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(青島大學(xué)附屬醫(yī)院婦科，山東 青島 266003)

子宮內(nèi)膜癌是女性常見的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，近年來在歐美國家其發(fā)病率逐漸升高并超過宮頸癌位居婦科惡性腫瘤的第一位[1]。真核起始因子-4A(eIF-4A)是DEAD盒蛋白家族中的一種ATP依賴的雙向非連續(xù)性的RNA解旋酶[2]。研究顯示，eIF-4A在某些腫瘤細胞系中過度表達，提示eIF-4A蛋白可作為惡性腫瘤的預(yù)測指標及抗癌治療的潛在靶點。而腫瘤發(fā)生的本質(zhì)為細胞失控性增殖，細胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)是細胞周期蛋白家族重要成員，在細胞由G1期進入S期的過程中起重要作用，其過表達與細胞異常轉(zhuǎn)化密切相關(guān)[3]。目前，國內(nèi)外關(guān)于eIF-4A與Cyclin D1在子宮內(nèi)膜癌組織表 達相關(guān)性的研究較少。本研究通過檢測子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中eIF-4A與Cyclin D1的表達，探討兩者與子宮內(nèi)膜樣腺癌生物學(xué)行為之間的相關(guān)性。

1 資料和方法

1.1 一般資料

子宮內(nèi)膜樣腺癌組織標本120例，均來自我院2010年1月—2012年12月行手術(shù)治療的病人，病人年齡37～64歲,中位年齡55歲。按FIGO(2009年)分期，Ⅰ期34例，Ⅱ期40例，Ⅲ-Ⅳ期46例；組織學(xué)分級：高分化癌48例，中分化癌34例，低分化癌38例；肌層浸潤深度<1/2者77例，肌層浸潤深度≥1/2者43例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者89例。所有病例均經(jīng)病理確診,術(shù)前均未經(jīng)任何治療,臨床資料完整。選擇同期因子宮肌瘤行全子宮切除術(shù)病人經(jīng)病理證實的正常子宮內(nèi)膜組織標本40例為對照。所有病人對本研究均知情同意。

1.2 試劑

羊抗人eIF-4A多克隆抗體、兔抗人Cyclin D1單克隆抗體、梯度蛋白標準均購自美國Santa Cruze公司，SP免疫組織化學(xué)試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組化染色方法

免疫組化染色嚴格按試劑盒說明書要求進行操作。所有標本均經(jīng)甲醛固定、石蠟包埋、4 μm厚連續(xù)切片。組織切片常規(guī)脫蠟，逐級乙醇入水，采用SP法檢測eIF-4A和Cyclin D1蛋白的表達。羊抗人eIF-4A多克隆抗體、兔抗人Cyclin D1單克隆抗體稀釋度均為1∶50，采用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.4 結(jié)果判定

染色結(jié)果由兩位病理專家根據(jù)顯色強度和染色細胞百分率進行半定量判定。eIF-4A蛋白表達定位于細胞質(zhì)，Cyclin D1蛋白表達定位于細胞核。按顯色強度計分：不著色為0分，著淡黃色為1分，著棕黃色為2分，著棕褐色或者出現(xiàn)粗大的棕褐色顆粒為3分。按染色細胞百分率計分：無染色細胞為0分，1%～20%為1分，21%～50%為2分，>50%為3分。兩者評分相加為最后得分，0～3分為陰性表達，≥4分為陽性表達。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析。采用四格表χ2檢驗及兩分類變量關(guān)聯(lián)性分析進行數(shù)據(jù)處理，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 eIF-4A和Cyclin D1在正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達

eIF-4A蛋白定位于細胞質(zhì)，呈棕色顆粒狀，其在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的陽性表達率為76.7%(92/120)，在正常子宮內(nèi)膜組織中的陽性表達率為20.0%(8/40)。Cyclin D1蛋白定位于細胞核中，其在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的陽性表達率為79.3%(95/120)，在正常子宮內(nèi)膜組織中的陽性表達率為17.5%(7/40)。子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中eIF-4A和Cyclin D1蛋白的陽性表達率明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織(χ2=38.72、46.73，P<0.01)。見圖1。

A：Cyclin D1在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達；B：Cyclin D1在正常子宮內(nèi)膜組織中不表達；C：eIF-4A在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達；D：eIF-4A在正常子宮內(nèi)膜組織中不表達。

圖1eIF-4A和CyclinD1在正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達

2.2 eIF-4A和Cyclin D1的表達與子宮內(nèi)膜樣腺癌臨床病理特征的關(guān)系

eIF-4A蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達與腫瘤的臨床病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度有關(guān)(χ2=4.36～13.36，P<0.05)，而與腫瘤的肌層浸潤深度無關(guān)(P>0.05)；Cyclin D1蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達與腫瘤的組織分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(χ2=24.73、5.24，P<0.05)，而與病人的臨床病理分期及腫瘤肌層浸潤深度無關(guān)(P>0.05)。見表1。

2.3 子宮內(nèi)膜樣腺癌組織eIF-4A和Cyclin D1表達的相關(guān)性

eIF-4A陽性表達92例病人中有85例Cyclin D1陽性表達，eIF-4A陰性表達的28例子宮內(nèi)膜樣腺癌病人中僅10例Cyclin D1陽性表達，子宮內(nèi)膜樣腺癌組織eIF-4A與Cyclin D1的表達呈顯著正相關(guān)(r=0.824，P<0.01)。

