楊旺桂，劉芳，邊疆

重慶佳辰生物工程有限公司 生物研究中心，重慶 400084

腫瘤的發(fā)病率呈上升趨勢，治療方法也在不斷發(fā)展，尋找腫瘤的生物標志物進行靶向治療已成為主流方向。血管是腫瘤獲取營養(yǎng)的來源，抑制腫瘤血管生成可抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。因此，腫瘤血管的生物標志物也是腫瘤治療不可抗拒的選擇。2004年2月，以血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）為靶標的抑制血管生成的抗腫瘤藥貝伐單抗被美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準上市，成為重磅炸彈產(chǎn)品，這也為其他以腫瘤血管生物標志物為靶標的藥物打開了成功的大門。

整合素是一類異二聚體跨膜細胞表面受體，由一個α亞基和一個β亞基通過非共價鍵結(jié)合而成，是細胞與細胞、細胞與細胞外基質(zhì)（ECM）之間相互作用的媒介。迄今已報道的整合素有24個，包括18個α亞基和8 個β亞基[1]。整合素與ECM 蛋白結(jié)合，促進細胞的活動和侵襲[2]，在血管生成和腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[3]。在特定環(huán)境中，整合素能否與ECM的配體結(jié)合，決定著細胞的存活或凋亡[2]。整合素與其配體結(jié)合后，啟動細胞內(nèi)的信號傳導途徑，誘導細胞遷移、存活、侵襲等活動[3-4]；整合素與配體的結(jié)合受阻，則會引起細胞凋亡[5]。

整合素αvβ3 是目前研究最廣泛的整合素家族成員，在休眠的內(nèi)皮細胞和其他正常組織中低表達甚至不表達[6]，但在多種腫瘤細胞[2]及腫瘤新生血管內(nèi)皮細胞中[7-9]的表達量卻會急劇升高，因此成為理想的抑制腫瘤及腫瘤血管生成的靶點。臨床研究表明，整合素αvβ3 的表達水平與腫瘤分級呈正相關(guān)，是腫瘤惡性程度的標志[8,10]。通過抑制αvβ3的功能，可誘導新生血管內(nèi)皮細胞凋亡，從而使腫瘤無法獲得生長必需的營養(yǎng)，促使腫瘤細胞凋亡，達到抗腫瘤的目的，而這個過程并不會對正常組織的血管造成不良影響[7-8]。

整合素αvβ3 通過識別RGD（Arg-Gly-Asp）序列，與其細胞外配體結(jié)合實現(xiàn)細胞信號傳導。RGD序列普遍存在于ECM 的玻璃粘連蛋白、纖維結(jié)合蛋白、骨橋蛋白、人纖維蛋白原等黏附蛋白中，在整合素識別其配體過程中起重要作用[11]。由于腫瘤細胞和腫瘤血管內(nèi)皮細胞都能高表達整合素αvβ3，因此RGD 序列不僅能結(jié)合到腫瘤新生血管內(nèi)皮細胞，還能與腫瘤細胞結(jié)合[12]。正因為這一優(yōu)勢，使RGD 得到眾多研究者的關(guān)注，并設(shè)計和制備RGD 肽及其衍生物制劑進行腫瘤的診斷和治療。

1 RGD診斷試劑

用放射性核素標記RGD 肽及其衍生物制備示蹤劑，進行整合素αvβ3 表達水平的顯影，達到腫瘤診斷的目的，已得到廣泛關(guān)注和研究。Chen 等[13-14]發(fā) 現(xiàn)，［18F］FAl-NOTA-PRGD2、［68Ga］Ga-NOTAPRGD2和［18F］FPPRGD2 都有良好的整合素αvβ3 靶向性，且在顯影和藥代動力學方面沒有顯著差別，但［18F］FAl-NOTA-PRGD2和［68Ga］Ga-NOTA-PRGD2比［18F］FPPRGD2 的制備更加簡單，表現(xiàn)出更好的應用前景。多中心臨床研究表明，作為整合素受體顯影的臨床示蹤劑，99mTc-3PRGD2 可敏感地用于肺癌的診斷[15]。［18F］AH-111585具有良好的生物分布，可無創(chuàng)檢測腫瘤血管，在Lewis肺癌的小鼠模型中能如實反映抗腫瘤治療的效果[16]，在7名患者中成功地檢測出了原發(fā)和轉(zhuǎn)移的乳腺癌[17]。另外，有多個放射性核素標記的RGD 肽及其衍生物正進行臨床試驗，GE Healthcare 開發(fā)的［18F］AH-111585 已在2012 年9月完成Ⅱ期臨床試驗。

