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(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦科，山東 青島 266003)

卵巢癌發(fā)現(xiàn)時(shí)多為晚期，死亡率位居?jì)D科惡性腫瘤首位。分化抑制因子-1(Id-1)能阻礙DNA與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，調(diào)控細(xì)胞增殖分化[1]，與腫瘤血管生成和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及侵襲密切相關(guān)。血紅素加氧酶(HO)作為一種誘導(dǎo)型蛋白存在于哺乳動(dòng)物體內(nèi)，當(dāng)機(jī)體器官受損時(shí)誘導(dǎo)HO-1表達(dá)發(fā)揮抗氧化作用[2],HO-1過表達(dá)不僅能刺激腫瘤細(xì)胞生長,增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞抗氧化及抗凋亡能力,而且能促進(jìn)腫瘤血管生長和腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移等。本文采用免疫組化方法檢測(cè)了Id-1和HO-1在卵巢上皮癌、卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織表達(dá)情況，探討兩種因子在卵巢上皮癌發(fā)生、發(fā)展中可能的作用。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本及其來源

2010年1月—2012年2月，收集我院婦科病人的手術(shù)組織標(biāo)本，其中卵巢上皮癌組織標(biāo)本50例(均行卵巢癌腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)，術(shù)前均未行化療或放療,術(shù)后病理確診為卵巢上皮癌),良性卵巢腫瘤標(biāo)本45例及正常卵巢組織標(biāo)本15例。卵巢癌病人年齡27～73歲，其中≥50歲29例，<50歲21例；高中分化19例，低分化31例；腫瘤直徑≥5 cm者31例，<5 cm者19例；術(shù)前有大量腹水者33例,無或少量腹水者17例；術(shù)前CA125水平≥200 kU/L者42例，<200 kU/L者8例；漿液性腺癌41例，黏液性腺癌6例，透明細(xì)胞癌3例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性者30例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性者20例；I～Ⅱ期22例，Ⅲ～Ⅳ期28例(按FIGO 2000年卵巢癌分期標(biāo)準(zhǔn))。對(duì)照組分別為因卵巢腫瘤行患側(cè)卵巢切除術(shù)的病人(術(shù)后病理為良性卵巢腫瘤)和因子宮肌瘤行全子宮加雙附件切除術(shù)的病人(術(shù)后病理均為子宮平滑肌瘤，卵巢組織無異常)。

1.2 主要試劑

Id-1及HO-1單抗購于北京博奧森生物技術(shù)有限公司，SP試劑盒和DNA顯色試劑盒均購于北京 中杉金橋生物技術(shù)有限公司，磷酸鹽緩沖液(PBS)購自上海研生生物技術(shù)有限公司。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)和方法

Id-1及HO-1的檢測(cè)均采用免疫組織化學(xué)SP法,主要步驟按照試劑盒說明書操作。試驗(yàn)以已知Id-1及HO-1陽性切片作為陽性對(duì)照，以PBS替代一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判定

Id-1陽性表達(dá)主要在細(xì)胞質(zhì)，部分在細(xì)胞核中,HO-1陽性表達(dá)位于細(xì)胞核。隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)100個(gè)以上腫瘤細(xì)胞。根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞染色強(qiáng)度進(jìn)行判斷。陽性細(xì)胞數(shù)<5%，計(jì)0分；陽性細(xì)胞數(shù)5%～25%，計(jì)1分；陽性細(xì)胞數(shù)26%～50%，計(jì)2分；陽性細(xì)胞數(shù)51%～75%，計(jì)3分；陽性細(xì)胞數(shù)>75%，計(jì)4分。根據(jù)陽性著色強(qiáng)度不同依次計(jì)0、1、2、3分(不著色為0分，淺棕色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分)，將每張切片的兩項(xiàng)分?jǐn)?shù)累計(jì)，0分為陰性，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為陽性()，5～6分為強(qiáng)陽性()。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行χ2檢驗(yàn)或Fisher精確概率檢驗(yàn)。Id-1及HO-1的關(guān)系采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 各組Id-1及HO-1的表達(dá)

Id-1在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均有表達(dá)，卵巢上皮癌、良性卵巢腫瘤及正常卵巢組織中Id-1陽性表達(dá)率分別為88.0%、48.9%與13.3%。HO-1在細(xì)胞核中表達(dá)，卵巢上皮癌、良性卵巢腫瘤及正常卵巢組織中HO-1陽性表達(dá)率分別為76.0%、44.4%和0。Id-1和HO-1在正常卵巢、卵巢良性腫瘤及卵巢上皮癌組織中的表達(dá)差異均有顯著性(χ2=6.838～31.097,P<0.05)。

2.2 Id-1及HO-1表達(dá)與卵巢上皮癌病人臨床病理特征的關(guān)系

Id-1和HO-1的表達(dá)與病人年齡、腫瘤大小、臨床分期和有無腹水等均無關(guān)(P>0.05)，而與術(shù)前的CA125水平、病理分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(χ2=4.678～7.739,P<0.05)。見表1。

2.3 卵巢上皮癌組織中Id-1及HO-1表達(dá)相關(guān)性

在50例卵巢上皮癌組織中，Id-1及HO-1表達(dá)均陽性者29例，均陰性者9例，兩者表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.390,P<0.05)。

表1Id-1和HO-1表達(dá)與卵巢上皮癌病人臨床病理特征的關(guān)系(例)

