陳 亮， 孫 鵬，， 王 婷， 徐 娜， 賈 琦*， 李醫(yī)明， 陳凱先，4

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，上海 201203；2.中科院上海藥物研究所 第三藥理研究室， 上海 201203；3.河南省南陽(yáng)市中心醫(yī)院 內(nèi)分泌科， 河南 南陽(yáng) 473009； 4.中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所 新藥研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 上海 201203）

天竺桂多酚提取物降血糖活性研究

陳 亮1， 孫 鵬1，2， 王 婷2， 徐 娜3， 賈 琦1*， 李醫(yī)明1， 陳凱先1，4

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，上海 201203；2.中科院上海藥物研究所 第三藥理研究室， 上海 201203；3.河南省南陽(yáng)市中心醫(yī)院 內(nèi)分泌科， 河南 南陽(yáng) 473009； 4.中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所 新藥研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 上海 201203）

目的 研究天竺桂提取物中多酚的結(jié)構(gòu)類(lèi)型及降糖活性。 方法 運(yùn)用 HPLC及 ESI-MS 方法確定多酚的結(jié)構(gòu)，利用噻唑藍(lán)法測(cè)定細(xì)胞活力評(píng)價(jià)天竺桂提取物對(duì)棕櫚酸或過(guò)氧化氫損傷的 INS-1 細(xì)胞的保護(hù)作用， 利用 db/db自發(fā) 2型糖尿病小鼠觀察天竺桂提取物對(duì)糖尿病小鼠糖代謝的影響。 結(jié)果 天竺桂提取物中多酚主要為 B-型多酚； 提取物能劑量依賴(lài)地保護(hù)棕櫚酸或過(guò)氧化氫誘導(dǎo)損傷的 INS-1 細(xì)胞， 并且顯著抑制過(guò)氧化氫引起的 INS-1 細(xì)胞內(nèi)活性氧增加；200mg/kg劑量給藥 4 周后降低了 db/db小鼠空腹血糖， 改善了口服糖耐量， 顯著增加了胰島素耐量。 結(jié)論 天竺桂多酚為 B-型多酚， 具有一定的降糖活性， 其機(jī)制可能為減少胰島 β細(xì)胞活性氧水平， 抵抗氧化應(yīng)激對(duì) β細(xì)胞的損傷，從而保護(hù)胰島β細(xì)胞。

天竺桂； 多酚； INS-1 胰島 β細(xì)胞； db/db 2 型糖尿病小鼠； 抗糖尿病

桂 皮 Cinnamon 為樟 科 Lauraceae植物 天竺桂Cinnamomun japonicum Sieb.、 陰 香 C.burmannii (Nees)Blume、 細(xì)葉香桂 C.chingii M.et Calf以及肉桂 C.cassia Presl等樹(shù)皮的通稱(chēng)［1］， 為藥食兩用植物。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究表明，桂皮具有明顯的降血糖作用［2-6］， 其多酚 類(lèi)成分被認(rèn)為是其 降血糖作用的主要物質(zhì)基礎(chǔ)［5］。 天竺桂分布于我國(guó)廣東、廣西、江西等省，具有暖脾胃，散風(fēng)寒，通血脈作用。作為桂皮的一種資源，其中的多酚成分和降血糖作用還未見(jiàn)深入研究。

本研究的目的是確定天竺桂提取物中含有的主要多酚類(lèi)成分的類(lèi)型，并利用大鼠胰島瘤細(xì)胞INS-1 及自發(fā) 2 型糖尿病 db/db小鼠模型， 研究富含天竺桂多酚的提取物對(duì)胰島β細(xì)胞的保護(hù)作用及在體降糖效果，評(píng)價(jià)該類(lèi)提取物的降糖活性并初步探討其抗糖尿病機(jī)制。

