崔殿波，王艷宏(通訊作者)

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱150040)

過(guò)敏性哮喘是機(jī)體對(duì)抗原性或非抗原性刺激引起的一種氣管、支氣管反應(yīng)性過(guò)度增高的疾病，已成為嚴(yán)重威脅人類健康的疾病之一。由于過(guò)敏性哮喘病因及發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜，迄今尚未完全闡明，因此本文就近年來(lái)關(guān)于過(guò)敏性哮喘的實(shí)驗(yàn)研究綜述如下，以其為開(kāi)展相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究提供參考。

1 豚鼠實(shí)驗(yàn)性哮喘動(dòng)物模型

姚孝明等［1］采用腹腔注射10%卵蛋白(OVA)建立豚鼠哮喘模型，通過(guò)觀察哮喘潛伏期、外周血嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)計(jì)數(shù)、血清白三烯(LTE4)、環(huán)磷酸腺苷(cAMP)和環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(cGMP)的變化，并采用離體豚鼠氣管環(huán)體外試驗(yàn)，通過(guò)觀察AG對(duì)磷酸組胺引起的豚鼠離體氣管平滑肌收縮的影響，探討了江蘇省名中醫(yī)朱啟勇經(jīng)驗(yàn)方安喘顆粒(AG)的作用機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)AG對(duì)實(shí)驗(yàn)性哮喘模型豚鼠有良好治療作用。其作用機(jī)制與預(yù)防和緩解氣管平滑肌痙攣、降低模型豚鼠外周血中EOS計(jì)數(shù)和LTE4的含量及恢復(fù)cAMP/cGMP比值有關(guān)。

陳賀等［2］通過(guò)建立卵白蛋白為誘因的豚鼠過(guò)敏性哮喘模型，通過(guò)觀察復(fù)方川貝顆粒對(duì)哮喘豚鼠血清中血栓素B2(TXB2)、白三烯B4(LTB4)的含量、哮喘潛伏期及肺部病理切片EOS計(jì)數(shù)的影響，探討復(fù)方川貝顆粒治療過(guò)敏性哮喘的內(nèi)在機(jī)制。結(jié)果表明該制劑對(duì)OVA介導(dǎo)的豚鼠過(guò)敏性哮喘模型的平喘作用機(jī)制與調(diào)節(jié)血清炎性介質(zhì)和減少EOS浸潤(rùn)有關(guān)。

劉以民等［3］分別采用組胺噴霧致豚鼠哮喘法、肺溢流法、離體氣管片法、豚鼠肺支氣管灌流法等實(shí)驗(yàn)方法探討地龍湯治療哮喘的作用機(jī)制。結(jié)果表明，地龍湯水煎液對(duì)噴入組胺致喘的豚鼠，能使其哮喘潛伏期顯著延長(zhǎng)，肺溢流減少，對(duì)豚鼠離體氣管平滑肌過(guò)敏性收縮有非常顯著的抑制作用，對(duì)給予組胺后的豚鼠離體氣管片引起的收縮有非常顯著的舒張作用，能使肺支氣管灌流液流速加快，灌流量增加。地龍湯水煎液對(duì)由各種過(guò)敏介質(zhì)引起的哮喘有顯著的抑制作用。

邢文娟等［4］用卵清蛋白和氫氧化鋁致敏建立了豚鼠實(shí)驗(yàn)性哮喘模型，以觀察其行為學(xué)差異和EOS數(shù)目的差異為指標(biāo)，探討蘆薈凝膠對(duì)豚鼠過(guò)敏性哮喘的影響。結(jié)果表明，蘆薈組EOS數(shù)目較哮喘組明顯降低，且其哮喘癥狀有明顯差異。蘆薈凝膠可有效減輕豚鼠的哮喘癥狀。

丁永芳等用OVA復(fù)制豚鼠哮喘模型，觀察小兒咳喘寧顆粒對(duì)模型動(dòng)物哮喘潛伏期、血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH－PX)、肺組織病理學(xué)的影響。結(jié)果表明，小兒咳喘寧顆粒可明顯延長(zhǎng)哮喘潛伏期、提高模型豚鼠血清中SOD活性，改善模型動(dòng)物肺組織病理學(xué)改變。小兒咳喘寧顆粒對(duì)過(guò)敏性哮喘模型豚鼠有一定的保護(hù)作用。

2 大鼠實(shí)驗(yàn)性哮喘動(dòng)物模型

王勇生等［5］以O(shè)VA致敏和激發(fā)建立大鼠支氣管哮喘模型，采用計(jì)數(shù)BALF中白細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞及肺組織切片HE染色鑒定模型，觀察地塞米松對(duì)建立過(guò)敏性哮喘大鼠模型的影響。結(jié)果表明，模型組大鼠BALF中白細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)明顯多于對(duì)照組和地塞米松組。肺病理組織切片HE染色顯示模型組大鼠支氣管收縮，部分支氣管上皮脫落，支氣管及小血管周圍有大量嗜酸性粒細(xì)胞等炎細(xì)胞浸潤(rùn)，地塞米松組大鼠可見(jiàn)支氣管周圍有少許同樣細(xì)胞浸潤(rùn)。對(duì)照組大鼠未見(jiàn)明顯異常。成功建立過(guò)敏性支氣管哮喘大鼠模型。

