王 君

(遼寧省海城市牌樓動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所,遼寧海城 114207)

禽病的實(shí)驗(yàn)室檢查方法及程序

王 君

(遼寧省海城市牌樓動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所,遼寧海城 114207)

1 細(xì)菌培養(yǎng)

如果判定待檢禽的大體病變有必要進(jìn)行細(xì)菌檢查，則可從內(nèi)臟上那些未暴露的表面取樣。如已發(fā)生污染，就用加熱的刮刀或其他鐵器燒烙器官表面，然后插入無菌接種環(huán)。注意不要把組織燒烙過度。比較好的做法是無菌采取大塊組織樣品，置于滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)送交微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，在清潔的環(huán)境里進(jìn)行初代培養(yǎng)。

2 呼吸道病毒分離

如懷疑有呼吸道疾病，最好進(jìn)行病毒培養(yǎng)或禽體傳代?？捎孟炯舻逗丸囎訜o菌采取有完整截面的氣管下段、支氣管和肺的上部，放入消毒乳缽磨碎，或裝入平皿暫時(shí)貯存?？蔁o菌采集其他組織（如氣囊）加到上述樣品里，或者放進(jìn)其他無菌容器中分開檢查。采集的氣管此時(shí)便可剪開，如有滲出物，也可加到前面收集的材料里或存放在另外的小瓶中。各種實(shí)質(zhì)器官初代病毒分離可以采用相似的程序。

3 沙門氏菌培養(yǎng)

應(yīng)該檢查其他所有內(nèi)臟器官的異常，如小膿腫、顏色變化、腫脹和變脆等。如有異常，應(yīng)在剪開腸道前采集病變組織樣品，放到適當(dāng)?shù)墓腆w或液體培養(yǎng)基中，一旦打開腸道，腸道內(nèi)容物肯定會(huì)污染其他器官。如懷疑有沙門氏菌感染，可用消毒鑷子和剪子選取一些腸段，直接放進(jìn)消毒乳缽研磨或裝入消毒平皿準(zhǔn)備以后培養(yǎng)。常規(guī)檢查時(shí)，只取包括回腸下段、盲腸近段和盲腸“扁桃體”及大腸近端的一節(jié)，并在無菌狀態(tài)下研磨以制備接種物。腸道的其他區(qū)段或者其他內(nèi)臟器官的組織可加到胃腸道收集物中，或者分開培養(yǎng)。另外，可用消毒棉拭子從露出的胃腸壁取樣進(jìn)行沙門氏菌培養(yǎng)。

4 大體剖檢

在完成必要的培養(yǎng)之后，應(yīng)對(duì)所有的組織進(jìn)行全面的檢查，檢查肝臟、脾臟和腎臟是否有腫大。腫大肝的明顯標(biāo)志是邊緣變圓。腸道主要檢查炎癥、滲出物、寄生蟲、異物、功能異常、腫瘤和膿腫。此時(shí)，還可檢查各種神經(jīng)、骨結(jié)構(gòu)、骨髓狀況以及關(guān)節(jié)。對(duì)于坐骨神經(jīng)的檢查，可剪去大腿內(nèi)側(cè)的肌肉使之暴露。位于體腔內(nèi)的坐骨神經(jīng)叢被腎臟掩蓋著，用解剖刀的鈍端刮去腎組織可很好地暴露該神經(jīng)叢。臂神經(jīng)叢的神經(jīng)很容易在胸腔入口的兩側(cè)找到，須查有無腫大。應(yīng)對(duì)整個(gè)迷走神經(jīng)進(jìn)行檢查，以防忽略了小段的腫脹。

用骨鉗切斷骨時(shí)的難易程度是判斷骨骼狀況的一個(gè)指征。應(yīng)觸診肋骨軟骨的交界處，檢查有無腫脹（“串珠狀”）?？v切長(zhǎng)骨骨骺，檢查有無異常的鈣化過程。彎曲和對(duì)折測(cè)定脛跗骨或跖骨的豎硬度，可以檢查有無營(yíng)養(yǎng)缺乏癥。健康的骨骼在折斷時(shí)發(fā)出喀嚓的聲響。缺乏維生素D或礦物質(zhì)的雞，其骨中礦物質(zhì)嚴(yán)重減少，以至任憑彎曲到什么角度都不斷裂。

