高 偉， 朱葉珊， 蔡春江， 司雁菱

（1.唐山工人醫(yī)院， 河北 唐山 063000； 2.河北唐山中醫(yī)院， 河北 唐山 063000）

丁沉透膈丸中和厚樸酚、厚樸酚、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ和兒茶素的測(cè)定

高 偉1， 朱葉珊2， 蔡春江2， 司雁菱1

（1.唐山工人醫(yī)院， 河北 唐山 063000； 2.河北唐山中醫(yī)院， 河北 唐山 063000）

目的 采用 HPLC法測(cè)定丁沉透膈丸 （厚樸、 白術(shù)、 丁香、 沉香、 木香、 香附、 砂仁、 草豆蔻、 陳皮、 麥芽、廣藿香、青皮、法半夏、云曲、茯苓、甘草）中和厚樸酚、厚樸酚、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ和兒茶素的量。方法Hypersil C18色譜柱 （4.6 mm×200 mm， 5 μm） ； 體積流量 0.7 mL/min。 和厚樸酚與厚樸酚的測(cè)定以乙腈為流動(dòng)相 A，流動(dòng)相 B為 2%冰醋酸溶液 （V/V）， 檢測(cè)波長(zhǎng) 294 nm； 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的測(cè)定以甲醇-乙腈 （1 ∶1） 為流動(dòng)相 A， 流動(dòng)相 B為 0.1%磷酸水溶液， 檢測(cè)波長(zhǎng) 220 nm； 兒茶素的測(cè)定以甲醇-0.5%冰醋酸溶液 （26 ∶74） 為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng) 278 nm。 結(jié)果 和厚樸酚與厚樸酚分別在 0.032 4 ～0.648 0 μg（r=0.999 6）、 0.021 8 ～0.436 0 μg（r= 0.999 8） 范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系， 平均加樣回收率分別為 99.17%、 99.29%， RSD （n=9） 分別為 0.84%、 1.04%； 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ分別在 0.006 8 ～0.136 0 μg（r=0.999 4）、 0.010 2 ～0.204 0 μg（r= 0.999 3） 范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系， 平均加樣回收率分別為 99.02%、 99.15%， RSD （n=9） 分別為 0.69%、 0.75%； 兒茶素在 0.004 6 ～0.092 0 μg（r=0.999 8） 進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好， 平均加樣回收率為99.30%， RSD（n=9） 為 0.69%。 結(jié)論 該測(cè)定方法結(jié)果準(zhǔn)確、 靈敏度高、 重復(fù)性好。

丁沉透膈丸； 和厚樸酚； 厚樸酚； 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ； 白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ； 兒茶素； HPLC

丁沉透膈丸為中藥復(fù)方制劑，處方源于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十三冊(cè)，由厚樸 （姜炙）、 白術(shù)、 丁香、 沉香、 木香、 香附 （醋炙）、砂仁 （鹽炙）、草豆蔻、 陳皮、麥芽 （炒）、 廣藿香、 青皮 （醋炙）、 法半夏 （醋炙）、 云曲 （炒）、茯苓、甘草十六味藥物組成。具有健脾和胃、行氣消脹之功效，可用于胃脘疼痛、氣郁結(jié)滯、胸膈痞悶、噯氣吐酸、消化不良等癥的治療。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)性狀進(jìn)行了控制，未對(duì)方中的任何藥味進(jìn)行定性鑒別或定量 測(cè)定［1-2］。 為保證 產(chǎn)品質(zhì) 量， 確保臨床療效， 本實(shí)驗(yàn)采用 HPLC法對(duì)厚樸中和厚樸酚、厚樸酚和白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ以及砂仁中的兒茶素進(jìn)行測(cè)定，為完善該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，以有效控制產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，確保人民用藥安全有效。此法準(zhǔn)確、方便、可靠、快速。

1 材料

日本島津 LC-10ATVP型高效液相色譜儀； 島津自動(dòng)進(jìn)樣器 SIL-10ADVP；ANASTAR色譜數(shù)據(jù)工作站； SPD-1OAVP紫外可見檢測(cè)器； 和厚樸酚對(duì)照品 （110730-200307）、 厚樸酚對(duì)照品 （110729-200412）、 兒茶素對(duì)照品 （110730-200307， 純度為97.2%） 購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院； 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ對(duì)照品 （73069-13-3，純度為 98.0%） 和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照品 （73030-71-4， 純度為 98.0%） 購(gòu)于上海同田生物技術(shù)股份有限公司；丁沉透膈丸（每袋裝 10 g； 批號(hào)為 130910， 130912， 130915）自制；甲醇、乙腈 （色譜純，湖北杜克化學(xué)科技有限公司）；冰醋酸 （色譜純， 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）； 磷酸 （分析純， 廊坊鵬彩精細(xì)化工有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 和厚樸酚與厚樸酚的定量分析［3-12]

