史麗玲

(盤錦市中心醫(yī)院檢驗科，遼寧 盤錦 124010)

脂聯(lián)素是脂肪細胞分泌的細胞因子，具有多種生物學(xué)功能，在人類健康方面發(fā)揮著重要作用[1]。流行病學(xué)研究顯示,血清低脂聯(lián)素水平與乳腺癌危險性密切相關(guān)[2-3]。Kang等[4]研究也發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素在生理濃度范圍內(nèi)即能明顯抑制人類乳腺癌細胞(MAD-MB-231細胞)的增殖，延長脂聯(lián)素處理時間可引起MAD-MB-231細胞生長停止，甚至凋亡。這個結(jié)果首次顯示了脂聯(lián)素直接對癌癥細胞生長的抑制作用，為血漿脂聯(lián)素水平下降可能是乳腺癌危險因素這一理論提供了依據(jù)。由此可見，作為一種初篩試驗，脂聯(lián)素水平的測定可以為乳腺癌的診斷和預(yù)后提供新的方向。

癌抗原15-3(cancer antigen 15-3，CA15-3)是檢測乳腺癌較重要的抗原，目前國內(nèi)外對CA15-3在乳腺癌中的診斷意義已有頗多研究[6-7]。但尚無一種敏感性和特異性均較為理想的診斷乳腺癌的腫瘤標志物。本研究通過聯(lián)合檢測血清脂聯(lián)素和CA15-3的水平，以期尋求新方法來診斷乳腺癌。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取2009年4～7月盤錦市中心醫(yī)院乳腺科門診患者72例。其中乳腺癌組36例，年齡42～72(52.5±10.2)歲，所有患者均經(jīng)手術(shù)、病理或明確的影像學(xué)檢查證實，其中浸潤性導(dǎo)管癌21例、浸潤性小葉癌12例、炎性乳腺3例。臨床分期為Ⅰ期3例，Ⅱ期10例，Ⅲ期8例，Ⅳ期15例。乳腺良性病變組36例，年齡42～73(52.8±10.5)歲，病理證實為乳腺增生12例、纖維腺瘤11例、炎性包塊3例。另選取同期進行體檢的健康女性20例作為正常對照組，年齡42～73(55.4±11.5)歲。以上所有入選者空腹血脂水平正常，均無糖尿病、甲狀腺疾病、腎功能不良等引起血清脂聯(lián)素水平變化的疾病。三組入選者的年齡比較具有均衡性。

1.2方法

1.2.1樣本的采集和處理 采集空腹外周靜脈血3 mL，可用乙二胺四乙酸或肝素作為抗凝劑，標本采集后30 min內(nèi)于2～8 ℃離心15 min(1000×g)，或?qū)吮痉庞?20 ℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

1.2.2樣本測定 脂聯(lián)素測定嚴格按照試劑說明說操作，具體檢測流程：①加樣,分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00 μL，余孔分別加標準品或待測樣品100 μL，混勻，酶標板加上蓋，37 ℃反應(yīng)120 min。②棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100 μL，37 ℃，60 min。③溫育60 min后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1～2 min，每孔350 μL，甩干。④每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液)100 μL，37 ℃，60 min。⑤溫育60 min后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1～2 min，每孔350 μL，甩干。⑥依序每孔加底物溶液90 μL，37 ℃避光顯色。⑦依序每孔加終止溶液50 μL，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。⑧酶聯(lián)儀在450 nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后15 min內(nèi)進行檢測。⑨根據(jù)標準曲線計算各樣本血清脂聯(lián)素濃度，并將各組結(jié)果進行統(tǒng)計。

1.2.3CA15-3測定的基本操作步驟 ①樣品稀釋，將待測樣本做40倍稀釋(例：10 μL樣本加入到390 μL稀釋液中)。標準品無需稀釋。②加樣，分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?0 μL，余孔分別加入標準品或待測樣品40 μL，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或者覆膜，37 ℃反應(yīng)30 min。③棄去液體，洗滌5次，拍干。每孔加辣根過氧化物酶(HRP)標記的抗CA15-3抗體工作液100 μL，37 ℃反應(yīng)30 min。④溫育后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，拍干。⑤每孔加顯色工作液100 μL，37 ℃避光顯色，15 min。⑥每孔加終止溶液50 μL，終止反應(yīng)，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。⑦用酶聯(lián)儀在450 nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。