關(guān)節(jié)如有滲出物，可在拔毛后用熱烙鐵燒烙局部皮膚，再用消毒解剖刀切開，然后用滅菌接種環(huán)或棉拭子采取關(guān)節(jié)滲出物?？捎猛瑯拥姆椒ú扇〔z查副鼻竇的滲出物。

5 腦的暴露和檢查

由于各層腦膜在有些地方與骨骼黏附得很緊，不易把腦組織完整地取出來。在大多數(shù)情況下，可采取以下的操作方法快速取出和檢查腦組織。在寰枕交界處分離頭部和下頜。燒烙切面并去掉過多的疏松組織。剝離顱骨和上頜的皮膚并把它向前翻，在此位置上用一只手捏住，如果取出的腦組織的一部分要做動(dòng)物接種、病毒分離或真菌或細(xì)菌培養(yǎng)，以下步驟必須使用滅菌器具。

捏住位于頭兩側(cè)的通向顱腔的骨頭，用無菌的有兩個(gè)粗鉗口的骨鉗或大外科剪的端部，從枕骨大孔開始，向前從兩側(cè)向位于顱腔前緣的中點(diǎn)剪開。取下這片剪掉的顱骨，整個(gè)腦組織便暴露出來了。

如一部分腦組織要用于培養(yǎng)或動(dòng)物接種（例如疑似有禽腦脊髓炎病毒），另一部分用于病理組織學(xué)檢查（如維生素E缺乏），可用鋒利的外科刀片沿中線將腦組織由前到后切開，然后小心地從一個(gè)腦半球上切斷神經(jīng)和聯(lián)系，同時(shí)將頭部翻過來，當(dāng)與其他部分完全脫離時(shí)，將這一半腦組織浸入盛有福爾馬林的容器中。另一半腦組織可用鋒利的滅菌彎剪取下（不必考慮保持組織結(jié)構(gòu)的問題），放入平皿或滅菌的器皿中或乳缽里。注意別用接觸了福爾馬林的器具污染要分離病毒的腦組織。這兩個(gè)半腦也可按相反的順序取出。如果要用整個(gè)腦組織來做切片或培養(yǎng)，操作要謹(jǐn)慎。如只用于切片，也可原位固定，然后取出。大塊腦組織應(yīng)進(jìn)行縱切，以便固定液能很好地滲透進(jìn)去。

6 鏡檢

對(duì)特定組織制成切片后，可以鏡檢以便進(jìn)一步確定檢查的線索。①球蟲：在剪開腸道之前，先注意觀察漿膜下層。用腸道各段黏膜刮取物和盲腸內(nèi)容物制成濕封片，直接在顯微鏡下檢查懸浮的卵囊和裂殖子以及上皮細(xì)胞內(nèi)發(fā)育階段（組織階段）。對(duì)于其他原蟲的檢查，可采集感染組織制備濕封片，若有必要，可加少許溫?zé)嵘睇}水提供液體，在顯微鏡下檢查六鞭蟲、組織滴蟲和毛滴蟲等。②毛細(xì)線蟲和蛔蟲幼蟲：采集黏膜滲出物和黏膜深部的刮取物，在2個(gè)厚玻片之間壓成一薄層。在強(qiáng)光或低倍放大鏡下檢查有無寄生蟲。放大后，尋找雌性毛細(xì)線蟲里具有兩極的檸檬形卵子。③真菌：取病變部刮取物制成濕封片，加20%氫氧化鈉或氫氧化鉀。不時(shí)加熱消化，持續(xù)15min或更長(zhǎng)時(shí)間，在高倍鏡下鏡檢霉菌菌絲。④彎曲菌：在暗視野或相差顯微鏡下檢查新鮮膽汁的濕封片，只有陽(yáng)性結(jié)果才有意義。⑤菌血癥和血液寄生蟲：制備新鮮的濕封片，最好用檸檬酸處理過的禽血，在明視野和暗視野顯微鏡下檢查活的微生物。制備新鮮血涂片，在空氣中干燥，用姬姆薩染色、革蘭氏染色、瑞氏染色或其他方法染色。⑥滲出液：如懷疑有傳染性鼻炎，取清亮鼻涕或鼻竇滲出物制成薄涂片，用姬姆薩染色、革蘭氏染色、美藍(lán)染色或其他方法染色。接種適當(dāng)培養(yǎng)基或易感雛雞，以分離病原。

王君（1980-），女，獸醫(yī)師，本科。