臨床病理因素nId-1+-χ2PHO-1+-χ2P年齡(歲) ≥5029263236 <50211830.1790.6721560.4150.520腫瘤大小(d/cm) ≥53128162213 <5191680.4170.5191671.1330.287腹水 大量332910257 無或少量171550.0010.9711340.0030.955術(shù)前CA125(z/kU·L-1) ≥200423910356 <2008555.8640.015347.7390.005組織學(xué)類型 漿液性腺癌4125163110 其他9630.1010.750720.0190.890臨床分期 Ⅰ～Ⅱ22199154 Ⅲ～Ⅳ2825100.1000.7522331.3170.251病理分級(jí) 中高分化19149115 低分化3130115.9740.0152785.5070.019淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無201512129 有302995.3350.0212654.6780.031

3 討 論

3.1 Id-1與卵巢上皮癌的關(guān)系

Id-1是Id蛋白家族成員，既參與正常細(xì)胞分化調(diào)控，還影響腫瘤細(xì)胞分化，主要通過促進(jìn)腫瘤血管生成以及浸潤轉(zhuǎn)移,調(diào)控細(xì)胞定向分化，抑制細(xì)胞凋亡等發(fā)揮作用[3]。腫瘤的血管生成受多種細(xì)胞因子調(diào)控，其中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)是腫瘤生長及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的必要條件。LING等[4]在前列腺癌細(xì)胞中通過RNA干擾抑制Id-1的表達(dá)，結(jié)果顯示VEGF表達(dá)水平也明顯下降。最近研究顯示,在宮頸癌進(jìn)展中,Id-1可能是通過促進(jìn)腫瘤血管生成而促腫瘤生成的[5]。Id-1誘導(dǎo)的癌細(xì)胞增生可以通過抑制p53信號(hào)通路和活化NF-κB信號(hào)通路，下調(diào)caspase3的表達(dá)水平，阻止腫瘤細(xì)胞的凋亡[6]。還有研究結(jié)果顯示，Id-1過表達(dá)與EGFR表達(dá)增高有關(guān)，阻斷Id-1的表達(dá)可抑制卵巢癌細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移[7]。上述研究均證實(shí)，Id-1可有效促進(jìn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展。本文研究結(jié)果顯示，Id-1在卵巢癌組織中高表達(dá)。SCHINDL等[8]研究亦顯示，卵巢癌組織Id-1過表達(dá)，與本研究結(jié)果一致。同時(shí)本研究結(jié)果顯示，Id-1的表達(dá)與病人術(shù)前CA125水平、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理分級(jí)密切相關(guān)。這表明Id-1可能與卵巢上皮癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

3.2 HO-1與卵巢上皮癌的關(guān)系

HO-1對(duì)腫瘤細(xì)胞具有抗凋亡作用,可能是通過降低細(xì)胞內(nèi)促氧化劑濃度、增高膽紅素水平、提高CO生成來抑制細(xì)胞凋亡。HO-1與腫瘤的血管生成密切相關(guān)，而血管生成與腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)。主要表現(xiàn)在HO-1和VEGF之間的作用。在研究VEGF對(duì)HO-1的影響實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),在肺腺癌細(xì)胞中加入HO-1抑制劑鋅-原卟啉后,VEGF合成減少,血管生成被抑制，同時(shí)VEGF對(duì)HO-1合成有調(diào)節(jié)作用[9]。近期研究結(jié)果證實(shí),體外下調(diào)HO-1的表達(dá)可通過影響caspase3活性抑制人肝癌細(xì)胞的凋亡[10]。HO-1所具有的抗凋亡作用還可以通過Nrf2-ARE通路來實(shí)現(xiàn)。保肝藥物可激活Nrf2-ARE，通過抗氧化酶(如HO-1)抑制ROS的產(chǎn)生，對(duì)肝細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用[11-12]。總之，HO-1通過以上途徑促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。

本文的研究結(jié)果顯示，HO-1在卵巢癌組織中呈高表達(dá)，推測(cè)HO-1可能是卵巢癌形成的重要因素之一。同時(shí)本文的研究結(jié)果還顯示，HO-1陽性表達(dá)與病人術(shù)前CA125水平、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理分級(jí)密切相關(guān)。由此可見，腫瘤惡性程度越高，HO-1的表達(dá)水平越高。這表明HO-1可能與卵巢上皮癌的發(fā)生、進(jìn)展有關(guān)。

3.3 Id-1和HO-1之間的關(guān)系

本研究結(jié)果顯示，卵巢上皮癌組織中Id-1和HO-1的表達(dá)呈正相關(guān),即Id-1活化的腫瘤組織中存在HO-1的高水平表達(dá)。關(guān)于卵巢癌組織中Id-1和HO-1相關(guān)性研究,國內(nèi)外鮮有報(bào)道。本研究可推測(cè)卵巢癌形成及發(fā)展過程中,兩者具有協(xié)同作用,很可能存在VEGF、caspase3共同通路，但具體作用機(jī)制還需更深入的研究。這些研究可能成為卵巢癌治療的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

總之，Id-1和HO-1的表達(dá)水平與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān),為卵巢癌進(jìn)一步的研究和治療提供了新依據(jù)，有望作為卵巢上皮癌的診斷性標(biāo)志物，并為卵巢癌治療提供新思路。

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