3 討 論

腫瘤發(fā)病的本質(zhì)在于細胞周期調(diào)控紊亂，細胞呈現(xiàn)失控性生長和凋亡減少[4]。CCND1 基因編碼產(chǎn)物Cyclin D1是一種關(guān)鍵的細胞周期調(diào)控蛋白，它可促進細胞由G1期向S期轉(zhuǎn)化，在細胞周期G1-S期轉(zhuǎn)換中具有重要的調(diào)節(jié)作用,在多種腫瘤中存在過度表達[5-6]。在腫瘤發(fā)生發(fā)展的過程中，惡性組織的增生需要大量蛋白質(zhì)的合成，許多與腫瘤相關(guān) 的蛋白異常表達，這些蛋白在翻譯水平上可能存在共同的調(diào)控原因。eIF-4A是一種ATP依賴性RNA結(jié)合蛋白、RNA依賴性ATP酶及RNA解旋酶，它在真核翻譯起始進程中發(fā)揮重要作用。

表1eIF-4A、CyclinD1在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織表達及其與臨床病理特征的關(guān)系(例(χ/%))

臨床病理特征neIF-4A陽性χ2PCyclin D1陽性χ2P病理分期 Ⅰ3420(58.8)26(66.5) Ⅱ4028(70.0)31(77.5) Ⅲ-Ⅳ4644(95.7)16.31<0.0538(82.6)0.55>0.05組織學(xué)分級 高分化4830(62.5)30(62.5) 中分化3426(76.5)27(79.4) 低分化3836(94.7)12.32<0.0538(100)24.73<0.05肌層浸潤 <1/27758(75.3)58(75.3) ≥1/24334(79.1)0.22>0.0537(86.0)1.33>0.05淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有3128(90.3)29(93.5) 無8964(71.9)4.36<0.0566(74.2)5.24<0.05

本文結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜樣腺癌組織eIF-4A蛋白表達明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織，提示eIF-4A在子宮內(nèi)膜惡性轉(zhuǎn)化過程中可能起一定作用。結(jié)合分子生物學(xué)機制，考慮eIF-4A可能通過被eIF-4E帶到mRNA的5′端，讓eIF-4A發(fā)揮解旋酶活性從而打開mRNA 5′端非翻譯區(qū)的二級和三級結(jié)構(gòu)，以使核糖體附著更容易，同時允許核糖體進行起始密碼子掃描，啟動翻譯過程[7]。目前研究顯示，由eIF-4A參與構(gòu)成的eIF-4F復(fù)合體與帽結(jié)構(gòu)的親和力高于游離eIF-4E與帽結(jié)構(gòu)的親和力的10倍，從而加速翻譯過程[8]。

本文結(jié)果顯示，eIF-4A蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達與腫瘤的臨床病理分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示eIF-4A可能參與了子宮內(nèi)膜樣腺癌的進展及轉(zhuǎn)移過程，或者說eIF-4A表達高的子宮內(nèi)膜樣腺癌更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、進展更快。由于eIF-4A在腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中起重要作用，可將其作為臨床預(yù)測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的指標，指導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌的治療。高分化子宮內(nèi)膜樣腺癌組織eIF-4A蛋白的表達低于低分化癌，提示eIF-4A蛋白與癌細胞的分化不良可能存在一定的相關(guān)性；但是中分化子宮內(nèi)膜樣腺癌與高分化癌eIF-4A表達無統(tǒng)計學(xué)差異，表明細胞分化呈連續(xù)性，體現(xiàn)一個由量變到質(zhì)變的過程。

目前研究認為，當(dāng)Cyclin D1 表達失控時，則將引起細胞增殖失調(diào)，進而導(dǎo)致腫瘤形成[9]。本文結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜樣腺癌組織Cyclin D1的表達明 顯高于正常子宮內(nèi)膜，提示Cyclin D1與子宮內(nèi)膜的失控性增長、惡性轉(zhuǎn)化可能有關(guān)。進一步分析結(jié)果顯示，Cyclin D1與子宮內(nèi)膜樣腺癌的組織分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中Cyclin D1的過度表達可能預(yù)示腫瘤有較高的侵襲性、容易發(fā)生轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良。但子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中Cyclin D1的表達與腫瘤的臨床病理分期及肌層浸潤深度無關(guān)，考慮在疾病的發(fā)展進程中，細胞一旦啟動惡性轉(zhuǎn)化可能存在一定的閾值。

許多研究結(jié)果表明，細胞生長增殖與蛋白質(zhì)翻譯過程密切相關(guān)，但這種聯(lián)系的分子基礎(chǔ)尚不明確。Cyclin D1可與細胞周期蛋白依賴激酶(CDK)結(jié)合形成特異性底物控制細胞周期進程。而eIF-4A與A型CDK(CDKA)經(jīng)免疫沉淀法結(jié)合，其復(fù)合物在活化增殖的細胞中含量最多[10]。Cyclin D1通過控制細胞G1-S期的進程而控制細胞增生，其過度表達與人類腫瘤密切相關(guān)[11]。而eIF-4A解旋酶活性在基因翻譯起始進程中發(fā)揮重要的作用——控制RNA翻譯為蛋白質(zhì)。Cyclin D1和eIF-4A在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生中是否起協(xié)同作用呢？本研究結(jié)果顯示，Cyclin D1與eIF-4A在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織表達呈顯著正相關(guān)，提示腫瘤細胞的翻譯起始過程與細胞有絲分裂之間可能存在密切聯(lián)系，子宮內(nèi)膜癌組織中eIF-4A高表達可導(dǎo)致Cyclin D1表達水平增高，而eIF-4A對Cyclin D1表達起調(diào)控作用。

總之，在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展過程中，eIF-4A對Cyclin D1表達可能起調(diào)控作用，兩者有望成為預(yù)測子宮內(nèi)膜癌惡性程度的重要生物學(xué)指標，指導(dǎo)臨床治療方案的選擇。

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