聶 陽(yáng)， 廖 瑋， 姚萬(wàn)龍， 陳伶俐， 李 博， 丁 立*

（1.廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院， 廣東 廣州 510520； 2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)， 廣東 廣州 510006）

復(fù)方痘痤清乳膏的處方優(yōu)化及藥理作用研究

聶 陽(yáng)1， 廖 瑋1， 姚萬(wàn)龍2， 陳伶俐1， 李 博1， 丁 立1*

（1.廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院， 廣東 廣州 510520； 2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)， 廣東 廣州 510006）

目的 優(yōu)化復(fù)方痘痤清乳膏的處方工藝并考察其初步藥理作用。方法 采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)，以外觀性狀、粒度和離心分層為評(píng)價(jià)指標(biāo)，用全概率法分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。以克痤隱酮乳膏為陽(yáng)性對(duì)照，采用大鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)、豚鼠皮膚瘙癢實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)復(fù)方痘痤清乳膏的抗炎、 止癢作用。 結(jié)果 優(yōu)選的處方為： 白凡士林25 g， 硬脂酸12.5 g， 甘油7.5 g， 單硬脂酸甘油酯與吐溫-80 的用量比為 7 ∶3。 復(fù)方痘痤清乳膏能有效地抑制角叉菜膠引起的大鼠足腫脹的炎癥腫脹， 能明顯增加豚鼠耐受磷酸組胺的致癢閾，均呈現(xiàn)良好的量效依賴關(guān)系。結(jié)論 采用多指標(biāo)全概率法優(yōu)化的乳膏處方，指標(biāo)全面，方法客觀，乳膏抗炎、止癢作用顯著。

復(fù)方痘痤清乳膏；處方；正交試驗(yàn)；全概率評(píng)分法；藥理作用

復(fù)方痘痤清方由大黃、金銀花、姜黃、白芷、硫黃、冰片等中藥組成，具有清熱解毒、殺蟲止癢、活血消痤之功效，用于青春痘及各種痤瘡的治療。原方為臨床經(jīng)驗(yàn)方，以油膏用藥多年，療效較好，但油膏不易洗除，易污染衣物， 藥物的釋放力和穿透皮膚的能力較差。 O/W乳膏具有涂展性好，無(wú)油膩感，可與創(chuàng)面滲出物混合，對(duì)皮膚的正常功能影響小， 透皮吸收快等優(yōu)點(diǎn)， 患者樂于接受［1-2］。 本實(shí)驗(yàn)采用正交設(shè)計(jì)安排試驗(yàn)，以多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)結(jié)合全概率分析法，優(yōu)化了復(fù)方痘痤清乳膏的處方工藝，并考察了其初步藥理學(xué)作用。

1 儀器與材料

L-100A顯微鏡 （廣州光學(xué)儀器廠）； JB90-D強(qiáng)力電動(dòng)攪拌機(jī) （上海標(biāo)本模型廠）； SFG-01B電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（湖北省黃石恒豐醫(yī)療器械有限公司）； 80-2 臺(tái)式低速離心機(jī) （上海醫(yī)療器械有限公司）。 克痤隱酮乳膏 （河北興隆希力藥業(yè)有限公司， 批號(hào) 120509 ）； 大黃、 金銀花、 姜黃、白芷、硫黃和冰片購(gòu)自廣州市華宇藥業(yè)有限公司，所有試劑均為分析純。 SD大鼠， 體質(zhì)量 180 ～220 g； 豚鼠， 體質(zhì)量 250 ～300 g， 雌雄各半， 由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取物制備 大黃、 金銀花、 姜黃和白芷分別粉碎成粗粉，硫黃、冰片分別粉碎成細(xì)粉，備用。根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)確定的復(fù)方痘痤清方提取工藝，取大黃和姜黃照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法 （ 《中國(guó)藥典》 2010 年版一部附錄IO）， 用 80%乙醇為溶劑， 浸漬 12 h 后， 以 1 ～3 mL/min的體積流量緩緩滲漉，收集漉液，減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度約為1.15 （50 ℃） 的清膏； 上述藥渣、 金銀花和白芷水煎煮 2 次， 第 1 次 2 h， 第 2 次 1.5 h， 合并煎液，濾過， 濾液濃縮至相對(duì)密度約為1.05 （60 ℃） 的清膏。 合并兩種清膏，于4℃置冰箱內(nèi)保存，備用。

