曾凡杞，樊 超，張志云，黃勇武

(1.深圳市光明新區(qū)人民醫(yī)院皮膚科，518106 廣東 深圳； 2.深圳市寶安區(qū)福永人民醫(yī)院皮膚科，518103 廣東 深圳)

瘢痕疙瘩是一種以細(xì)胞外基質(zhì)尤其是Ⅰ、Ⅲ型膠原的合成和降解失衡，導(dǎo)致膠原過度沉積于真皮層的膠原性疾病，其發(fā)病可能與遺傳、種族以及免疫等因素有關(guān)[1]。熱激蛋白47(heat shock protein 47,HSP47)是一種促進(jìn)膠原合成的特異性伴侶分子，在腎小球硬化、腎小管間質(zhì)纖維化中存在高表達(dá)，其可能在腎臟纖維化進(jìn)程中發(fā)揮了重要作用[2]。HSP47在瘢痕疙瘩組織中的表達(dá)與膠原的過度沉積是否相關(guān)？本研究從這個(gè)角度研究瘢痕疙瘩的發(fā)病機(jī)制，從而為瘢痕疙瘩的治療提供新思路。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2011年1月至2012年12月到深圳市光明新區(qū)人民醫(yī)院就診的瘢痕疙瘩患者17例，作為瘢痕疙瘩皮損組，其中男7例、女10例，年齡17～40(21.5±3.0)歲；選擇同期在泌尿外科門診行包皮環(huán)切術(shù)的11例患者作為正常皮膚對(duì)照組，年齡8～35(15.0±2.0)歲。所有患者均無系統(tǒng)性疾病，術(shù)前未全身使用免疫抑制劑，未進(jìn)行局部注射治療，局部無潰瘍等。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有參加試驗(yàn)的患者知情同意，并簽知情同意書。

1.2試劑 鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)試劑盒、HSP47、Ⅰ型及Ⅲ型膠原鼠抗人單克隆抗體均購(gòu)于北京中山生物試劑公司。

1.3方法 所有標(biāo)本取材后即固定在10%甲醛溶液中，常規(guī)石蠟包埋備用。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HSP47以及Ⅰ、Ⅲ型膠原的表達(dá)：常規(guī)制備石蠟連續(xù)切片，按照免疫組織化學(xué)法試劑盒的說明書進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，中性樹膠封片。每批標(biāo)本均設(shè)陽性對(duì)照，用生理鹽水代替一抗設(shè)空白對(duì)照，成纖維細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)淡到棕褐色顆粒為陽性。按照盲法的原則對(duì)陽性結(jié)果進(jìn)行半定量分析，隨機(jī)選取每張切片的5個(gè)陽性表達(dá)區(qū)視野(×200)計(jì)算其灰度值，以5個(gè)視野的平均灰度值作為該切片的灰度值，灰度值越低表示組織中抗原的含量越高。

2 結(jié) 果

2.1HSP47、Ⅰ型以及Ⅲ型膠原的表達(dá) 瘢痕疙瘩皮損組中成纖維細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中可見大量HSP47陽性顆粒的表達(dá)(圖1，見封三)，正常皮膚對(duì)照組中真皮層成纖維細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中少或不表達(dá)(圖2，見封三)，瘢痕疙瘩皮損組的灰度值顯著低于正常皮膚對(duì)照組(P<0.01)；瘢痕疙瘩皮損組中，Ⅰ型膠原纖維粗大、致密、條索、平行分布(圖3，見封三)，而Ⅲ型膠原纖細(xì)、稀疏，量少(圖4，見封三)，正常皮膚對(duì)照組中Ⅰ、Ⅲ型膠原的表達(dá)都較少或較弱，瘢痕疙瘩皮損組Ⅰ、Ⅲ型膠原的灰度值顯著低于正常皮膚對(duì)照組(P<0.05)(表1)。