2.1.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性 Hypersil C18色譜柱 （4.6 mm×200 mm， 5 μm）； 流動(dòng)相 A為乙腈，流動(dòng)相 B為 2% 冰醋酸溶液 （ V/V）， 梯度洗脫（0 ～8 min， 37.0%A； 9 ～27 min， 37.0%→65.0% A； 28 ～35 min， 65.0%A）； 檢測(cè)波長(zhǎng) 294 nm； 體積流量 0.7 mL/min。 在此條件下和厚樸酚和厚樸酚與其他組分分離效果良好，以厚樸酚計(jì)理論塔板數(shù)應(yīng)不低于 3 000。

2.1.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 分別取和厚樸酚對(duì)照品與厚樸酚對(duì)照品適量，加 65%甲醇溶解制成每1 m L含 30 μg的溶液， 在 200 ～400 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果和厚樸酚對(duì)照品在 292 nm處有最大吸收， 厚樸酚對(duì)照品在 294 nm處有最大吸收，參照 《中國(guó)藥典》 2010 年版一部厚樸藥材檢驗(yàn)項(xiàng)，將檢測(cè)波長(zhǎng)定為 294 nm。

2.1.3 對(duì)照品混合溶液的制備 精密稱取和厚樸酚對(duì)照品和厚樸酚對(duì)照品各適量， 加 65%甲醇制成對(duì)照品混合溶液 （和厚樸酚為 0.032 4 mg/mL，厚樸酚為 0.021 8 mg/m L）。

2.1.4 供試品溶液的配制 取本品適量，研細(xì)，取約1.0 g， 精密稱定， 置 50 mL量瓶中， 精密加入 65% 甲 醇 50 mL， 稱 定 質(zhì) 量， 超 聲 處 理（300 W， 20 kHz） 20 min， 用 65%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.1.5 陰性對(duì)照溶液的配制 按丁沉透膈丸處方比例稱取適量除厚樸的其余藥味，按丁沉透膈丸的生產(chǎn)工藝制成缺厚樸的陰性樣品，按照上述供試品溶液的配制方法制成缺厚樸的陰性對(duì)照溶液。

2.1.6 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品混合溶液1、 5、 10、 15、 20 μL， 按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，和厚樸酚、厚樸酚量為橫坐標(biāo)分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程。和厚樸酚為 Y=5.236 4 ×106X-368.9，r=0.999 6； 厚樸酚為 Y=3.698 1 ×106X+619.2， r=0.999 8。 結(jié)果表明和厚樸酚在 0.032 4 ～0.648 0 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好；厚樸酚在 0.021 8 ～0.436 0 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好。

2.1.7 陰性對(duì)照試驗(yàn) 分別精密吸取 10 μL的供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液，按上述色譜條件進(jìn)行色譜分析，結(jié)果供試品溶液色譜中，在與和厚樸酚對(duì)照品與厚樸酚對(duì)照品相同保留時(shí)間處有吸收峰，而陰性對(duì)照溶液在相同保留時(shí)間處未顯吸收峰， 結(jié)果見圖1。

2.1.8 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品混合溶液重復(fù)進(jìn)樣6 次， 按 “2.1.1” 項(xiàng)的色譜條件測(cè)定和厚樸酚與厚樸酚的峰面積， 和厚樸酚的 RSD為 0.73%， 厚樸酚的 RSD為 0.42%， 結(jié)果表明， 儀器具有良好的精密度。

圖1 和厚樸酚與厚樸酚的 HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram s of honokiol and magnolol

2.1.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品， 按上述方法制備6 份供試品溶液， 分別測(cè)定， 和厚樸酚的 RSD為 0.57%， 厚樸酚的 RSD為 0.78%。 結(jié)果表明本方法具有良好的重復(fù)性。