2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)， 在固定復(fù)方痘痤清方提取物清膏用量的前提下，確定影響乳膏質(zhì)量的主要因素：白凡士林用量 （A）、 硬脂酸用量 （B）、 甘油用量 （C）、單硬脂酸甘油酯與吐溫-80 的用量比例 （D）， 每個(gè)因素設(shè)3 個(gè)水平， 因素水平安排見表 1。 按正交試驗(yàn)表 L9（34） 安排試驗(yàn)，安排見表 2， 以乳膏外觀性狀、 粒度和離心分層為考察指標(biāo)，評(píng)價(jià)各實(shí)驗(yàn)樣品質(zhì)量。

表1 正交試驗(yàn)因素水平

2.3 乳膏樣品制備 稱取白凡士林、 硬脂酸、 單硬脂酸甘油酯， 水浴加熱使熔融， 于 70 ～80 ℃保溫作為油相； 稱取甘油、 吐溫-80、 清膏、 水及尼泊金乙酯混勻， 水浴加熱至70 ～80 ℃， 作為水相。 在保溫情況下， 將油相加入到水相中， 以 1 000 r/min 攪拌 10 min， 移去水 浴， 以 500 r/min攪拌至溫度約為 50 ℃時(shí)， 加入硫黃、 冰片細(xì)粉， 滴加香精，繼續(xù)攪拌至室溫，得乳膏樣品。

2.4 評(píng)價(jià)指標(biāo)建立 據(jù) 《中國(guó)藥典》 乳膏質(zhì)量檢查的主要項(xiàng)目，確定3個(gè)質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)。① 外觀性狀：取乳膏約2 g， 在下襯白紙的玻璃板上鋪開， 觀察顏色均勻性、 光澤度； 另取乳膏約 2 g， 蘸取涂于手臂皮膚， 體會(huì)質(zhì)地細(xì)膩感； 再取乳膏約2 g， 蘸取， 體會(huì)黏稠度， 涂布皮膚觀察是否融化。 上述3項(xiàng)， 每項(xiàng)滿分10 分， 滿分乳膏應(yīng)褐色， 顏色均勻、有光澤；質(zhì)地細(xì)膩，無(wú)粗糙感；適當(dāng)黏稠性，易涂布而不融化等現(xiàn)象。 ② 粒度： 取乳膏約2 g， 加適量甘油溶液稀釋， 在 50 ～100 倍顯微鏡下檢視蓋玻片全部視野，應(yīng)無(wú)凝聚現(xiàn)象， 再在 200 ～500 倍顯微鏡下檢視視野內(nèi)的總顆粒數(shù)及≥180 μm的顆粒數(shù)。 粒度值 =1- （ 粒徑 ≥180 μm顆粒數(shù)/視野下總顆粒數(shù)）。 ③ 離心分層： 取乳膏適量填入 10 mL刻度離心管， 填充與刻度齊平， 以 3 000 r/min離 心 30 min， 記 錄 油 水 交 界 面 高 度 Hi。 分 離 值 = Hi/10.00。

2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 對(duì)表 2 中的各指標(biāo)評(píng)價(jià)結(jié)果進(jìn)行全概率數(shù)據(jù)處理［3-4］。 根據(jù)各指標(biāo)影響的大小， 確定各指標(biāo)權(quán)重之比為外觀性狀∶粒度∶離心分層 （0.3 ∶0.3 ∶0.4）， 計(jì)算P （ Aj） 及各指 標(biāo) P （ Bi/Aj） =Xij/Sj。 綜合 評(píng) 分 （ P） = P（Bi）2=P （ A1） P （ Bi/A1） +P （ A2） P （ Bi/A2） + P （ A3） P （ Bi/A3） =0.3Xi1/S1+0.3Xi2/S2+0.4Xi3/S3。 上述各式中 Bi為第 i號(hào)試驗(yàn)， Aj為第 j個(gè)指標(biāo)； Xij表示第 j個(gè)指標(biāo)下的第 i個(gè)測(cè)定值， 以 Sj表示第 j個(gè)指標(biāo)下各次試驗(yàn)結(jié)果的和。 i=1， 2， …， n； j=1， 2， …， k。 數(shù)據(jù)處理和方差分析見表 2、 表 3。