2 RGD-脂質(zhì)體抗腫瘤制劑

脂質(zhì)體作為藥物載體具有以下優(yōu)點：既可包載疏水性藥物，也能包載親水性藥物；具有良好的藥代動力學，可保護包載的藥物不被降解；表面用靶向抗體或配體修飾后具有特異靶向性[18]。RGD-脂質(zhì)體可靶向高表達整合素αvβ3 的腫瘤細胞和腫瘤血管內(nèi)皮細胞，在腫瘤治療中作為抗腫瘤藥物的載體，可提高療效并降低副作用，具有廣闊的應用前景[19]。

目前，以RGD-脂質(zhì)體進行的抗腫瘤研究，主要將其作為放射性核素、細胞毒藥物、siRNA 等的載體，把藥物匯集在腫瘤組織，并通過內(nèi)吞作用，使藥物進入腫瘤血管內(nèi)皮細胞和腫瘤細胞，提高它們的抗腫瘤作用。人臍靜脈內(nèi)皮細胞結(jié)合和內(nèi)吞RGD-10B 脂質(zhì)體的活性比RAD-10B 脂質(zhì)體和PEG-10B 脂質(zhì)體都高，且細胞活力下降程度較后兩者更顯著[18]。在人肺癌細胞A549和人臍靜脈內(nèi)皮細胞的藥物吸收研究中，RGD-紫杉醇脂質(zhì)體和紫杉醇脂質(zhì)體的細胞吸收比泰素（Taxol）高3倍以上，RGD-紫杉醇脂質(zhì)體比紫杉醇脂質(zhì)體高約40%[20]。在人肺癌A549 裸鼠模型中，RGD-紫杉醇脂質(zhì)體處理組的腫瘤微血管密度顯著低于紫杉醇脂質(zhì)體處理組[20]。RGD-阿霉素脂質(zhì)體通過受體介導的內(nèi)吞作用，可有效地把阿霉素載入腫瘤細胞，從而使腫瘤細胞中具有較高的阿霉素濃度[21-22]，對黑色素瘤細胞B16和A375的IC50分別僅為阿霉素脂質(zhì)體的52%和68%[21]。B16 小鼠模型中，RGD-阿霉素脂質(zhì)體比阿霉素脂質(zhì)體更有效地抑制了腫瘤生長，兩者延長小鼠的存活時間分別是生理鹽水處理組小鼠壽命的25.2%和12.0%[21]。同樣，在C26 直腸癌小鼠模型中，RGD-阿霉素脂質(zhì)體的療效比阿霉素和阿霉素脂質(zhì)體更好，RGD-阿霉素脂質(zhì)體延長小鼠的存活時間為18 d，阿霉素脂質(zhì)體為15 d[23]。因此，以RGD-脂質(zhì)體作為藥物載體進行抗腫瘤治療，使腫瘤細胞和腫瘤血管內(nèi)皮細胞對抗腫瘤藥物的吸收增多，提高了抗腫瘤藥物的療效。

在RGD-脂質(zhì)體表面修飾細胞穿膜肽，可提高脂質(zhì)體的細胞吸收率；而修飾另一個靶向配體制備成雙靶向脂質(zhì)體，則可提高靶向特異性。八聚精氨酸（R8）作為細胞穿膜肽修飾于RGD-PEG-siRNA 脂質(zhì)體表面后，人臍靜脈內(nèi)皮細胞的吸收率和轉(zhuǎn)染效率較RGD-PEG-siRNA 脂質(zhì)體和PEG-siRNA 脂質(zhì)體均高得多，而這3 種脂質(zhì)體在不表達整合素αvβ3的皮膚內(nèi)皮細胞中，其細胞吸收和基因表達卻沒有顯著差異[24]。RGD/anginex（腫瘤血管生成抑制肽）雙靶向脂質(zhì)體在體外表現(xiàn)出協(xié)同靶向效應；在B16F10 黑色素瘤小鼠模型中，雙靶向脂質(zhì)體的特異性較anginex-脂質(zhì)體和RGD-脂質(zhì)體高[25]。