1 材料與儀器

1.1 實(shí) 驗(yàn) 材 料 天 竺 桂 Cinnamomun japonicum Sieb.2011 年購(gòu)買(mǎi)于江西， 由復(fù)旦大學(xué)顧關(guān)云教授鑒定，樣品保存在上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院中藥化學(xué)教研室。

1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑 RPMI1640 細(xì)胞培養(yǎng)基、 胎牛血清和胰蛋白酶購(gòu)自 Hyclone； 活性氧檢測(cè)試劑盒購(gòu)自碧云天生物有限公司； Beta巰基乙醇、 噻唑藍(lán)購(gòu)自sigma； 二甲亞砜購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.3 對(duì)照品 compound 1 ～3 為作者實(shí)驗(yàn)室自己分離和鑒定的多酚， 經(jīng) HPLC檢測(cè)它們的純度均在95%以上。 結(jié)構(gòu)分別是 compound 1 為 procyanidin B2； compound 2 為 (-)-epicatechin； compound 3為 procyanidin C1(圖 1)。

圖 1 對(duì)照品 com pounds 1 ～3 結(jié)構(gòu)Fig.1 Structure of reference compounds 1 ～3

1.4 主要儀器和設(shè)備 Agilent1200 高效液相色譜儀 (DAD為檢測(cè)器)； 賽默飛世爾科技 Thermo-LCQ FleeT ESI-MS 分析儀； 羅氏 ACCU-CHEK血糖儀及血 糖試 紙； Thermo Fisher恒 溫 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 箱；MD公司 (MolecularDevice)Flexstation 3 酶標(biāo)儀。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 藥學(xué)部分

2.1.1 樣品制備 天竺桂藥材粗粉 1.12 kg， 用10 倍量的 50%丙酮-水溶液 40 ℃攪拌提取 2 次，每次2 h。 濾液合并濃縮至無(wú)丙酮味后，濃縮液依次用乙醚和乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯層得到富含天竺桂多酚樣品 (TZG)27.1 g。

2.1.2 HPLC測(cè)定條件 Agilent Extend-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm， 5 μm)；流動(dòng)相乙腈 (A)-0.02%三氟乙酸 (體積分?jǐn)?shù)， B)， 梯度洗脫:0 ～20 min， 10% ～35%A(體積分?jǐn)?shù))； 20 ～35 min，35% ～50%A( 體積分?jǐn)?shù))。 體積流量 1 mL/min；柱溫30 ℃； 檢測(cè)波長(zhǎng) 280 nm。

2.1.3 多酚的含量測(cè)定方法 參照 2010 年版 《中國(guó)藥典》鞣質(zhì)含量測(cè)定法對(duì)樣品中多酚含量進(jìn)行測(cè)試［7］。

2.2 藥理學(xué)部分

2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 大鼠胰島瘤細(xì)胞株 INS-1 細(xì)胞來(lái)自 ATCC， 培養(yǎng)基使用 RPMI1640 及 10%胎牛血清培養(yǎng)， 培養(yǎng)基中添加 50 μmol/L beta巰基乙醇，于 37 ℃ 5%CO2恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。 實(shí)驗(yàn)前細(xì)胞使用胰蛋白酶消化， 均勻鋪板于 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板 (NUNC) 中，每孔細(xì)胞數(shù)為 2.5 萬(wàn)， 24 h后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

2.2.2 細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn) 接種于 96 孔板的 INS-1 細(xì)胞分為空白對(duì)照組、棕櫚酸刺激組和棕櫚酸刺激加藥組 ( 濃度梯 度:100、50、 25、 12.5 μg/mL)。每孔細(xì)胞加入 0.4 mmol/L棕櫚酸于 37 ℃ 5%CO2恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育48 h， 空白對(duì)照組以等體積溶劑代替。加藥組加入上述濃度梯度天竺桂多酚，與棕櫚酸同時(shí)孵育48 h。 孵育結(jié)束后， 每孔細(xì)胞加入0.5 mg/mL的噻唑藍(lán)試劑， 于 37 ℃ 5%CO2恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育4 h后，吸去培養(yǎng)基，每孔細(xì)胞加入 100 μL二甲亞砜溶解， 于 492 nm下讀取吸收值， 評(píng)價(jià)天竺桂多酚對(duì)棕櫚酸損傷的 INS-1 細(xì)胞活力影響。