直觀分析表明， 各因素作用主次順序?yàn)?D＞A＞C＞B，優(yōu)選 A3B1C2D3。 方差分析表明， A、 D因素有顯著差異，B、 C因素?zé)o顯著差異。 由于因素 B影響較輕， 且無(wú)顯著性， 可選擇一個(gè)中間值 12.5 g， 結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際， 確定最佳處方工藝為 A3B2C2D3， 即白凡士林 25 g、 硬脂酸 12.5 g、甘油 7.5 g， 單硬脂酸甘油酯與吐溫-80 的用量比為 7 ∶3。

2.6 驗(yàn)證試驗(yàn) 按處方稱取藥材 3 份， 制得提取物清膏，再按優(yōu)化處方制備乳膏 3 批， 批號(hào)分別為 12001、 12002、12003， 分別評(píng)價(jià)質(zhì)量。 結(jié)果 3 批復(fù)方痘痤清乳膏， 三項(xiàng)指標(biāo)評(píng)價(jià)良好， 均為滿分， 符合 《中國(guó)藥典》 相關(guān)規(guī)定。

2.7 質(zhì)量評(píng)價(jià) 取乳膏 （批號(hào) 12001） 先按 “2.4” 項(xiàng)下評(píng)價(jià)質(zhì)量， 并再檢查以下三項(xiàng)指標(biāo)： ① pH測(cè)定， 取乳膏加入 10 份新沸的純化水， 水浴加熱至 40 ℃， 不斷攪拌均勻， 冷卻室溫， 用 pH計(jì)測(cè)定 pH； ② 耐寒試驗(yàn)， 將適量乳膏裝入離心管， 置 -15 ℃溫度下 24 h， 取出至室溫觀察；③ 耐熱試驗(yàn)， 將適量乳膏裝入離心管， 置 40 ℃水浴 24 h，取出放置至室溫觀察，結(jié)果見表4。

2.8 室溫留樣觀察 取乳膏 （批號(hào) 12001） 裝入 3 支離心管，密封，常溫下放置6個(gè)月，于1個(gè)月、3個(gè)月和6個(gè)月后取樣， 檢查質(zhì)量及評(píng)分， 結(jié)果見表 4。 經(jīng)過 6個(gè)月室溫留樣觀察，乳膏各項(xiàng)指數(shù)都無(wú)明顯變化，表明按優(yōu)化處方 制備的乳膏質(zhì)量好、穩(wěn)定。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析

2.9 初步藥理作用

2.9.1 抗炎作用 采用角叉菜膠致大鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)［5］。 取SD大鼠 50 只， 隨機(jī)分為 5 組空白對(duì)照組 （空白基質(zhì)）、 陽(yáng)性對(duì)照組 （克痤隱酮乳膏） 和復(fù)方痘痤清乳膏高、中、低3個(gè)劑量組， 每組10 只。 各組大鼠右后足背部剃毛面積約1 cm2， 分別將受試物均勻涂于剃毛區(qū)， 給藥量為每次 0.1 g/cm2， 復(fù)方痘痤清乳膏小劑量組每日給藥 1 次， 中劑量組每日給藥 2 次， 大劑量組每日給藥 3次， 用藥間隔為 6 h，空白對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組同大劑量組， 均連用2 d。 實(shí)驗(yàn)當(dāng)日再給藥一次， 劑量同前， 30 min 后， 于右后足跖皮下注射 1%角叉菜膠 0.1mL， 于注射后 1、 3 和 6 h 用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫脹肢體的足跖厚度。以致炎前后足跖厚度之差表示腫脹度，結(jié)果見表5。 結(jié)果表明， 復(fù)方痘痤清乳膏能明顯抑制角叉菜膠引起的大鼠足跖腫脹，且隨濃度的升高而抑制作用增強(qiáng)。