另外，腫瘤細胞可通過表達P-糖蛋白而擁有耐藥性[26-27]，給腫瘤治療帶來不利，采用交叉給藥可提高療效。在阿霉素抗性的人乳腺癌MCF7/A 小鼠模型中，用RGD-P-糖蛋白siRNA 脂質(zhì)體與RGD-阿霉素脂質(zhì)體交替給藥，腫瘤生長被顯著抑制[19]。

3 RGD-膠束抗腫瘤制劑

聚合物膠束具備獨特的核-殼結(jié)構(gòu)，其疏水核提供天然的疏水性藥物載體環(huán)境，親水殼維持膠束在水溶液中的穩(wěn)定性，是難溶性藥物理想的給藥備選方案。

聚合物膠束作為藥物載體具有容易制備、粒徑?。?0～100 nm）、穩(wěn)定性好、載量大、釋放可控的優(yōu)勢[28]。制備膠束的聚合物有聚乙二醇-聚乳酸[28-31]、聚乙二醇-聚賴氨酸[32]、聚乙二醇-聚己內(nèi)酯[33]、聚乙二醇-硬脂酸-殼聚糖[34]等兩親性化合物。聚合物膠束本身沒有主動靶向功能，但可在循環(huán)系統(tǒng)中長時間保持穩(wěn)定，通過EPR 效應，即被動靶向作用，作為抗腫瘤藥物的給藥系統(tǒng)[35]。在大多數(shù)臨床條件下，被動靶向給藥副作用較大，因此，通過特異性配體、抗體進行主動靶向給藥，是膠束給藥系統(tǒng)的發(fā)展趨勢。

把兩親性聚合物的親水端與RGD 肽或其衍生物偶聯(lián)，制備的RGD-聚合物膠束可靶向腫瘤細胞的整合素αvβ3和αvβ5[36-37]。實驗發(fā)現(xiàn)，黑色素瘤細胞B16和人臍靜脈內(nèi)皮細胞對RGD-聚合物膠束的吸收率分別比非靶向聚合物膠束高3.3和2.7 倍[28]，RGD-阿霉素聚合物膠束對MDA-435/LCC6WT細胞和MDA-435/LCC6MDR細胞的毒性分別是非靶向阿霉素聚合物膠束的10 倍和78 倍[33]；在MDA-435/LCC6WT小鼠模型中，注射RGD-阿霉素聚合物膠束的處理組，其存活時間顯著高于非靶向阿霉素聚合物膠束組、阿霉素組和生理鹽水組[33]。同樣劑量的阿霉素，RGD-阿霉素聚合物膠束比阿霉素注射液更有效地抑制腫瘤生長，且沒有明顯的副作用[33]。RGD-阿霉素聚合物膠束在血漿中能維持較高的阿霉素濃度，在心臟、肝臟、脾臟、肺和腎臟中的阿霉素則顯著低于阿霉素注射液；在腫瘤組織中，RGD-阿霉素聚合物膠束的阿霉素濃度顯著高于非靶向阿霉素聚合物膠束[29]。腫瘤切片免疫染色發(fā)現(xiàn)RGD-阿霉素-考布他汀A4 聚合物膠束對CD31 陽性的小鼠腫瘤血管抑制率為84.6%，顯著抑制了腫瘤細胞的繁殖，具有優(yōu)越的抗腫瘤療效[29]。B16F10 黑色素瘤小鼠模型注射RGD-阿霉素-考布他汀A4 聚合物膠束的腫瘤抑制率為90.3%，注射非靶向阿霉素-考布他汀A4 聚合物膠束的腫瘤抑制率則為66.7%，前者顯著優(yōu)于后者；延長小鼠存活時間上，靶向膠束也較非靶向膠束長，分別為生理鹽水處理組小鼠壽命的82.2%和36.8%[29]。RGD-紫杉醇聚合物膠束對惡性膠質(zhì)瘤U87MG 細胞的抑制能力較紫杉醇高2.5 倍，與非靶向紫杉醇聚合物膠束、紫杉醇處理組相比，顯著延長了荷瘤裸鼠的生存時間[30]。