2.1.10 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液， 在放置 0、 1、 2、 4、 6、 8 h 后精密吸取 10 μL進(jìn)樣，測(cè)定其峰面積值， 和厚樸酚的 RSD為 0.44%，厚樸酚的 RSD為 0.53%， 供試品溶液 8 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.1.11 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含有量 （和厚樸酚 1.56 mg/g、 厚樸酚 1.12 mg/g） 的同一批樣品適量， 研細(xì)， 稱取 9 份， 每份 0.5g， 精密稱定， 置 50 m L具塞錐形瓶中， 精密加入對(duì)照品混合溶液 20 m L、 25 m L、 30 m L各 3 份 （相當(dāng)于樣品量的 80%、 100%和 120%）， 分別加65%甲醇至刻度 （50 m L）， 按照 “2.1.3” 項(xiàng)下供試品溶液制備方法制成加樣供試液。精密吸取加樣供試液 10 μL， 按上述測(cè)定方法測(cè)定其峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果表明本方法回收率良好，見表1。

表1 和厚樸酚和厚樸酚回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Results of recovery tests for honokiol and magnolol

2.2 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的定量分析［13-20]

2.2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性 Hypersil C18色譜柱 （4.6 mm×200 mm， 5 μm）； 流動(dòng)相 A為甲醇-乙腈 （1 ∶1）， 流動(dòng)相 B為 0.1%磷酸水溶液， 梯度 洗 脫 （ 0 ～24 min，40.0%A； 25 ～42 min，40.0%→62.0%A； 43 ～50 min， 62.0%A）；體積流量 0.7 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng) 220 nm。在此條件下白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ與其他組分基線分離良好， 以白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ計(jì)理論塔板數(shù)應(yīng)不低于 2 800。

2.2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 分別取白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照品適量， 加甲醇-乙腈 （1 ∶1） 溶解制成每 1 m L含 0.06 mg的溶液， 按紫外-可見分光光度法在 150 ～300 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行紫外掃描， 結(jié)果白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照品均在 220 nm處有最大吸收， 故檢測(cè)波長(zhǎng)定為 220 nm。

2.2.3 對(duì)照品混合溶液的制備 精密稱取白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照品適量， 置50 mL量瓶中，加甲醇-乙腈 （1 ∶1） 溶解后稀釋至刻度， 搖勻，即得對(duì)照品混合溶液 （白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ為0.006 8 mg/mL和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ 0.010 2 mg/mL）。

2.2.4 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取約5.0 g， 精密稱定， 置 50 mL量瓶中， 精密加入甲醇-乙腈 （1 ∶1） 50 mL， 稱定質(zhì)量，超聲處理（250W， 30 kHz）25 min，用甲醇-乙腈 （1 ∶1）補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.5 陰性對(duì)照溶液的制備 按丁沉透膈丸處方比例稱取適量除白術(shù)的其余藥味，按丁沉透膈丸的生產(chǎn)工藝制成缺白術(shù)的陰性樣品，按照上述供試品溶液的配制方法制成缺白術(shù)的陰性對(duì)照溶液。

2.2.6 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品混合溶液 1、 5、 10、 15、 20 μL， 按 “2.2.1” 項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行梯度洗脫，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ量為橫坐標(biāo)分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線， 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ回歸方程為 Y=3.165 7 × 106X-351.0， r=0.999 4； 白 術(shù) 內(nèi)酯 Ⅲ 為 Y= 2.537 8 ×106X+635.1， r=0.999 3。 結(jié)果表明白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ在 0.006 8 ～0.136 0 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好； 白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ在 0.010 2 ～0.204 0 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好。

2.2.7 陰性對(duì)照試驗(yàn) 分別精密吸取 10 μL的供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液，按“2.2.1” 項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行色譜分析， 結(jié)果供試品溶液色譜中，在與白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照品相同保留時(shí)間處有吸收峰，而陰性對(duì)照溶液在相同保留時(shí)間處未顯吸收峰，見圖2。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液， 在放置0、 1、 2、 4、 6、 8 h 后精密吸取10 μL進(jìn)樣， 測(cè)定其峰面積值，RSD分別為 0.98% （白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ）、0.81% （白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ）。 結(jié)果表明，供試品溶液 8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.9 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品混合溶液重復(fù)進(jìn)樣6 次， 按 “2.2.1”項(xiàng)的色譜條件測(cè)定白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的峰面積，結(jié)果表明，儀器具有良好的精密度， RSD分別為 0.66% （白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ）、0.49% （白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ）。