在過(guò)氧化氫刺激的 INS-1 細(xì)胞模型中， 以 50 μmol/L過(guò)氧化氫代替棕櫚酸， 孵育時(shí)間為 20 min，加藥 組 濃 度 梯 度 為 400、 200、 100、50、25、12.5、 6.25、 3.125 μg/mL， 其余步驟與棕櫚酸刺激模型相同，評(píng)價(jià)天竺桂多酚對(duì)過(guò)氧化氫損傷的INS-1 細(xì)胞活力影響。

2.2.3 胞內(nèi)活性氧檢測(cè) 接種于 96 孔板的 INS-1細(xì)胞預(yù)先用不同濃度 (400、 200、 100、 50、 25、12.5、 6.25、 3.125 μg/mL) 天竺桂多酚孵育 2 h，用無(wú)血清培養(yǎng)基洗1遍后，加入活性氧檢測(cè)試劑孵育 1 h， 吸去培養(yǎng)上清， 加入 50 μmol/L過(guò)氧化氫損傷 20 min， 使用 488 nm激發(fā)波長(zhǎng)， 在 525 nm下讀取熒光吸收值，評(píng)價(jià)天竺桂多酚對(duì)過(guò)氧化氫刺激下 INS-1 細(xì)胞胞內(nèi)活性氧水平的抑制情況。

2.2.4 自發(fā) 2 型糖尿病 db/db小鼠體內(nèi)降糖活性評(píng)價(jià) C57BL/KsJ db/db小鼠 (美國(guó) Jackson 實(shí)驗(yàn)室)， 雄性， 8 周齡， 體質(zhì)量 (35 ±2)g， 用于本次實(shí)驗(yàn)。 小鼠按照 SPF級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程飼養(yǎng)。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理與使用委員會(huì)批準(zhǔn) (許可證號(hào): SIMM-2011-01-WHY-04) 。

db/db小鼠隨機(jī)分為 4 組: 對(duì)照組 (Control，灌胃給予 0.5%質(zhì)量分?jǐn)?shù)的羧甲基纖維素鈉)， 天竺桂提取物 100 mg/kg給藥組 (TZG-100)， 天竺桂提取 物 200 mg/kg給藥 組 (TZG-200)， 每組 6只， 陽(yáng)性對(duì)照組 (羅格列酮 15 mg/kg劑量組，Rosi-15)。 每天 14 ∶00 ～16 ∶00 pm.之間灌胃給藥 1次，持續(xù)4周。

2.2.5 體質(zhì)量、 血糖變化及口服葡萄糖耐量及胰島素耐量檢測(cè) 小鼠定期記錄體質(zhì)量、飲食量和飲水量。每周各組小鼠禁食6 h后，尾靜脈采血，利用羅氏 ACCU-CHEK血糖儀及血糖試紙測(cè)量空腹血糖水平。 給藥 4 周后， 各組小鼠禁食 12 h檢測(cè)血糖后， 行口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn) (Oral Glucose Tolerance Test， OGTT)。小鼠灌胃給予 1 g/kg葡萄糖溶液， 在給葡萄糖后 0、 15、 30、 60、 120 min 尾靜脈采血測(cè)血糖濃度。 以時(shí)間-血糖濃度繪制 OGTT曲線(xiàn)，并計(jì)算曲線(xiàn)下面積。間隔1 d后，各組小鼠禁食 6 h，行 胰 島 素 耐 量 實(shí) 驗(yàn) (Isulin Tolerance Test， ITT)。 小鼠腹腔注射 1 U/kg胰島素， 給胰島素后 0、 30、 60、 90、 120 min 測(cè)血糖。 以時(shí)間-血糖濃度繪制 ITT曲線(xiàn)， 并計(jì)算曲線(xiàn)下面積。

