，，

(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院腫瘤科，山東 青島 266042)

乳癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，在我國(guó)發(fā)病率逐年升高，且呈年輕化趨勢(shì)。BRYAN等[1]于2006年首次明確提出三陰性乳癌(TNBC)的概念，即雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人表皮生長(zhǎng)因子受體(HER-2)均為陰性的一種乳癌亞型。這類乳癌具有發(fā)病年齡早、侵襲程度高、容易局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)，不能從內(nèi)分泌及靶向治療中獲益，病人5年生存率低，預(yù)后較差。近年來，雄激素受體(AR)、增殖細(xì)胞核抗原(Ki-67)在乳癌發(fā)生發(fā)展中的作用受到廣泛關(guān)注，但對(duì)其預(yù)后意義仍不十分明確。本文旨在探討AR、Ki-67在TNBC中的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2011年1月—2012年12月，我院行保乳根治術(shù)或改良根治術(shù)的乳癌病人共120例，病理類型均為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌。其中經(jīng)術(shù)后病理及免疫組化診斷為TNBC的病人60例，均為女性，年齡34～79歲，平均52歲，術(shù)前均未行新輔助放化療及內(nèi)分泌治療。非三陰性乳癌(NTNBC)病人60例，均為女性，年齡35～73歲，平均50歲，ER、PR、HER-2中至少有一項(xiàng)指標(biāo)為陽性。均為完整石蠟包埋標(biāo)本，所有病理診斷及組織學(xué)分級(jí)均至少由兩名中級(jí)以上職稱病理醫(yī)生確診。

1.2 免疫組化檢測(cè)及結(jié)果判定

所有試劑均購(gòu)自北京中杉金橋公司。應(yīng)用免疫組化S-P二步染色法檢測(cè)乳癌組織中AR、Ki-67的表達(dá)，參照試劑盒說明書進(jìn)行操作，并選取已知陽性組織切片作為陽性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。①AR結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)，無陽性細(xì)胞或陽性細(xì)胞數(shù)<10%為(-)；陽性細(xì)胞數(shù)10%～25%為(+)；陽性細(xì)胞數(shù)26%～50%為()；陽性細(xì)胞數(shù)>50%為()。以(-)為陰性、(+)、()及()為陽性進(jìn)行研究。②Ki-67結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：以腫瘤細(xì)胞核棕黃染色為陽性表達(dá)，無陽性細(xì)胞或陽性細(xì)胞數(shù)<5%為(-)；陽性細(xì)胞數(shù)6%～25%為(+)；陽性細(xì)胞數(shù)26%～50%為()；陽性細(xì)胞數(shù)>50%為()。以(-)及(+)為陰性、()及()為陽性進(jìn)行研究。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 AR表達(dá)

AR在TNBC中的陽性表達(dá)率為26.67%(16/60)，在NTNBC中的陽性表達(dá)為80.00%(48/60)，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=34.286,P<0.01)。TNBC病人AR表達(dá)與體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及絕經(jīng)狀態(tài)有關(guān)(χ2=4.972～10.774,P<0.05)，與年齡、腫瘤大小無關(guān)(P>0.05)。見表1。

2.2 Ki-67表達(dá)

Ki-67在TNBC組織中的陽性表達(dá)率為71.67%(43/60)，在NTNBC組織中的陽性表達(dá)率為26.67%(16/60)，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=24.307,P<0.01)。TNBC病人Ki-67表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分級(jí)有關(guān)(χ2=4.213、9.492,P<0.05)，與年齡、腫瘤大小及BMI無關(guān)(P>0.05)。見表2。

2.3 TNBC病人AR與Ki-67表達(dá)的關(guān)系

TNBC病人AR與Ki-67表達(dá)存在正相關(guān)(r=0.246，P<0.05)。見表3。

3 討 論

乳癌是一群異質(zhì)性腫瘤，其生物學(xué)行為、對(duì)治療的反應(yīng)及轉(zhuǎn)歸都與其他腫瘤不同，并表現(xiàn)為激素依賴性。多項(xiàng)研究表明，乳癌發(fā)病率的增加與長(zhǎng)期暴露在較高的性激素，尤其是雌激素的環(huán)境下有關(guān)。在生物學(xué)指標(biāo)中ER、PR、HER-2是比較有價(jià)值的可以預(yù)測(cè)治療反應(yīng)的指標(biāo)，ER、PR也可作為乳癌的獨(dú)立預(yù)后因子。TNBC作為乳癌的一種特殊亞型，其發(fā)病年齡早、侵襲性高、易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、生存率低且缺乏有效的治療手段，不能從內(nèi)分泌及靶向治療中獲益[2]。

表1 TNBC病人AR表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(例)

表2 TNBC病人Ki-67表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(例)

表3 TNBC病人AR與Ki-67表達(dá)的關(guān)系(例)

然而，值得注意的是，雄激素作為性激素的一種，廣泛存在于人體，特別是絕經(jīng)后女性，雌激素大量減少，而雄激素水平?jīng)]有明顯變化，或者僅有少量下降。雄激素在一般情況下與靶器官上的AR結(jié)合后才能發(fā)揮作用，雌激素在誘導(dǎo)乳癌中是主要致癌因子，而研究顯示AR及其配體雄激素在乳癌的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用[3]。雄激素可直接或與雌激素協(xié)同作用刺激乳癌細(xì)胞的增生，也可轉(zhuǎn)化為雌激素而發(fā)揮作用。AR是一種配體依賴性反式轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白，在正常細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞均有表達(dá)，主要存在于靶細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)。AR在TNBC中具有一定的表達(dá)率[4]。目前相關(guān)文獻(xiàn)表明，AR在乳癌中的表達(dá)率為35%～90%[5]。