郭勇英等［6］通過(guò)觀察一般生活狀態(tài)、肺組織形態(tài)學(xué)，以及放射免疫法測(cè)定血清中的ET－1(內(nèi)皮素－1)，IL－1(白介素 －1)，IL－6(白介素 －6)，TNF－α(腫瘤壞死因子 －α)含量，生化法測(cè)定血清中NO(一氧化氮)含量，免疫組化測(cè)定ICAM－1(細(xì)胞間黏附分子－1)等為指標(biāo)，探討了桑蘇二陳湯加味對(duì)卵白蛋白致敏的大鼠過(guò)敏性支氣管哮喘的作用及作用機(jī)制，結(jié)果表明，在肺組織形態(tài)學(xué)中，桑蘇二陳湯加味低劑量組能加速緩解支氣管痙攣，減少嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，減輕氣道炎癥，并能顯著改善哮喘大鼠血清中TNF－α、ET－1，IL－1，IL－6，NO 含量及肺組織上皮細(xì)胞ICAM－1陽(yáng)性面積的表達(dá)，有效控制氣道炎癥，從而改善氣道重塑。

朱敏敏等［7］以大鼠致敏后的一般生活狀態(tài)、肺泡灌洗液中白細(xì)胞總數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞的百分比、巨噬細(xì)胞、右下肺組織(未經(jīng)灌洗)病理切片，HE染色后觀察攝片等為指標(biāo)，采用低劑量卵白蛋白，并用新鮮配制的氫氧化鋁凝膠、百日咳桿菌菌苗作為免疫佐劑，經(jīng)多點(diǎn)皮下注射和腹腔注射，2次致敏，實(shí)驗(yàn)證明致敏效果良好，采用霧化吸入卵白蛋白進(jìn)行連續(xù)激發(fā)，成功地建立了大鼠過(guò)敏性哮喘模型。

此外，劉永剛［8］選擇致敏大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒反應(yīng)模型觀察麻黃湯及拆方對(duì)哮喘速發(fā)相的抑制作用，結(jié)果表明麻黃湯及拆方能不同程度抑制致敏大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒反應(yīng)。

3 小鼠實(shí)驗(yàn)性哮喘動(dòng)物模型

周明眉等［9］通過(guò)OVA皮下注射致敏，霧化吸入激發(fā)的方法，建立哮喘特異性免疫治療的小鼠模型。通過(guò)檢測(cè)BALF中的(EOS計(jì)數(shù)和ELISA法檢測(cè)BALF中IgE，IL－4，IL－5，IL－13和IFN－γ，考察模型動(dòng)物與過(guò)敏性哮喘相關(guān)的炎癥細(xì)胞水平和免疫系統(tǒng)的Th1/Th2平衡，探討地龍酸性部位對(duì)過(guò)敏性哮喘的治療作用。結(jié)果表明，地龍酸性部位組(S)和30%乙醇洗脫(S30)組有顯著的抑制EOS計(jì)數(shù)升高，明顯抑制IgE、IL24、IL25、IL213水平升高，和顯著抑制IFN－γ降低的作用，其作用機(jī)制可能為抑制EOS的分泌和調(diào)整Th1/Th2平衡。

唐燦等［10］通過(guò)對(duì)致敏小鼠中腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)和組織胺含量的測(cè)定，電鏡下對(duì)致敏小鼠腸系膜肥大細(xì)胞脫顆粒的觀察，發(fā)現(xiàn)小青龍合劑具有顯著增加致敏小鼠中腦AD和DA分泌量，顯著減少His、5－HT分泌量;穩(wěn)定肥大細(xì)胞膜，抑制肥大細(xì)胞脫顆粒，初步闡明了小青龍合劑平喘作用的機(jī)理。

王桂蘭等［11］建立了OVA和氫氧化鋁致敏的小鼠哮喘模型，通過(guò)檢測(cè)血漿IgE水平和血中嗜酸細(xì)胞計(jì)數(shù)，通過(guò)免疫組化的方法檢測(cè)對(duì)各組小鼠肺組織STAT6的表達(dá)，探討了布地耐德對(duì)哮喘模型過(guò)敏性炎癥信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)的干預(yù)作用。結(jié)果表明，布地耐德混懸液霧化吸入不但可以減輕哮喘模型氣道的過(guò)敏性炎癥，同時(shí)可以通過(guò)抑制肺組織STAT6的表達(dá)進(jìn)而抑制過(guò)敏性炎癥的信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)。