1.3陽性結(jié)果判定 實驗所用人脂聯(lián)素試劑盒訂購于美國ADL公司，其血漿平均水平為(8.9±1.5) mg/L,CA15-3試劑盒訂購于上海酶聯(lián)科技有限公司，其參考值為<28 U/mL。

2 結(jié) 果

2.1乳腺癌組、乳腺良性病變組及正常對照組血清脂聯(lián)素和CA15-3檢測結(jié)果 乳腺癌組血清脂聯(lián)素水平最低，與乳腺良性疾病組及正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);乳腺良性疾病組及正常對照組血清脂聯(lián)素水平相近，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；乳腺癌組患者CA15-3水平明顯高于乳腺良性疾病組及正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；乳腺良性疾病組與正常對照組CA15-3水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

表1 乳腺癌組、乳腺良性病變組及正常對照組血清脂聯(lián)素、CA15-3水平 (μg/L)

a：與乳腺良性病變組比較，P<0.05；b：與正常對照組比較，P>0.05

2.2血清脂聯(lián)素、CA15-3單獨及聯(lián)合檢測對乳腺癌的檢出率 脂聯(lián)素聯(lián)合CA15-3檢測對乳腺癌的檢出率為94.4%，高于單獨應(yīng)用脂聯(lián)素或CA15-3對乳腺癌的檢出率，三者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(表2)。

表2 血清脂聯(lián)素與CA15-3聯(lián)合檢測對乳腺癌的檢出率結(jié)果對比

a：與單獨應(yīng)用CA15-3檢測比較，P<0.05；b：與單獨應(yīng)用脂聯(lián)素檢測比較，P>0.05

3 討 論

脂聯(lián)素在血漿中含量豐富,約占血漿蛋白總量的0.01%[8]，它有兩種受體:AdipoR1和AdipoR2,均已被克隆[9]。脂聯(lián)素是迄今為止所發(fā)現(xiàn)的唯一與肥胖呈負相關(guān)的細胞因子,有降低三酰甘油和血糖水平、改善胰島素抵抗、保護心血管內(nèi)皮功能和抑制動脈粥樣硬化形成等作用[10-11]。Chen等[12]分析了乳腺癌患者和健康者各100例的血清脂聯(lián)素水平及各種臨床病理參數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)低血清脂聯(lián)素水平與乳腺癌高風(fēng)險相關(guān)。許多實驗研究也表明[13]，循環(huán)血內(nèi)的低脂聯(lián)素水平是使乳腺癌發(fā)病風(fēng)險增加的一個獨立危險因素。本研究檢測血清脂聯(lián)素水平結(jié)果顯示，乳腺良性病變血清中也有一定水平的脂聯(lián)素，但與正常對照組血清脂聯(lián)素水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；乳腺癌組血清脂聯(lián)素水平明顯低于乳腺良性病變組及正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。本研究結(jié)果中乳腺癌患者血清脂聯(lián)素水平顯著低于對照組，說明脂聯(lián)素水平測定對乳腺癌的診斷有幫助，提示乳腺癌的發(fā)生與脂聯(lián)素水平降低引起的機體保護作用減弱有關(guān)。血漿低水平脂聯(lián)素可能是腫瘤發(fā)生的一個新的危險因子，它一定程度上成為肥胖和腫瘤之間的橋梁并參與乳腺癌的發(fā)生。

CA15-3是目前公認的對乳腺癌較為特異的腫瘤標志物，在乳腺癌中過度表達，與病理類型無關(guān)，與臨床分期、腫瘤大小、腋窩淋巴結(jié)狀況及雌類受體相關(guān)[14]。本研究結(jié)果表明，分別單項檢測乳腺癌脂聯(lián)素與CA15-3的對乳腺癌的檢出率均不太理想，而脂聯(lián)素和CA15-3兩者聯(lián)合檢測對乳腺癌的檢出率顯著提高。這充分說明脂聯(lián)素和CA15-3聯(lián)合檢測對乳腺癌的早期診斷有較高的臨床價值。

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