗區(qū)域內,很難找到一個明確的函數(shù)式來表達各因素和響應值之間的關系,所以也就無法找到整個區(qū)域上考察因素的最佳組合,并對響應值的最優(yōu)值進行預測。星點設計-響應面優(yōu)化法可以彌補以上不足, 采用非線性數(shù)學模型擬合,并在中心點進行重復性試驗,可以提高實驗精確度。 所以實驗采用星點設計-響應面優(yōu)化法對百蕊草總黃酮提取工藝進行了研究,該法簡便、穩(wěn)定。

        本實驗在單因素試驗基礎上,以乙醇體積分數(shù)、提取時間、液料比為自變量,總黃酮得率為因變量,采用星點試驗設計,效應面法進行分析,得到超聲波法輔助提取百蕊草總黃酮的最佳工藝條件為 70%乙醇提取, 提取時間40 min, 液料比 20 ∶1 ( m L/g), 此條件下總 黃酮得 率為13.58 mg/g。

        [1] 羅夫來,郭巧生.百蕊草礦質元素含量測定和主成分分析[ J] .中國中藥雜志, 2010, 35 (10):1226-1230.

        [ 2 ] 路 鋒, 趙穩(wěn)操, 賈艷星, 等.百蕊草屬藥學研究概況[J].安徽農業(yè)科學, 2011, 39(31):19091-19092.

        [ 3 ] 魯云霞, 汪俊松.百蕊草的化學成分研究[J].中草藥,2004, 35(5):491-492.

        [4] 儲曉琴,胡葉青,岳 磊.大孔吸附樹脂純化百蕊草總黃酮工藝研究[J].中藥材, 2013, 36(3):478-481.

        [5] 羅夫來, 郭巧生,王長林, 等.寄主對半寄生植物百蕊草影響的綜合評價研究[ J].中國中藥雜志, 2012, 37(9): 1174-1179.

        [6] 鐘方麗,王曉林,紀萍萍,等.百蕊草中總黃酮的提取工藝研究[ J] .吉林化工學院學報, 2008, 25(4) :5-7.

        [ 7 ] Parveen Z, Deng Y L, Saeed M K, etal.Antiinflammatory and analgesic activities of Thesium chinense Turcz extracts and its major flavonoids, kaempferol and kaempferol-3-O-glucoside[ J] .Yakugaku Zasshi, 2007, 127(8):1275-1279.

        [ 8 ] 唐慧文, 宋曉寧, 駱紅梅.HPLC法測定百蕊草中山奈酚的含量[J].貴陽中醫(yī)學院學報, 2006, 28(4):60-61.

        [9] 徐國兵,黃萬著,王德群,等.百蕊草藥材中山奈酚和總黃酮的含量測定[ J].中醫(yī)藥學報, 2008, 36(1) :39-41.

        [10] 儲曉琴, 岳 磊, 胡葉青, 等.正交設計優(yōu)選百蕊草的提取工藝[J].安徽中醫(yī)學院學報, 2013, 32(2):80-82.

        [11] 王 崢, 李紹順.百蕊草藥材及其制劑中總黃酮的含量測定研究[J].中成藥, 2007, 29(1):138-139.

        [12] 劉 洋, Zahida P, 鄧玉林, 等.百蕊草中黃酮類化合物研究[J].中草藥, 2009, 32(4):518-520.

        [13] 劉永松, 潘 玲, 祁克宗, 等.百蕊草有效提取成分對七種細菌的敏感性試驗[J].貴州醫(yī)藥, 2006, 30(6):564-566.

        [14] 田寶成, 賈昌平, 楊軍濤, 等.Box-Behnken 效應面法優(yōu)化紅旱蓮總黃酮提取工藝的研究[J].中成藥, 2010, 32(3): 389-392.

        R284.2

        :B

        1001-1528(2014)12-2629-04

        10.3969/j.issn.1001-1528.2014.12.044

        2013-10-23

        安徽高校省級優(yōu)秀青年人才基金重點項目 (2013SQRL088ZD); 安徽省高校省級自然科學研究項目 (KJ2011B168); 黃山學院自然科學基金項目 (2011xkj017)

        蘭艷素 (1985—), 女, 碩士, 助教, 從事天然產物提取分離與活性研究。 Tel:13685595775, E-mail:ls7536858@163.com

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