劉洋［12］以O(shè)VA建立小鼠過(guò)敏性哮喘模型，分別應(yīng)用免疫組化方法研究精氨酸酶基因在過(guò)敏性哮喘模型小鼠肺中特異性表達(dá)的變化和應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法研究gob－5基因在過(guò)敏性哮喘模型小鼠肺及氣管中特異性表達(dá)的變化，并篩選出gob－5基因在過(guò)敏性哮喘小鼠的器官中的特異性表達(dá)及其最佳反應(yīng)條件，初步探討了祛風(fēng)解痙平喘方劑(風(fēng)哮方、定喘湯、射干麻黃湯)的分子生物學(xué)機(jī)制，使中醫(yī)治療哮喘更加客觀化，量效化。

4 結(jié)語(yǔ)

制備支氣管哮喘模型的動(dòng)物有多種，包括小鼠、大鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、犬、兔、羊及猴等，其中小鼠、大鼠與豚鼠應(yīng)用最普遍。豚鼠哮喘模型是最早、最經(jīng)典的哮喘動(dòng)物模型，但過(guò)敏反應(yīng)由IgG介導(dǎo)，與人類哮喘有所不同，而且豚鼠特異性的免疫檢測(cè)試劑較少，妨礙了與哮喘有關(guān)的免疫抑制方面的研究。對(duì)于治療哮喘機(jī)制研究多建議采用小鼠哮喘模型，因在小鼠肺部炎癥中主要介導(dǎo)的抗體是IgE，但也有其局限性，如不出現(xiàn)人類哮喘特征性的黏膜炎癥及上皮層EOS浸潤(rùn)，大多數(shù)出現(xiàn)過(guò)敏性肺泡炎和超敏性肺炎，進(jìn)而掩蓋氣道的炎癥損害，且小鼠體積小、體重輕、操作不便等。目前大鼠的過(guò)敏性哮喘急性期模型在國(guó)內(nèi)外被廣泛采用，因大鼠具有品系純、繁殖快、價(jià)格低、來(lái)源豐富、有關(guān)分子生物學(xué)試劑較多等優(yōu)點(diǎn)，并與人類哮喘相似，如過(guò)敏性反應(yīng)由IgE介導(dǎo)，特別適合于特異性抗原抗體反應(yīng)的研究，激發(fā)后出現(xiàn)速發(fā)和遲發(fā)雙相反應(yīng)比例高，遲發(fā)反應(yīng)與患者遲發(fā)反應(yīng)時(shí)間較接近，氣道高敏性持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)等。過(guò)敏性哮喘的實(shí)驗(yàn)研究的指標(biāo)，整體水平多觀察模型動(dòng)物的引喘潛伏期、哮喘持續(xù)的時(shí)間;組織、器官水平多取氣管或肺組織進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)檢查或開(kāi)展肺溢流實(shí)驗(yàn)、離體器官實(shí)驗(yàn);細(xì)胞水平多測(cè)定血清或BALF中細(xì)胞總數(shù)或分類計(jì)數(shù)(單核/巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、EOS及嗜中性粒細(xì)胞的百分率);分子水平多測(cè)定血清或BALF中IgE及與TH1/TH2相關(guān)的細(xì)胞因子，如TH1分泌的IFN－γ和IL－2，TH2分泌的IL－4和IL－5等。

［1］ 姚孝明，丁永芳，肖慶玲.安喘顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)性哮喘豚鼠的平喘作用及其機(jī)制探討.江蘇醫(yī)藥，2013，39(16):1891－1894.

［2］ 陳賀，張慧穎，劉禾，丁春曉，等.復(fù)方川貝顆粒對(duì)OVA介導(dǎo)的豚鼠過(guò)敏性哮喘模型的平喘作用機(jī)制研究.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19(18):228 －231.

［3］ 劉以民，張德新，杜亞明，等.地龍湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性哮喘豚鼠平喘作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)中醫(yī)藥科技，2007，14(1):21－22.

［4］ 邢文娟，丁明，楊璐.蘆薈凝膠對(duì)豚鼠哮喘的作用研究［J］.陜西醫(yī)學(xué)雜志，2009，38(5):535 －536.

［5］ 王勇生，桂淑玉，李永懷.過(guò)敏性哮喘大鼠模型的建立及地塞米松對(duì)其的影響［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2007，4(22):39－41.

［6］ 郭勇英.桑蘇二陳湯加味對(duì)過(guò)敏性支氣管哮喘的實(shí)驗(yàn)研究［D］.河北醫(yī)科大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文，2009.

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［9］ 周明眉，褚襄萍，楊紅舟，等.地龍酸性部位對(duì)小鼠過(guò)敏性哮喘模型的抗炎和抗過(guò)敏作用［J］.中國(guó)中藥雜志，2008，23(19):2249－2251.

［10］ 唐燦，沈映君.小青龍合劑平喘作用機(jī)理研究［J］.中成藥，1998，20(3):32 －33.

［11］ 王桂蘭，魯繼榮，劉翔騰.布地耐德對(duì)哮喘模型過(guò)敏性炎癥信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)的干預(yù)作用［J］.中國(guó)婦幼保健，2009，24:2552－2554.

［12］ 劉洋.祛風(fēng)解痙平喘類方劑對(duì)過(guò)敏性哮喘炎性基因的調(diào)控研究［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文，2007.