表1 瘢痕疙瘩皮損組及正常皮膚對(duì)照組中HSP47、Ⅰ型、Ⅲ型膠原的表達(dá)情況

2.2HSP47與Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)的相關(guān)性 在瘢痕疙瘩組中HSP47的灰度值與Ⅰ型及Ⅲ型膠原的灰度值呈顯著正相關(guān)(r=0.51，0.81，P<0.01)。

3 討 論

瘢痕疙瘩是一種膠原沉積性疾病，其發(fā)病與種族、遺傳、細(xì)胞因子以及相關(guān)凋亡基因有關(guān)，細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生與失衡是瘢痕疙瘩形成的重要原因之一。HSP47參與了膠原的合成，是膠原成熟的必要條件[3]。目前研究發(fā)現(xiàn)，HSP47在多種纖維化疾病中的表達(dá)都是升高的[4]。在肝纖維化者的肝組織中，HSP47的表達(dá)顯著升高，且伴隨膠原沉積量的增加而升高[5]。在腎小球腎炎大鼠模型中用HSP47干擾小RNA干擾HSP47的表達(dá)可以有效減少膠原的合成，減輕腎纖維化程度[2]。

本研究結(jié)果顯示，HSP47、Ⅰ及Ⅲ型膠原在瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中的表達(dá)量顯著高于正常皮膚對(duì)照組(t=9.5、8.5、3.1，P<0.05)，在瘢痕疙瘩組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原的比例失衡可能與HSP47基因優(yōu)先作用Ⅰ型膠原有關(guān)，從而使Ⅰ型膠原的合成多于Ⅲ型膠原。由此推斷，在瘢痕疙瘩形成的過程中，由于某種應(yīng)激因素(如外傷等)刺激致使HSP47基因激活，導(dǎo)致HSP47基因高水平轉(zhuǎn)錄以及HSP47蛋白的合成增加，致使膠原的分泌量顯著高于正常水平，膠原過度沉積最終形成瘢痕疙瘩。本研究發(fā)現(xiàn)，HSP47基因的表達(dá)與Ⅰ、Ⅲ型膠原的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.49，0.79，P<0.01)，說明HSP47基因的過度表達(dá)可明顯加重瘢痕疙瘩的纖維化程度，這與HSP47在腎纖維化中的作用相一致[4]。金培生等[6]利用HSP47、干擾小RNA重組質(zhì)粒對(duì)瘢痕疙瘩裸鼠模型進(jìn)行轉(zhuǎn)染，選擇性沉默HSP47基因的表達(dá)，HSP47、信使RNA及Ⅰ型膠原信使RNA的表達(dá)明顯下降，瘢痕疙瘩的膠原含量也明顯下降，瘢痕疙瘩的體積縮小，也說明了HSP47在瘢痕疙瘩形成的過程中發(fā)揮了重要作用。綜上所述，HSP47基因的表達(dá)促進(jìn)Ⅰ、Ⅲ型膠原的合成，抑制HSP47基因的表達(dá)可以有效阻抑Ⅰ、Ⅲ型膠原的合成，其為瘢痕疙瘩的治療提供了新的線索。

[1] 郭雷洋.瘢痕疙瘩發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中國(guó)美容醫(yī)學(xué),2012,21(11):1674-1677.

[2] 肖紅波,劉瑞洪，凌光輝.熱休克蛋白47在腎臟纖維化中的作用及機(jī)制研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2009,10(12)：1109-111.

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[4] 張軍,官浩,胡大海.熱休克蛋白47與纖維化相關(guān)疾病研究進(jìn)展[J].中華燒傷雜志,2009,25(1):75-78.

[5] Brown KE,Broadhurst KA,Mathahs MM,etal.Expression of HSP47,a collagen-specific chaperone,in normal and diseased human liver[J].Lab Invest,2005,85(6):789-797.

[6] 金培生,陳俊杰,岑瑛,等.熱休克蛋白47重組質(zhì)粒對(duì)病理性瘢痕的體內(nèi)干預(yù)研究[J].中華整形外科雜志,2009,25(5):377-380.