此外，RGD-聚合物膠束包載超順磁納米粒，可作為核成像探針對腫瘤進行靈敏地檢測，是腫瘤診斷和腫瘤治療監(jiān)控的有力工具[31,38]。

4 RGD-納米?？鼓[瘤制劑

納米粒作為藥物載體的主要作用是將藥物輸送到特定的細胞群，并釋放藥物發(fā)揮療效，而在其他部位則盡量減少藥物的滯留，使系統(tǒng)的毒性最小化。納米粒包括聚合物納米粒[39-44]、脂質(zhì)納米粒[45-46]、順磁納米粒[47-48]、生物大分子納米粒[49]等，通過適當?shù)姆绞皆谄浔砻嫘揎桼GD 肽或其衍生物，可實現(xiàn)納米粒的腫瘤靶向作用。

RGD-納米粒與高表達整合素αvβ3 的血管內(nèi)皮細胞和腫瘤細胞有很強的親和性，載藥后提高了藥物對靶細胞的毒性。以聚氧乙烯-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷包裹疏水性納米晶制備的納米粒，在100%胎牛血清中保持穩(wěn)定，與生物大分子發(fā)生的非特異性結(jié)合僅限于較低水平，表面修飾cRGD（cyclo RGD）后，對高表達整合素αvβ3 的U87MG 膠質(zhì)瘤細胞有很強的親和性，而對低表達整合素αvβ3的MCF-7 乳腺癌細胞僅發(fā)生微量的結(jié)合[43]。以c（RGDfK）和轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的多分枝兩親性共聚物——聚胺酯丙交酯/L-磷脂酰乙醇胺共聚物嵌段制備的雙靶向紫杉醇納米粒，對人臍靜脈內(nèi)皮細胞的毒性比紫杉醇提高了10 倍，對高表達轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的人宮頸癌細胞的毒性提高了2 倍[42]。說明靶向載藥納米粒通過受體介導的內(nèi)吞作用使藥物有效進入血管內(nèi)皮細胞和靶向腫瘤細胞。

RGD-納米粒的腫瘤組織靶向性，提高了藥物的抗腫瘤療效，延長了荷瘤小鼠的生存時間。c（RGDfK）-脂質(zhì)納米粒在體外能被高表達整合素αvβ3 的HEK293（β3）細胞特異性結(jié)合并內(nèi)吞，靜脈注射HEK293（β3）移植瘤裸鼠模型后，cRGD-脂質(zhì)納米?？衫鄯e在腫瘤部位[46]。c（RGDyK）-PEG-聚環(huán)丙烷碳酸酯紫杉醇納米粒比PEG-聚環(huán)丙烷碳酸酯紫杉醇納米粒、泰素顯示出更強的穿透性，并積聚在腫瘤組織，顯示較強的腫瘤生長抑制作用[40]。c（RGDyK）-聚環(huán)丙烷碳酸酯納米粒載藥系統(tǒng)可以能量依賴的方式將紫杉醇轉(zhuǎn)運到人U87MG 惡性膠質(zhì)瘤細胞中，使細胞微管明顯變得更加穩(wěn)定，抑制了腫瘤細胞的繁殖，延長U87MG 小鼠模型的存活時間為生理鹽水處理組小鼠壽命的52.4%，高于非靶向紫杉醇聚環(huán)丙烷碳酸酯納米粒的28.6%[41]。生長在大腦的惡性膠質(zhì)瘤進行藥物治療時，藥物須通過血腦屏障和血管-腫瘤屏障，導致腫瘤對藥物的吸收非常有限，嚴重影響了療效[50-52]；當把腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體（TRAIL）基因組裝到RGD-納米粒（RGD-PEG-PEI/pORF-hTRAIL）中，與靶向腦部血管的紫杉醇膠束（CDX-PEG-PLA-PTX）聯(lián)合給藥時，可顯著延長顱內(nèi)惡性膠質(zhì)瘤（U87）裸鼠模型的生存時間[44]。另外，RGD-納米粒在腫瘤部位的濃度高于肝臟、脾和肺，RGD-白介素2 基因納米粒處理的神經(jīng)母細胞瘤（Neuro-2A）小鼠模型，其腫瘤體積比對照小了75%，且該處理組有三分之一的小鼠長期生存[45]。

