楊正偉，向 宇，郭 洋，彭 彬，白桂芹，董興堂，黃小麗，馬 利，陳 靜，杜 馨，張思航

(川北醫(yī)學院形態(tài)學研究所，四川 南充 637000)

1 經驗

2013年4月，我們擬切七八十個甲基丙烯酸樹脂(2-hydroxyethyl methacrylate，德國Leica生產)包埋的大鼠眼球組織塊，這些組織塊已包埋2年多，切片時遇到嚴重問題：組織塊的脆性都大，一切片就碎裂，無法切得完好的組織切片。我們思考很久后想出一個辦法：先把樹脂塊放入濕盒過夜(半天至一天)，即在一密閉的盒子里盛水，水面之上放一有孔的隔層板，板上放樹脂塊，然后再切片。果然有效，所有的組織塊就這樣都切得完好的切片(厚度15 μm)。

2014年2月，我們要切二三百個石蠟(德國Leica生產)包埋的金黃地鼠胰腺和肝臟組織塊。它們已包埋3年多，且包埋后不久就切過(切片厚度7 μm)，當時切片完全沒問題。但這次再切這些組織塊時問題嚴重，一切就粉碎。基于上面的經歷，我們試著把石蠟塊放入濕盒三天左右，且把石蠟浸在水里，結果也出乎意料的好：都切得完好的切片(厚度5 μm)。

最近，我們又要切五六十個石蠟包埋的大鼠腎臟組織塊。它們已包埋6年半，2年半前曾切過(切片厚度7 μm)，當時切片問題不大，部分組織塊雖有些脆，但向石蠟塊切面哈氣(用口吹氣)之后，還是切得不錯的切片。但這次切片(厚度10 μm)問題較大，組織碎裂嚴重。依樣畫葫蘆，我們把石蠟塊放入濕盒幾天，結果也避免或減少了切片碎裂。

2 討論

我們的上述經驗表明，組織塊放置或保存(一般放在切片盒里，注意勿讓組織塊受壓變形)幾年后會變干、變脆。因此切片時組織易碎裂，難以切得完整的組織切片。把組織塊放在濕盒里濕潤過夜或幾天的方法，可部分或完全解決這個問題。

筆者所在實驗室長期從事形態(tài)定量研究，經常要成批的包埋(尤其是用甲基丙烯酸樹脂)組織塊并制作質量要求高的切片[1]，但很少遇到上述嚴重問題?？赡苁且驗槲覀兺ǔＧ械氖恰靶迈r”組織塊，即包埋后幾個月之內就要切片。這說明，組織變脆可能更常見于“陳舊”的組織塊。難怪文獻總結的石蠟切片的十多個常見問題中，也沒有包括這個問題[2]。

不過，組織脆性增加、切片易碎裂的問題，實踐中可能并非不常見，也未必只見于放久了的組織塊。也許，由于問題不那么嚴重，或由于同時包埋、同時切片的組織塊少，對這個問題不易引起重視。我們常見或常聞切片中這樣那樣的小竅門，例如哈氣(上述)，用冰塊冰或用濕布擦(濕化)石蠟塊切面，把石蠟塊切面浸泡在溫水里三五分鐘[3]，甚至把整個石蠟塊冰凍之后再切片。如這些方法有效，它實際上說明組織塊有些干燥或變脆了，但是人們可能多半會把這個問題歸咎于脫水、透明、浸蠟或包埋過程[4]，不會想到用濕盒來濕潤整個組織塊的解決辦法。最近，我們用石蠟包埋了六七十個大鼠脊髓組織塊，包埋后二三個月之內就切片，每塊都要切上百張連續(xù)切片(厚度14 μm)。我們后來發(fā)現，為保證連續(xù)切片的質量，切片前先把石蠟塊放入濕盒3～7 d的方法很有幫助。

話又說回來，濕潤組織塊雖有利于切片，但未必有利于組織塊的長期保存。從常識講，干燥才利于組織本身的保存。事實上，筆者之一(楊正偉)一二十年前保存甲基丙烯酸樹脂包埋的組織塊，就要在盒子里放入干燥硅膠顆粒，切片前一二天才把組織塊拿出來。此外，組織處理、包埋介質甚至切片刀等方面的問題也可能引起切片時的組織碎裂，組織的質地以及組織塊的大小想必也與切片脆裂有關，這樣的問題就未必能用濕潤組織塊的方法很好或有效的解決。例如，我們最近在切一些組織塊時又注意到，濕潤石蠟塊使切片好切了，但換用更鋒利的刀片才使蠟帶更成形——更易切取連續(xù)切片。

【參考文獻】

[1]楊正偉.生物組織形態(tài)定量研究基本工具:實用體視學方法[M].北京:科學出版社,2012.

[2]趙 熒,唐軍民.組織切片技術[A].見:李繼承(主編).組織學與胚胎學實驗技術[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2010：13-20.

[3]馬新峰,趙利萍.影響免疫器官石蠟切片質量的因素分析[J].河南職工醫(yī)學院學報,2007,19(6):586-587.

[4]侯春春，徐 水.淺析影響石蠟切片質量的關鍵因素[J].中國農學通報,2009,25(23):94-98.