2.2.6 統(tǒng)計(jì)分析處理 所有統(tǒng)計(jì)均利用 PASW Statistics 18(SPSS 18.0) 進(jìn)行。 統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)使用平均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差表示， 采用單因素方差分析 (One Way ANOVA)， P＜0.05 時(shí)認(rèn)為有顯著性差異。

3 結(jié)果

3.1 藥學(xué)部分

3.1.1 多酚定量測(cè)定 根據(jù) 2010 年版 《中國(guó)藥典》的方法測(cè)定天竺桂提取物中多酚的含有量。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)為 Y=10.564 X-0.646 5， R2=0.999 2，測(cè)得總多酚為 39.37%。

3.1.2 天竺桂多酚的結(jié)構(gòu)判斷 用自制的 compound 1-3 作為對(duì)照品， 在同樣測(cè)試條件下對(duì)天竺桂樣品進(jìn)行了 HPLC比對(duì)， 推測(cè)了 T1、 T2 和 T3 峰結(jié)構(gòu)， 比對(duì)顯示 T1 峰為 procyanidin B2； T2 峰為(-)-epicatechin； T3 峰為 procyanidin C1( 圖 2)。對(duì) T4 峰進(jìn)行了 ESI-MS 正負(fù)離子掃描 ( 圖 3)， 發(fā)現(xiàn)它是分子質(zhì)量為866 和1154 的二個(gè)多酚混合物。

圖2 提取物與對(duì)照品的比對(duì) （HPLC圖譜）Fig.2 Compare extract with reference substances by HPLC

圖 3 T4 峰的 ESI-MS圖 （A.負(fù)離子圖 B.正離子圖）Fig.3 ESI-MS spectra of T4 peak.A.nagetive ion ESI-MS spectra； B.positive ion ESI-MS spectra

3.2 藥理學(xué)部分

3.2.1 天竺桂提取物對(duì)棕櫚酸或過(guò)氧化氫損傷的INS-1 細(xì)胞 活力的影響 0.4 mmol/L棕櫚 酸刺激48 h后， INS-1 細(xì)胞活力較空白組顯著下降， 而天竺桂提取物劑量依賴(lài)地拮抗了棕櫚酸引起的 INS-1細(xì)胞活力下降 ( 與棕櫚酸單獨(dú)刺激組比較，**P＜0.01，***P＜0.001， 圖 4)。 提示天竺桂多酚能夠保護(hù)棕櫚酸引起的 INS-1 細(xì)胞損傷。

50 μmol/L過(guò)氧化氫刺激 20 min 后， INS-1 細(xì)胞活力較空白組顯著下降，而天竺桂提取物劑量依賴(lài)地拮抗了過(guò)氧化氫引起的 INS-1 細(xì)胞活力下降(與過(guò)氧 化 氫 單 獨(dú) 刺 激 組 比較，**P＜0.01，***P＜0.001， 圖 4)。 提示天竺桂多酚能夠保護(hù)過(guò)氧化氫引起的 INS-1 細(xì)胞損傷。

圖 4 提取物對(duì)損傷的 INS-1 細(xì)胞活力的影響Fig.4 Effects of TZG on cell viability of INS-1

3.2.2 天竺桂提取物對(duì)過(guò)氧化氫刺激的 INS-1 細(xì)胞胞內(nèi)活性氧的影響 50 μmol/L過(guò)氧化氫刺激20 min后， INS-1 細(xì)胞胞 內(nèi)活性 氧水平 顯著升高，而天竺桂提取物劑量依賴(lài)地拮抗了過(guò)氧化氫引起的INS-1 細(xì)胞胞內(nèi)活性氧水平 (圖 5)。提示天竺桂多酚能夠抑制過(guò)氧化氫引起的 INS-1 細(xì)胞胞內(nèi)活性氧升高。