RGD-納米粒除了可作為藥物載體進行抗腫瘤治療外，也可作為探針進行腫瘤診斷和治療過程的監(jiān)控。人臍靜脈內(nèi)皮細胞和卵巢癌細胞（MLS）對RGD-超小順磁氧化鐵納米粒（RGD-USPIO）的吸收顯著高于非靶向納米粒，在惡性膠質(zhì)瘤（U87MG）裸鼠模型中，RGD-USPIO 主要集中在腫瘤新生血管區(qū)域[48]。通過活體顯微鏡檢查、核磁共振成像、整體熒光顯像等技術(shù)的多模態(tài)成像，RGD-順磁量子點納米?？杀O(jiān)控腫瘤血管的生成[47]。以靶向核素、整合素αvβ3、Tnc蛋白的AS1411、RGD、TTA1制備的多適配體靶向納米粒作為腫瘤探針進行腫瘤診斷，顯示出比AS1411、RGD、TTA1 單個探針更強的特異性和信號強度[41]。

5 結(jié)語

發(fā)現(xiàn)RGD是細胞識別位點至今已超過20年，對其在疾病診斷和治療中的應用備受關(guān)注。對RGD腫瘤診斷試劑的研究已進入臨床階段，而以RGD 制備靶向抗腫瘤藥物還未見相關(guān)的臨床試驗報道。RGD-納米抗腫瘤制劑，包括脂質(zhì)體、膠束和納米粒，在體外和動物移植瘤模型中都表現(xiàn)出比非靶向納米抗腫瘤制劑和已上市藥物有更好的療效，其在臨床上的應用效果值得期待。

[1]Ambros J B,Markus S.Imaging of integrin alpha v beta 3 expression[J].Cancer Metastasis Rev,2008,27(4):631-644.

[2]Desgrosellier J S,Cheresh D A.Integrins in cancer:biological implications and therapeutic opportunities[J].Nat Rev Cancer,2010,10(1):9-22.

[3]Hood J D,Cheresh D A.Role of integrins in cell invasion and migration[J].Nat Rev Cancer,2002,2(2):91-100.

[4]Guo W,Giancotti F G.Integrin signalling during tumour progression[J].Nat Rev Mol Cell Biol,2004,5(10):816-826.

[5]Stupack D G,Cheresh D A.Get a ligand,get a life:integrins,signaling and cell survival[J].J Cell Sci,2002,115(Pt 19):3729-3738.

[6]Somanath P R,Malinin N L,Byzova T V.Cooperation between integrin αvβ3 and VEGFR2 in angiogenesis[J].Angiogenesis,2009,12(2):177-185.

[7]Brooks P C,Montgomery A M,Rosenfeld M,et al.Integrin alpha v beta 3 antagonists promote tumor regression by inducing apoptosis of angiogenic blood vessels[J].Cell,1994,79(7):1157-1164.

[8]Brooks P C,Clark R A,Cheresh D A.Requirement of vascular integrin alpha v beta 3 for angiogenesis[J].Science,1994,64(5158):569-571.

[9]Van W C.Cell adhesion and regulatory molecules involved in tumor formation,hemostasis,and wound healing[J].Head Neck,1995,17(2):140-147.

[10]Gladson C L.Expression of integrin alpha v beta 3 in small blood vessels of glioblastoma tumors[J].J Neuropathol Exp Neurol,1996,55(11):1143-1149.

[11]Avraamides C J,Garmy-Susini B,Varner J A.Integrins in angiogenesis and lymphangiogenesis[J].Nat Rev Cancer,2008,(8):604-617.

[12]Zitzmann S,Ehemann V,Schwab M.Arginine-glycine-aspartic acid(RGD)-peptide binds to both tumor and tumor-endothelial cells in vivo[J].Cancer Res,2002,62(18):5139-5143.

[13]Guo N,Lang L,Li W,et al.Quantitative analysis and comparison study of [18F]AlF-NOTA-PRGD2,[18F]FPPRGD2 and[18Ga]Ga-NOTA-PRGD2 using a reference tissue model[J].PLoS ONE,2012,7(5):e37506.

[14]Lang L,Li W,Guo N,et al.Comparison study of [18F]FAl-NOTA-PRGD2,[18F]FPPRGD2 and [18Ga]Ga-NOTA-PRGD2 for PET imaging of U87MG tumors in mice[J].Bioconjug Chem,2011,22(12):2415-2422.

[15]Zhu Z,Miao W,Li Q,et al.99mTc-3PRGD2 for integrin receptor imaging of lung cancer:a multicenter study[J].J Nucl Med,2012,53(5):716-722.