2.2.10 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品，按上述方法制備 6 份供試品溶液， 分別測(cè)定， RSD分別為0.52% （白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ）、 0.63% （ 白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ）。結(jié)果表明本方法具有良好的重復(fù)性。

2.2.11 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含有量 （白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ0.069mg/g、 白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ 0.103 mg/g） 的同一批樣品適量， 研細(xì)， 稱取 9 份， 每份 2.5 g， 精密稱定， 置50 mL具塞錐形瓶中， 精密加入對(duì)照品混合溶液 20 mL、25mL、30mL各 3 份 （相當(dāng)于樣品量的 80%、100%和 120%）， 分別加甲醇-乙腈 （1 ∶1） 至刻度 （50 mL）， 按照上述 “2.2.3” 項(xiàng)下供試品溶液制備方法制成加樣供試液。精密吸取加樣供試液10 μL， 按上述方法測(cè)定其峰面積， 計(jì)算回收率，結(jié)果表明本方法回收率良好，見表2。

圖2 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的 HPLC色譜圖Fig.2 HPLC chromatogram s of atractylenolide-I and atractylenolide-Ⅲ

表2 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Results of recovery tests for tractylenolide-I and atractylenolide-Ⅲ

2.3 兒茶素的測(cè)定［21-23]

2.3.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性 Hypersil C18色譜柱 （4.6 mm×200 mm， 5 μm）； 甲醇 -0.5%冰醋酸溶液 （26 ∶74） 為流動(dòng)相， 檢測(cè)波長(zhǎng) 278 nm，體積流量為 0.7 mL/min。 在此條件下兒茶素與其他組分分離效果良好，以兒茶素計(jì)理論塔板數(shù)應(yīng)不低于2 000。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取兒茶素對(duì)照品適量， 加甲醇制成含兒茶素 0.004 6 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的配制 取本品適量，研細(xì)，取約4.0 g， 精密稱定， 置 50 mL量瓶中， 精密加入甲醇 50 m L， 稱定質(zhì)量， 超聲處理 （250 W，30 kHz） 30 min， 用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量， 搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3.4 陰性對(duì)照溶液的配制 按丁沉透膈丸處方比例稱取適量除砂仁的其余藥味，按丁沉透膈丸的前處理和制劑生產(chǎn)工藝制成缺砂仁的陰性樣品，按照上述供試品溶液的配制方法制成缺砂仁的陰性對(duì)照溶液。

2.3.5 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液 1、5、 10、 15、 20 μL， 按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定， 以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，兒茶素量為橫坐標(biāo)分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程： Y=2.364 7 ×106X+ 268.5， r=0.999 8。 結(jié)果表明兒茶素在 0.004 6 ～0.092 0 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好。

2.3.6 陰性對(duì)照試驗(yàn) 分別精密吸取 10 μL的對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液，按“2.3.1” 項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行色譜分析， 結(jié)果供試品溶液色譜中，在與兒茶素對(duì)照品相同保留時(shí)間處有吸收峰，而陰性對(duì)照溶液在相同保留時(shí)間處未顯吸收峰，見圖3。

2.3.7 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣 6 次，按 “2.3.1” 項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定兒茶素的峰面積， 兒茶素 RSD為0.58%， 表明儀器精密度良好。

2.3.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品， 按上述方法制備6 份供試品溶液， 分別測(cè)定， 結(jié)果兒茶素 RSD為 0.73%。 結(jié)果表明本方法具有良好的重復(fù)性。

2.3.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液， 在放置0、 1、 2、 4、 6、8 h 后精密吸取10 μL進(jìn)樣， 測(cè)定其峰面積值， 兒茶素 RSD為 0.91%， 供試品溶液8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

圖3 兒茶素的 HPLC色譜圖Fig.3 HPLC chromatograms of（ +） -catechin determ ination

2.3.10 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含有量 （兒茶素 0.056mg/g） 的同一批樣品適量， 研成細(xì)粉， 稱取 9 份，每份 2.0 g， 精密稱定， 置 50 mL具塞錐形瓶中， 精密加入對(duì)照品溶液 20、 25、 30 m L各 3份 （相當(dāng)于樣品量的80%、 100%和120%）， 分別加甲醇至刻度 （50 mL），按照上述 “2.3.3” 項(xiàng)下供試品溶液制備方法制成加樣供試液。精密吸取加樣供試液 10 μL， 按上述方法測(cè)定其峰面積， 計(jì)算回收率， 結(jié)果表明本方法回收率良好， 見表3。