3.2.3 天竺桂提取物對(duì) db/db小鼠體質(zhì)量及血糖的影響 給藥 4 周時(shí)，天竺桂提取物對(duì) db/db小鼠攝食、攝水 (數(shù)據(jù)未顯示) 及體質(zhì)量與對(duì)照組相比均無(wú)明顯影響 (圖6)。 同時(shí)， 天竺桂提取物在db/db小鼠上 100 mg/kg劑量組 (TZG-100) 與 200 mg/kg劑量組 (TZG-200) 給藥 2 周時(shí)， 空腹 6 h血糖無(wú)明顯變化， 此時(shí)羅格列酮 15 mg/kg劑量組已有顯著下降。 給藥 4 周后， 雖然 100 mg/kg劑量組 db/db小鼠空腹 6 h 血糖有下降趨勢(shì)但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異， 200 mg/kg劑量組空腹 6 h 血糖較對(duì)照組顯著下降， 降糖效果接近羅格列酮 15 mg/kg劑量組(*P＜0.05，圖6)。

圖 5 提取物對(duì) INS-1 細(xì)胞胞內(nèi)活性氧的影響Fig.5 E ffect of TZG on reactive oxygen level in INS-1 cells

圖6 提取物對(duì)小鼠體質(zhì)量及血糖的影響Fig.6 Effect of TZG on blood glucose and body weight change in m ice

3.2.4 天竺桂提取物對(duì) db/db小鼠口服糖耐量及胰島素耐量的影響 結(jié)果顯示，天竺桂提取物在200 mg/kg劑量給藥 4 周后，db/db小鼠口服糖耐量得到有效改善， 曲線(xiàn)下面積 (AUC) 統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示 200 mg/kg劑量給藥組與對(duì)照組具有顯著性差異 (*P＜0.05， 圖 7)。 同時(shí)， ITT結(jié)果顯示， 給藥 4 周后，天竺桂提取物劑量依賴(lài)地改善了 db/db小鼠胰島素耐量， 在 200 mg/kg劑量時(shí) ITT曲線(xiàn)下面積與對(duì)照組相比， 顯著降低 (**P＜0.01， 圖7)。 天竺桂提取物在 200 mg/kg的改善糖耐量及胰島素耐量效果均接近于 15 mg/kg劑量組的陽(yáng)性對(duì)照羅格列酮。

圖 7 提取物對(duì)小鼠 OGTT和 ITT的影響Fig.7 Effect of TZG on OGTT and ITT in m ice

4 討論

文獻(xiàn)記載，桂皮中的原花青素類(lèi)多酚成分主要有兩種結(jié)構(gòu)類(lèi)型，一種是原花青素各單元間通過(guò)C4 ～C8 或 C4 ～C6 方式由一根鍵連接而成的 B-型多酚， 其三聚體和四聚體的分子量分別是 866 Da和 1154 Da； 另一種是原花青素間通過(guò) C2-O-C7 和C4-C8 兩個(gè)鍵同時(shí)相連而成的 A-型多酚， 其三聚體和四聚體的分子量分別是 864 Da和 1152 Da［8］。天竺桂中含有的多酚經(jīng) HPLC比對(duì)分析和 ESI-MS掃描， 可知主要屬于 B-型多酚。參照 《中國(guó)藥典》鞣質(zhì)含量測(cè)定法測(cè)得樣品中多酚含量為 39.37%。樣品中的其它成分根據(jù)多酚樣品的提取方法推斷，應(yīng)該是一些極性比較大的成分， 該類(lèi)成分與 α-萘酚-濃 H2SO4沒(méi)有顯色反應(yīng)， 說(shuō)明樣品中不含糖類(lèi)。HPLC在相同條件下比對(duì)也不含有桂皮醛， 苯甲酸。 因樣品呈淺褐色， 我們推測(cè) 39.37%以外的部分應(yīng)該是一些水溶性的色素和大分子量的鞣質(zhì)等。

