劉延鑫 ， 王義翠 ， 郝萬清 ， 孫世豪 ， 孫 宇

[1.河南中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院(仲景學(xué)院) ， 河南 鄭州 450046 ； 2.河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 ， 河南 鄭州 450046 ； 3.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院 ， 河南 鄭州 450046]

奶牛隱性乳房炎是生產(chǎn)上常見的問題,患病牛的奶中體細(xì)胞數(shù)(Somatic cell count,SCC)異常增高。生產(chǎn)5胎次以上、低產(chǎn)和散養(yǎng)戶的奶牛發(fā)病率較高[1]，且夏季高發(fā)[2]。細(xì)菌病原體的入侵感染是引發(fā)奶牛乳房炎的主要病因[3-4]。隨著乳中抗生素殘留問題日益嚴(yán)重，人們對無抗生素奶的要求越來越高，采用中草藥進行夏季奶牛隱性乳房炎的防治是畜牧生產(chǎn)的發(fā)展趨勢。單味或者組合中藥對引起奶牛隱性乳房炎的細(xì)菌具有良好的體外抗菌活性[5-6]，生產(chǎn)上采用中草藥方劑[7-10]或植物提取物[11-13]對奶牛隱性乳房炎具有良好的療效，不僅可以減少牛乳SCC，而且還可提高奶產(chǎn)量和乳品質(zhì)。五味消毒飲見于《醫(yī)宗金鑒》，屬于具有清熱解毒功效的經(jīng)典方劑，由金銀花、蒲公英、野菊花等五味藥組成，其應(yīng)用于夏季奶牛隱性乳房炎防治未見報道。本試驗探究五味消毒飲對夏季隱性乳房炎奶牛的療效和生產(chǎn)性能影響，并同時測定試驗?zāi)膛５母?、腎功能指標(biāo)，進行安全性評價，為生產(chǎn)上解決夏季奶牛隱性乳房炎問題提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 試驗藥品均購自河南禹州市青山藥業(yè)有限公司，五味消毒散的藥物比例：金銀花40%，蒲公英15%，野菊花15%，紫花地丁15%，紫背天葵15%。使用前先將上述各組分分別粉碎成粒度在0.5 mm 以下的粉狀，再進行混勻。

1.2 試驗動物選擇與分組 根據(jù)奶牛群體改良計劃(Dairy herd improvement，DHI)報告，按照泌乳階段﹑胎次、體重相近原則，選擇SCC>50萬個/mL、2～4 胎次、體重600 kg左右、由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)奶牛場飼養(yǎng)的荷斯坦奶牛12頭，隨機均分為對照組和給藥組，預(yù)試期3 d，正試期14 d(2019.7.11—2019.7.24)。

1.3 試驗處理 試驗?zāi)膛＞捎萌旌先占Z飼喂制度，試驗牛只統(tǒng)一在一棟牛舍進行管理，給藥組每天每頭牛在飼料中添加120 g五味消毒飲，對照組添加相應(yīng)數(shù)量的東北羊草粉，由專人負(fù)責(zé)試驗牛只采食。

1.4 飼養(yǎng)管理 所有試驗牛只采用擠奶機單獨擠奶，每日早、晚各1次，飼養(yǎng)管理制度一致。

1.5 指標(biāo)的測定及方法

1.5.1 乳樣本和血液樣本的采集 在試驗第1、7、14天，分別采集所有試驗牛早乳樣25 mL、晚乳樣25 mL，混合后共50 mL，同時尾靜脈采血10 mL，用冰盒迅速帶回實驗室,用于加州乳房炎檢測法(California mastitis test，CMT)和肝、腎功能指標(biāo)測定。

1.5.2 CMT檢測 十二烷基磺酸鈉30 g溶于1 000 mL 蒸餾水，之后用1 moL/L的NaOH調(diào)節(jié)溶液 pH為6.4，同時加入溴甲酚紫染色液0.1 g，制成CMT診斷液。檢測時先取2 mL奶樣于乳白色診斷器皿內(nèi)，隨后加入等量的CMT診斷液，呈同心圓搖動診斷盤，根據(jù)表1的判定標(biāo)準(zhǔn)最后判定結(jié)果。

表1 CMT診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.5.3 生產(chǎn)性能指標(biāo)的測定 試驗期間每天記錄日產(chǎn)奶量，平均產(chǎn)奶量計算方法為試驗期間日產(chǎn)奶量的平均數(shù)。乳樣采用FOSS FT120型全乳成分分析儀測定乳脂率、乳蛋白率和非脂乳固體指標(biāo)。

1.5.4 肝腎功能指標(biāo)的測定 采用全自動生化分析儀(奧林巴斯AU400)測定奶牛血液的肝功能指標(biāo)：谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)、堿性磷酸酶(ALP)和谷酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)；腎功能指標(biāo)：血尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)和尿酸(UA)。

1.6 數(shù)據(jù)分析 試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，測定結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示，2組樣本平均數(shù)比較采用t檢驗，P<0.05 判定為差異顯著，P<0.01判定為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 五味消毒飲對奶牛隱性乳房炎的療效 結(jié)果見表2，五味消毒飲對奶牛隱性乳房炎的治療具有較好效果。對照組有1例在第14天檢測時由弱陽性轉(zhuǎn)為陽性。而給藥組經(jīng)過治療后，第7天給藥組治愈率為66.67%，有效率為80%；第14天給藥組的治愈率為83.33%，有效率為100%。