表3 兒茶素回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.3 Results of recovery tests for（ +） -catechin

2.4 樣品測(cè)定 取 3 批樣品按 “2.1”項(xiàng)、 “2.2”項(xiàng)和 “2.3” 項(xiàng)下方法測(cè)定， 結(jié)果見表4。

表4 樣品測(cè)定結(jié)果 （， n=3）Tab.4 Results of conten t determ ination（， n=3）

表4 樣品測(cè)定結(jié)果 （， n=3）Tab.4 Results of conten t determ ination（， n=3）

批 號(hào) 和厚 樸酚 /（ mg·g-1） 厚 樸酚 /（ mg·g-1） 白術(shù)內(nèi) 酯Ⅰ /（ mg·g-1） 白 術(shù)內(nèi)酯 Ⅲ /（ mg·g-1） 兒茶 素 /（ mg·g-1）130910 1.56 ±0.026 1.12 ±0.021 0.069 ±0.001 2 0.103 ±0.002 0 0.056 ±0.001 0 130912 1.77 ±0.025 1.28 ±0.025 0.080 ±0.001 2 0.119 ±0.002 0 0.062 ±0.001 2 130915 1.60 ±0.026 1.29 ±0.020 0.060 ±0.001 0 0.117 ±0.001 5 0.066 ±0.001 2

3 討論

3.1 和厚樸酚與厚樸酚測(cè)定時(shí)分別以乙腈-0.1%磷酸水溶液、甲醇-0.1%磷酸水溶液、 乙腈-2%冰醋酸溶液為流動(dòng)相不同比例進(jìn)行梯度洗脫。結(jié)果乙腈-0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫時(shí)兩成分分離效果不好，未達(dá)到基線分離；甲醇-0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫時(shí)和厚樸酚與其他色譜峰能達(dá)到基線分離但厚樸酚與其他色譜峰不能達(dá)到基線分離。 而乙腈-2%冰醋酸溶液為流動(dòng)相按照本實(shí)驗(yàn)中比例梯度洗脫時(shí)和厚樸酚、厚樸酚與其他色譜峰均能達(dá)到基線分離。 故選用乙腈-2%冰醋酸溶液按照本實(shí)驗(yàn)中比例為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。

3.2 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ測(cè)定時(shí)， 供試品制備提取時(shí)間分別采用超聲 （250 W， 30 kHz） 15 min、 25 min、 35 min 進(jìn)行處理， 以確定最佳提取時(shí)間。 結(jié)果超聲 15 min 明顯低于超聲 25 min 和 35 min， 超聲 25 min 和超聲 35 min 差異不大， 故選擇超聲 （250W，30 kHz） 25 min 作為供試品制備的提取時(shí)間。

［ 1 ］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典： 2010 年版一部［S］.北京： 中國(guó)醫(yī)藥科 技出版社， 2010： 95-96， 235，附錄 30， 附錄 36.

［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì).國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十三冊(cè)［S］.北京： 人民衛(wèi)生出版社， 1998： 7.

［ 3 ］ 陳玉秀.HPLC測(cè)定整腸正氣丸中和厚樸酚及厚樸酚的含量［ J］.中國(guó)現(xiàn)代中藥， 2013， 15（5） ： 410-412.

［4］ 蘇 偉.高效液相色譜法測(cè)定半夏厚樸湯不同煎液中和厚樸酚含量 ［ J］.中國(guó)保健 營(yíng)養(yǎng)： 下旬刊， 2013， 23 （3 ）：1460-1460.

［ 5 ］ 張赫名.HPLC法測(cè)定香砂養(yǎng)胃丸 （濃縮丸） 中厚樸酚、和厚樸酚的含量［J］.醫(yī)藥前沿， 2013（2）： 295-296.

［6］ 王 東，蔡佳良，郭麗冰，等.不同滅菌方法對(duì)保濟(jì)丸及厚樸有效成分的影響［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥， 2013， 24（6）：1415-1416.

［7］ 劉 霞，唐驍爽，汪永強(qiáng)，等.制備型高效液相色譜法制備和厚 樸 酚與 厚 樸 酚 ［ J］.中 成 藥， 2010， 32 （11 ）：2006-2008.