原青花素類(lèi)多酚低聚物的抗氧化作用多有報(bào)道［9］，該類(lèi)化合物能夠有效減少應(yīng)激條件下的細(xì)胞活性氧水平增加［10］。 INS-1 細(xì)胞是來(lái)自于大鼠胰島瘤的細(xì)胞，具有胰島素分泌功能，在體外與胰島β細(xì)胞功能類(lèi)似［11］。 在 2 型糖尿病的發(fā)病過(guò)程中，胰島β細(xì)胞在長(zhǎng)期高糖高脂環(huán)境下逐漸受到損傷，發(fā)生凋亡［12］。 該過(guò)程中， 氧化應(yīng)激具有非常重要的作用［13］。 本實(shí)驗(yàn)中所使用的 0.4 mmol/L質(zhì)量濃度的棕櫚酸為一類(lèi)不飽和脂肪酸，能夠有效模擬體內(nèi)高脂對(duì)胰島 β細(xì)胞的損傷［12］。 結(jié)果顯示， 天竺桂提取物能夠劑量依賴(lài)的保護(hù) 48 h的棕櫚酸長(zhǎng)期作用引起的 INS-1 細(xì)胞損傷， 提示化合物對(duì)胰島 β細(xì)胞具有保護(hù)作用。為研究其保護(hù)機(jī)制，我們使用過(guò)氧化氫增加細(xì)胞活性氧水平損傷 INS-1 細(xì)胞， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，天竺桂提取物能夠劑量依賴(lài)地抑制過(guò)氧化氫對(duì) INS-1 細(xì)胞的損傷， 提示在 INS-1 細(xì)胞中，天竺桂提取物能夠有效對(duì)抗過(guò)氧化氫引起的細(xì)胞活性氧升高，該機(jī)制可能是天竺桂多酚保護(hù)棕櫚酸引起的細(xì)胞活力下降的主要原因之一。為確證天竺桂提取物的抗氧化作用，我們檢測(cè)了細(xì)胞內(nèi)活性氧水平，結(jié)果證實(shí)了這一推測(cè)，天竺桂提取物劑量依賴(lài)的減少了過(guò)氧化氫引起的 INS-1 細(xì)胞胞內(nèi)活性氧水平升高，證實(shí)該提取物可以有效對(duì)抗胰島β細(xì)胞活性氧水平升高引起的細(xì)胞損傷，從而保護(hù)長(zhǎng)期高脂高糖作用下胰島β細(xì)胞。這可能是多酚類(lèi)化合物對(duì)抗糖尿病的主要作用機(jī)制之一。

為了驗(yàn)證天竺桂提取物在體降糖效果，我們利用 db/db自發(fā) 2 型糖尿病小鼠進(jìn)行在體降糖藥效評(píng)價(jià)。 臨床上應(yīng)用桂皮開(kāi)展降糖治療時(shí)，1 到10 g每天每人劑量均能夠有效改善糖尿病患者空腹血糖［3］。 因此， 根據(jù)臨床劑量換算， 本實(shí)驗(yàn)中選擇100 及 200 mg/kg劑量在 db/db小鼠模型上評(píng)價(jià)其體內(nèi)降糖活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，天竺桂提取物連續(xù)給藥4周后，對(duì)小鼠體質(zhì)量無(wú)顯著影響，提示提取物無(wú)明顯毒性。 同時(shí) 200 mg/kg劑量給藥組 db/db小鼠空腹血糖與對(duì)照組相比顯著降低；口服糖耐量實(shí)驗(yàn)表明天竺桂提取物能夠有效改善 db/db小鼠糖耐量；給藥4周后胰島素耐量實(shí)驗(yàn)表明，天竺桂提取物在 200 mg/kg劑量能夠顯著改善 db/db小鼠胰島素耐量。羅格列酮為一類(lèi)過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體 γ(PPARγ) 激動(dòng)劑， 能夠有效增加胰島素敏感性， 降低血糖［14］。 利用羅格列酮在 15 mg/kg劑量做陽(yáng)性對(duì)照， 發(fā)現(xiàn)天竺桂提取物在 200 mg/kg劑量對(duì)改善空腹血糖、口服糖耐量及胰島素耐量與羅格列酮接近， 均能夠顯著改善 db/db小鼠糖尿病癥狀。以上結(jié)果表明，天竺桂提取物長(zhǎng)期給藥能夠有效降低 db/db小鼠血糖， 改善小鼠糖耐量， 提高小鼠胰島素耐受， 有效改善了 db/db自發(fā) 2 型糖尿病小鼠的糖尿病癥狀。