2.2 五味消毒飲對奶牛生產(chǎn)性能的影響 結(jié)果見表3，第1天對照組和給藥組的奶牛樣本平均產(chǎn)奶量、乳脂率、乳蛋白和非脂乳固體指標(biāo)無顯著差異(P>0.05)；第7天給藥組的產(chǎn)奶量高于對照2.38 kg(P>0.05)， 對照組和給藥組的各項乳成分指標(biāo)差異不顯著(P>0.05)；第14天給藥組的產(chǎn)奶量高于對照組6.25 kg(P<0.05)，此外，試驗期間給藥組乳脂率、乳蛋白有一定的改善效果(P>0.05)。

2.3 五味消毒飲的安全性評價 結(jié)果見表4，試驗期間，對照組、給藥組的肝、腎功能指標(biāo)略有波動，均無顯著差異(P>0.05)。

表2 五味消毒飲對奶牛隱性乳房炎的治療效果

表3 五味消毒飲對奶牛生產(chǎn)性能的影響

表4 五味消毒飲的安全性評價

3 討論

目前已報道的奶牛乳房炎病原菌超過150種，但主要致病菌為金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌等[4]。從中獸醫(yī)角度，奶牛隱性乳房炎屬于乳癰，多由熱毒引起，五味消毒飲具有清熱解毒、消散疔瘡的功效，功專力宏，是歷代中醫(yī)治療火毒結(jié)聚而引起癰瘡的首選方劑。據(jù)報道，五味消毒飲對母兔乳房炎和子宮炎具有良好的效果[14]。五味消毒飲中的金銀花、蒲公英、野菊花、紫花地丁和紫背天葵[15]對奶牛乳房炎常見致病菌均有良好的體外抗菌活性。牛雋等[8]認(rèn)為，中草藥是通過活血化淤改善乳房局部血液循環(huán)，清熱解毒，清除病原微生物，補氣益血調(diào)節(jié)機體免疫力，從而達(dá)到治愈隱性乳房炎的作用。本試驗表明,飼料中添加120 g/(頭·d)的五味消毒飲對奶牛隱性乳房炎具有較高的有效率和治愈率。

奶牛隱性乳房炎不僅僅造成乳中SCC升高，而且也會造成產(chǎn)奶量降低、乳品質(zhì)下降等一系列問題，給生產(chǎn)帶來損失。侯昆等[11]2019年采用竹葉黃酮和青蒿提取物對患有隱性乳房炎奶牛進行治療，發(fā)現(xiàn)二者不僅具有降低SCC的作用，而且4%乳脂校正乳產(chǎn)量和第14天乳蛋白率顯著提高(P<0.05)。本課題組之前的研究也發(fā)現(xiàn)，紅巖草提取物具有治療奶牛隱性乳房炎的效果，且有提高隱性乳房炎奶牛產(chǎn)奶量，改善乳品質(zhì)的作用[12]。本試驗中結(jié)果表明，在試驗期間，對照組的產(chǎn)奶量下降，而給藥組奶牛在試驗第14天產(chǎn)奶量顯著上升(P<0.05)，乳脂率和乳蛋白具有一定程度的改善，表明日糧添加120 g/(頭·d)五味消毒飲可以有效治療奶牛隱性乳房炎，同時對提高產(chǎn)奶量，改善乳品質(zhì)具有一定作用。

中草藥添加劑應(yīng)用于生產(chǎn)上往往需要進行安全性評價。孫啟英[16]通過急性毒性試驗和亞急性毒性試驗檢測了奶?？篃釕?yīng)激中草藥添加劑的安全性，發(fā)現(xiàn)該制劑水提物給小鼠灌胃，其毒副作用很小，但給小鼠腹腔注射，卻出現(xiàn)了毒性反應(yīng)。牛國慶等[17]2018年進行了自制防治奶牛隱性乳房炎復(fù)方中藥的安全性試驗，證明復(fù)方中藥毒副作用小，具有較高的安全性，短期起到一定的促進生長效果，長期使用也無不良影響。吳永魁等[18]通過檢測試驗動物的肝、腎功能指標(biāo)來評價抗疲勞中藥復(fù)方制劑的安全性，證明了中藥復(fù)方制劑無毒，無致突變性。本試驗選擇的五味消毒飲，其中5種中藥大部分屬于藥食同源，試驗期間，給藥組的肝、腎指標(biāo)均在正常范圍，表明在飼料中混飼120 g/(頭·d)的五味消毒飲對奶牛治療是安全的，不會產(chǎn)生毒理損傷。

綜上，日糧添加120 g/(頭·d)五味消毒飲對夏季隱性乳房炎奶牛具有較好療效，能夠顯著提高其產(chǎn)奶量，具有改善奶牛乳品質(zhì)作用，符合安全性，為生產(chǎn)上解決夏季奶牛隱性乳房炎危害提供了參考依據(jù)。