［ 8 ］ 鄭曉英， 黃 威， 周子平.RP-HPLC法測(cè)定開胸順氣丸中厚樸酚與和厚樸酚的含量 ［ J］.中成藥， 2003， 25 （8 ）：683-684.

［9］ 劉曉鵬，姜 寧，向東山，等.厚樸葉中厚樸酚及和厚樸酚的提取與測(cè)定［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志， 2007， 27（5）：694-696.

［10］ 邢俊波， 賈恒明.HPLC法測(cè)定養(yǎng)胃軟膠囊中厚樸酚、 和厚樸酚的含量［ J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志， 2008， 15（1）：55-56.

［11］ 劉 翔.HPLC法測(cè)定麻仁丸中厚樸酚、 和厚樸酚、 大黃素和大黃酚［J］.中草藥， 2010， 41（4）： 582-583.

［12］ 唐 倩， 石 珊， 趙云麗， 等.HPLC法測(cè)定厚樸溫中湯中山姜素、 和厚樸酚、 小豆蔻明和厚樸酚［J］.中草藥，2009， 40（10）： 1581-1583.

［13］ 李鴻翔， 彭 騰， 鄧 赟， 等.HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地白術(shù)水煎液中的白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ［J］.華西藥學(xué)雜志， 2013， 28（2）： 197-198.

［14］ 張英豐， 朱黎霞， 梁東輝， 等.HPLC同時(shí)測(cè)定黃芪白術(shù)藥對(duì)提取物毛蕊異黃酮苷、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志， 2012， 18（9）： 86-89.

［15］ 劉玉強(qiáng)， 才 謙.50 批不同來源白術(shù)藥材及飲片中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量的 HPLC法測(cè)定［J］.藥物分析雜志， 2012， 32（7）： 1249-1252.

［16］ 祁銀濤， 楊 杰， 李建娟， 等.白術(shù)藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥， 2012， 23（5）： 1260-1262.

［17］ 田 穎， 劉志剛， 孟慶莉.不同產(chǎn)地白術(shù)藥材中白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ和Ⅲ的含量測(cè)定［ J］.海峽藥學(xué)， 2012， 24（8） ： 65-68.

［18］ 許祥君， 陳 敏， 宗 露， 等.不同品規(guī)白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、 Ⅲ的含量測(cè)定［ J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志， 2011 （17）：1421-1424.

［19］ 何宏生， 李 鵬， 陳琴華.高效液相色譜法測(cè)定白術(shù)飲片及其炮制品中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ含量［ J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)， 2011， 30（5）： 651-652.

［20］ 閻克里， 朱秀卿， 趙 麗.白術(shù)揮發(fā)油的 HPLC定量質(zhì)控和特征圖譜研究［J］.藥物分析雜志， 2011， 31 （4）：758-763.

［21］ 李曉光.HPLC法測(cè)定砂仁藥材中兒茶素的含量 ［A］. 2001 年第三屆全國(guó)醫(yī)院 藥品 質(zhì)量監(jiān)督管 理學(xué)術(shù)研討會(huì)， 2001.

［22］ 王增明， 郭慶東， 謝 芳， 等.HPLC測(cè)定茶多酚中兒茶素類及咖啡因含量［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志， 2011， 46（21）：1674-1676.

［23］ 劉 剛， 譚生建， 王海濤， 等.高效液相色譜法測(cè)定跌打活血散中兒茶素和表兒茶素的含量［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2011， 46（18）： 1444-1446.

Determ ination of honokiol， m agnolol， atractylenolide-Ⅰ， atractylenolide-Ⅲand（ +）-catechin in Dingchen Touge Pills by HPLC

GAOWei1， ZHU Ye-shan2， CAIChun-jiang2， SIYan-ling1

（1.Tangshan Workers Hospital， Tangshan 063000， China； 2.Hebei Tangshan Hospital of Traditional Chinese Medicine， Tangshan 063000， China）

Dingchen Touge Pills；honokiol； magnolol； atractylenolide-Ⅰ；atractylenolide-Ⅲ； （ +） -catechin；HPLC

R927.2

： A

： 1001-1528（2014）05-0980-06

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.021

2013-10-25

唐山市科技局2012 年計(jì)劃 （121302110b）

高 偉 （1972—）， 男， 碩士， 副主任醫(yī)師， 主要從事脂肪肝、 炎性腸病、 肝硬化等臨床治療和藥學(xué)研究。 Tel：（ 0315）3722459， E-mail： gaoweilunwen@163.com