[16]Morrison M S,Ricketts S A,Barnett J,et al.Use of a novel Arg-Gly-Asp radioligand,18F-AH111585,to determine changes in tumor vascularity after antitumor therapy[J].J Nucl Med,2009,50(1):116-122.

[17]Kenny L M,Coombes R C,Oulie I,et al.Phase I trial of the positron-emitting Arg-Gly-Asp(RGD) peptide radioligand18F-AH111585 in breast cancer patients[J].J Nucl Med,2008,49(6):879-886.

[18]Koning G A,Fretz M M,Woroniecka U,et al.Targeting liposomes to tumor endothelial cells for neutron capture therapy[J].Appl Radiat Isot,2004,61(5):963-967.

[19]Jiang J,Yang S J,Wang J C,et al.Sequential treatment of drug-resistant tumors with RGD-modified liposomes containing siRNA or doxorubicin[J].Eur J Pharm Biopharm,2010,76(2):170-178.

[20]Meng S,Su B,Li W,et al.Integrin-targeted paclitaxel nanoliposomes for tumor therapy[J].Med Oncol,2011,28(4):1180-1187.

[21]Xiong X B,Huang Y,Lu W L,et al.Enhanced intracellular delivery and improved antitumor efficacy of doxorubicin by sterically stabilized liposomes modified with a synthetic RGD mimetic[J].J Control Rel,2005,107(2):262-275.

[22]Xiong X B,Huang Y,Lu W L,et al.Enhanced intracellular uptake of sterically stabilized liposomal Doxorubicin in vitro resulting in improved antitumor activity in vivo[J].Pharm Res,2005,22(6):933-939.

[23]H?lig P,Bach M,V?lkel T,et al.Novel RGD lipopeptides for the targeting of liposomes to integrin-expressing endothelial and melanoma cells[J].Protein Eng Des Sel,2004,17(5):433-441.

[24]Kibria G,Hatakeyama H,Ohga N,et al.Dual-ligand modification of PEGylated liposomes shows better cell selectivity and efficient gene delivery[J].J Control Rel,2011,153(2):141-148.

[25]Kluza E,Jacobs I,Hectors S J,et al.Dual-targeting of αvβ 3 and galectin-1 improves the specificity of paramagnetic/fluorescent liposomes to tumor endothelium in vivo[J].J Control Rel,2012,158(2):207-214.

[26]Ling V.Multidrug resistance and P-glycoprotein expression[J].Ann N Y Acad Sci,1987,507:7-8.

[27]Bradley G,Ling V.P-glycoprotein,multidrug resistance and tumor progression[J].Cancer Metastasis Rev,1994,13(2):223-233.

[28]Wang Y,Wang X,Zhang Y,et al.RGD-modified polymeric micelles as potential carriers for targeted delivery to integrinoverexpressing tumor vasculature and tumor cells[J].J Drug Target,2009,17(6):459-467.

[29]Wang Y,Yang T,Wang X,et al.Materializing sequential killing of tumor vasculature and tumor cells via targeted polymeric micelle system[J].J Control Rel,2011,149(3):299-306.

[30]Zhan C,Gu B,Xie C,et al.Cyclic RGD conjugated poly(ethylene glycol)-co-poly(lactic acid) micelle enhances paclitaxel anti-glioblastoma effect[J].J Control Rel,2010,143(1):136-142.

[31]Kessinger C W,Khemtong C,Togao O,et al.In vivo angiogenesis imaging of solid tumors by avb3-targeted,dual-modality micellar nanoprobes[J].Exp Biol Med(Maywood),2010,235(8):957-965.

[32]Mickler F M,Vachutinsky Y,Oba M,et al.Effect of integrin targeting and PEG shielding on polyplex micelle internalization studied by live-cell imaging[J].J Control Rel,2011,156(3):364-373.

[33]Xiong X B,Ma Z,Lai R,et al.The therapeutic response to multifunctional polymeric nano-conjugates in the targeted cellular and subcellular delivery of doxorubicin[J].Biomaterials,2010,31(4):757-768.

[34]Cai L L,Liu P,Li X,et al.RGD peptide-mediated chitosanbased polymeric micelles targeting delivery for integrin-overexpressing tumor cells[J].Int J Nanomed,2011,6:3499-3508.

[35]Du Y Z,Weng Q,Yuan H,et al.Synthesis and antitumor activity of stearate-g-dextran micelles for intracellular doxorubicin delivery[J].ACS Nano,2010,4(11):6894-6902.