表4 室溫留樣觀察結(jié)果

表5 復(fù)方痘痤清乳膏對(duì)大鼠抗炎、 豚鼠止癢作用的影響

2.9.2 止癢作用 采用組胺致豚鼠皮膚瘙癢實(shí)驗(yàn)［6］。 取豚鼠 50 只， 按 “2.9.1” 項(xiàng)下分組和給藥。 實(shí)驗(yàn)當(dāng)日用粗砂紙分別擦傷剃毛處以傷及表皮，在創(chuàng)面再給藥一次，劑量同前。 涂藥 30 min 后在創(chuàng)面涂抹 0.01%組胺， 以后每 3min依次涂 0.02%、 0.03% 遞 增 濃 度 的 組 胺， 每次均為 50 μL/只， 直至豚鼠出現(xiàn)回頭舔右后腳為止， 累加所給組胺總量為致癢閾，記錄各組動(dòng)物致癢閾， 結(jié)果見表5。結(jié)果表明，復(fù)方痘痤清乳膏3個(gè)劑量組均可不同程度地提高豚鼠致癢閾，其中中劑量組和高劑量組與對(duì)照組比較差異有顯著性。

3 討論

預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)： 硫黃、 冰片兩種后加藥材磨成過 200 目細(xì)粉，制得的乳膏均勻、細(xì)膩，且易于在基質(zhì)中能分布均勻，可避免因藥物大粒子的存在使乳膏局部濃度過高，引起皮膚的刺激性。乳膏制備過程采用變速度攪拌，先以高攪拌速度1 000 r/min， 持續(xù)攪拌約 10 min 至初乳形成， 然后以低攪拌速度 500 r/min， 攪拌至室溫。 初乳形成時(shí)， 快速攪拌可使油相在幾秒之內(nèi)被剪切為液滴，并快速分散到水相；待初乳形成后，降低攪拌速度，可防止因快速攪拌對(duì)乳滴乳化膜的破壞，利于乳化膜的固化，增加乳膏的穩(wěn)定性。

復(fù)方痘痤清乳膏為 O/W型乳膏， 白凡士林與硬脂酸為油相成分，前者為可克服乳膏有干燥感的缺點(diǎn)，使用時(shí)留下的油膜有利于角質(zhì)層水合而產(chǎn)生潤(rùn)滑作用；后者有一定的穩(wěn)定作用，可獲得穩(wěn)定潔白的膏體。單硬脂酸甘油酯是穩(wěn)定劑也是 W/O型輔助乳化劑， 與吐溫-80 合用成為 O/W型乳化劑，制成的乳膏非常穩(wěn)定，冷凍而不被破壞，低至-10 ℃而不分出水［7］。 甘油在處方中為保濕劑， 可避免因長(zhǎng)期存放導(dǎo)致的干結(jié)、硬化問題。

本實(shí)驗(yàn)采用正交設(shè)計(jì)安排實(shí)驗(yàn)與多指標(biāo)全概率評(píng)分分析結(jié)果的處方優(yōu)化法，較多指標(biāo)設(shè)計(jì)單指標(biāo)方差分析、人為擬合匯總的傳統(tǒng)方法，能更全面、客觀反映工藝特點(diǎn)，優(yōu)化結(jié)果更實(shí)用、 科學(xué)［8］。 按優(yōu)化處方制備的復(fù)方痘痤清乳膏樣品，經(jīng)過6個(gè)月室溫留樣觀察，結(jié)果乳膏各項(xiàng)指標(biāo)良好及穩(wěn)定性無(wú)明顯變化，表明制備工藝可行，制劑性能穩(wěn)定。

痤瘡為慢性炎癥性毛囊皮脂腺疾病，炎癥明顯時(shí)可伴有瘙癢、疼痛、膿皰等癥狀，是皮膚科常見的疾病之一。本實(shí)驗(yàn)采用經(jīng)典的炎癥、瘙癢動(dòng)物模型，對(duì)復(fù)方痘痤清乳膏的藥理作用做了初步考察。結(jié)果提示，復(fù)方痘痤清乳膏具有顯著的抗炎和止癢作用，且效應(yīng)隨劑量的增加而增大，將為進(jìn)一步研究其藥效作用及作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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R944.2+1

： B

： 1001-1528（2014）05-1056-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.039

2013-06-12

聶 陽(yáng) （ 1983—）， 男， 講 師， 碩士， 從事 藥 物 制劑 及 質(zhì) 量標(biāo)準(zhǔn) 研 究。 Tel： （ 020 ） 28854981， E-mail： abcsunshine365@ gmail.com

*通信作 者： 丁 立 （1969—） ， 男， 教 授， 博 士， 從事制藥新技 術(shù) 及 新 劑 型 研 究。 Tel： （ 020 ） 28854950， E-mail： dingl@gdyzy. edu.com