綜上所述，天竺桂多酚提取物具有一定的降糖活性，其主要機(jī)制可能是通過(guò)減少胰島β細(xì)胞在高脂高糖環(huán)境下的氧化應(yīng)激，保護(hù)β細(xì)胞，維持β細(xì)胞的胰島素分泌功能，增加外周組織對(duì)胰島素的敏感性， 從而改善了 db/db小鼠糖尿病癥狀。 提取物中聚合多酚成分主要為原花青素單位間通過(guò)單鍵相連的 B-型多酚， 該類(lèi)型多酚可能在該過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

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Hypoglycem ic activity of polyphenol-rich extract from Cinnamomun japonicum Sieb

CHEN Liang1， SUN Peng1，2， WANG Ting2， XU Na3， JIA Qi1*， LIYi-ming1，CHEN Kai-xian1，4

(1.School of Pharmacy， Shanghai University of Traditional Chinese Medicine， Shanghai201203， China； 2.The Third Department of Pharmacology，Shanghai Instituteof Materia Medica， Shanghai201203， China； 3.Departmentof Endocrinology， Central Hospital of Nanyang， Henan 473009， China；4.State Key Laboratory of Drug Research， Shanghai Institute of Materia Medica， Shanghai 201203， China)

AIM To explore the structure and hypoglycemic activity of the polyphenols-rich extract isolated from Cinnamomun japonicum Sieb.M ETHODS HPLC and ESI-MSmethods were employed to characterize their structures.The biological activity of the extractwas determined on pancreatic INS-1 βcells and db/db type 2 diabetic micemodel.The effects of the extracton the vitality of INS-1 cell under palmitate or H2O2stimulation were examined.RESULTS Themain polyphenols found in C.japonicum extracts were identified as B-type polyphenols， and that the extract could protect INS-1 cells from palmitate or H2O2damage.The reaction oxygen levelwas also significantly reduced in the extract-treated INS-1 cells under H2O2induction in a dose dependentmanner.After the administration of the extract once daily for 4 weeks at the dosage of 200 mg/kg， the fasting blood glucose of db/db mice was reduced， and the oral glucose and insulin tolerances were also improved.CONCLUSION B-type polyphenols from C.japonicum have anti-diabetic activity.It could protect pancreatic beta cells from palmitate or H2O2induced damage via reducing the intracellular reaction oxygen level， which could be one possible reason forthe improvement in the symptoms of diabetes in db/db mice.

Cinnamomun japonicum Sieb.； polyphenol； pancreatic INS-1 beta cells； type 2 diabetic db/db mice； anti-diabetic activity

R285.5

:A

:1001-1528(2014)02-0229-07

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.02.003

2013-03-07

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目 (81172951)； 上海市中藥現(xiàn)代化課題 (08DZ1972102)； 上海市藥劑學(xué)重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目(J50302) ； 新藥研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題 (SIMM1106KF-14)

陳 亮 (1986—) ， 男， 博士生， 從事中藥化學(xué)成分構(gòu)效關(guān)系及 新藥開(kāi)發(fā)研 究。 Tel:(021)51322451， E-mail:clcivilian@ hotmail.com