[36]Oba M,Aoyagi K,Miyata K,et al.Polyplex micelles with cyclic RGD peptide ligands and disulfide cross-links directing to the enhanced transfection via controlled intracellular trafficking[J].Mol Pharm,2008,5(6):1080-1092.

[37]Oba M,Fukushima S,Kanayama N,et al.Cyclic RGD peptide-conjugated polyplex micelles as a targetable gene delivery system directed to cells possessing alphavbeta3 and alphavbeta5 integrins[J].Bioconjug Chem,2007,18(5):1415-1423.

[38]Khemtong C,Kessinger C W,Ren J,et al.In vivo off-resonance saturation magnetic resonance imaging of αvβ3-targeted superparamagnetic nanoparticles[J].Cancer Res,2009,69(4):1651-1658.

[39]Ko H Y,Choi K J,Lee C H,et al.A multimodal nanoparticle-based cancer imaging probe simultaneously targeting nucleolin,integrin αvβ3 and tenascin-C proteins[J].Biomaterials,2011,32(4):1130-1138.

[40]Jiang X,Xin H,Gu J,et al.Solid tumor penetration by integrin-mediated pegylated poly(trimethylene carbonate) nanoparticles loaded with paclitaxel[J].Biomaterials,2013,34(6):1739-1746.

[41]Jiang X,Sha X,Xin H,et al.Integrin-facilitated transcytosisfor enhanced penetration of advanced gliomas by poly(trimethylene carbonate)-based nanoparticles encapsulating paclitaxel[J].Biomaterials,2013,34(12):2969-2979.

[42]Xu Q,Liu Y,Su S,et al.Anti-tumor activity of paclitaxel through dual-targeting carrier of cyclic RGD and transferrin conjugated hyperbranched copolymer nanoparticles[J].Biomaterials,2012,33(5):1627-1639.

[43]Chen H,Wang L,Yeh J,et al.Reducing non-specific binding and uptake of nanoparticles and improving cell targeting with an antifouling PEO-b-PgMPS copolymer coating[J].Biomaterials,2010,31(20):5397-5407.

[44]Zhan C,Wei X,Qian J,et al.Co-delivery of TRAIL gene enhances the anti-glioblastoma effect of paclitaxel in vitro and in vivo[J].J Control Rel,2012,160(3):630-636.

[45]Tagalakis A D,Grosse S M,Meng Q H,et al.Integrin-targeted nanocomplexes for tumour specific delivery and therapy by systemic administration[J].Biomaterials,2011,32(5):1370-1376.

[46]Goutayer M,Dufort S,Josserand V,et al.Tumor targeting of functionalized lipid nanoparticles:assessment by in vivo fluorescence imaging[J].Eur J Pharm Biopharm,2010,75(2):137-147.

[47]Mulder W J,Castermans K,van Beijnum J R,et al.Molecular imaging of tumor angiogenesis using αvβ3-integrin targeted multimodal quantum dots[J].Angiogenesis,2009,12(1):17-24.

[48]Kiessling F,Huppert J,Zhang C,et al.RGD-labeled USPIO inhibits adhesion and endocytotic activity of alpha v beta3-integrin-expressing glioma cells and only accumulates in the vascular tumor compartment[J].Radiology,2009,253(2):462-469.

[49]Desai N,Trieu V,Yao Z,et al.Increased antitumor activity,intratumor paclitaxel concentrations,and endothelial cell transport of cremophor-free,albumin-bound paclitaxel,ABI-007,compared with cremophor-based paclitaxel[J].Clin Cancer Res,2006,12(4):1317-1324.

[50]He H,Li Y,Jia X R,et al.PEGylated poly(amidoamine) dendrimer-based dual-targeting carrier for treating brain tumors[J].Biomaterials,2011,32(2):478-487.

[51]Ding H,Inoue S,Ljubimov A V,et al.Inhibition of brain tumor growth by intravenous poly(beta-L-malic acid) nanobioconjugate with pH-dependent drug release[J].Proc Natl Acad Sci USA,2010,107(42):18143-18148.

[52]Xin H,Jiang X,Gu J,et al.Angiopep-conjugated poly(ethylene glycol)-co-poly(epsilon-caprolactone) nanoparticles as dual-targeting drug delivery system for brain glioma[J].Biomaterials,2011,32(18):4293-4305.