本文結(jié)果顯示，AR在TNBC中低表達(dá)，與多數(shù)研究結(jié)果一致。TNBC病人AR的表達(dá)與病人的年齡、組織學(xué)分級(jí)及腫瘤大小無關(guān)。AR的表達(dá)與絕經(jīng)狀態(tài)有關(guān)，絕經(jīng)后的TNBC病人AR表達(dá)率更高。AR的表達(dá)與BMI有關(guān)，在TNBC病人中肥胖者的AR陽性表達(dá)率更高。肥胖病人體內(nèi)脂肪能促進(jìn)雄烯二醇轉(zhuǎn)化為雌激素，導(dǎo)致血液中游離的雌激素水平增高，從而刺激TNBC癌細(xì)胞的增生。同時(shí)，TNBC病人中發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者AR表達(dá)率較高，與未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目是TNBC預(yù)后的獨(dú)立影響因子，表明AR陽性的TNBC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高，具有高侵襲性，預(yù)后較差。

Ki-67抗原是位于第10號(hào)染色體上與增殖相關(guān)的蛋白，主要與細(xì)胞合成代謝有關(guān)，其表達(dá)能反映腫瘤的增殖活性，是一種公認(rèn)的細(xì)胞增殖活性標(biāo)志物[6]。在增生細(xì)胞的G1、S、G2、M期表達(dá)，細(xì)胞有絲分裂后該蛋白含量迅速減少，在G0期不表達(dá)。Ki-67被認(rèn)為與細(xì)胞的有絲分裂密切相關(guān)，是維持細(xì)胞周期的必需物質(zhì)。研究表明，在多種實(shí)體惡性腫瘤中Ki-67的表達(dá)遠(yuǎn)高于正常組織，Ki-67的表達(dá)亦與乳癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有關(guān)，它能促進(jìn)乳癌細(xì)胞的增殖、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，是一種不良預(yù)后因子，可作為早期識(shí)別具有高浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移潛能的乳癌及判斷其預(yù)后有重要價(jià)值的指標(biāo)。已有研究顯示，Ki-67表達(dá)與乳癌分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)[7]。

本文結(jié)果顯示，TNBC中Ki-67有著明顯的過表達(dá)，這與國(guó)外有關(guān)研究結(jié)果一致[8]。證明TNBC較易發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，預(yù)后相對(duì)較差。在TNBC中Ki-67的表達(dá)與病人年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、BMI及腫瘤大小無關(guān)。在TNBC中Ki-67的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，Ki-67陽性高表達(dá)提示細(xì)胞增殖活躍，腫瘤組織生長(zhǎng)快，易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差。組織學(xué)分級(jí)是判斷腫瘤惡性程度高低的一個(gè)重要指標(biāo)，本文結(jié)果顯示，Ⅰ-Ⅱ級(jí)腫瘤Ki-67的陽性表達(dá)率顯著低于Ⅲ級(jí)腫瘤，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明腫瘤惡性程度越高、組織學(xué)分級(jí)越低其Ki-67的表達(dá)越高。

本文結(jié)果還顯示，AR與Ki-67在TNBC中的表達(dá)呈正相關(guān)。提示Ki-67與AR在TNBC的發(fā)生、發(fā)展中具有協(xié)同作用，二者聯(lián)合檢測(cè)更有助于為TNBC的臨床治療及預(yù)后判斷提供依據(jù)。

總之，TNBC具有AR低表達(dá)、Ki-67高表達(dá)的現(xiàn)象，提示TNBC有較高的侵襲性，其生物學(xué)行為差、預(yù)后差，AR、Ki-67有望成為TNBC新的預(yù)后指標(biāo)，也會(huì)為預(yù)測(cè)TNBC臨床及生物學(xué)特點(diǎn)及內(nèi)分泌治療提供重要依據(jù)和新的研究方向。

[參考文獻(xiàn)]

[1] BRYAN B B, SCHNITT S J, COLLINS L C. Ductal carcinoma in situ with basal-like phenotype: a possible precursor to invasive basal-like breast cancer[J]. Mod Pathol, 2006,19(5):617-621.

[2] 宮文靜,安永恒,馮齡鑫. 三陰乳癌的臨床特征及治療進(jìn)展[J]. 齊魯醫(yī)學(xué)雜志, 2010,25(1):89-90,92.

[3] HIGGINS M J, WOLFF A C. The androgen receptor in breast cancer: learning from the past[J]. Breast Cancer Res Treat, 2010,124(3):619-621.

[4] LIN H Y, SUN M, LIN C, et al. Androgen-induced human breast cancer cell proliferation is mediated by discrete mechanisms in estrogen receptor-alpha-positive and-negative breast cancer cells[J]. J Steroid Biochem Mol Biol, 2009,113(3/5):182-188.

[5] SPURDLE A B, ANTONIOU A C, DUFFY D L, et al. The androgen receptor CAG repeat polymorphism and modification of breast cancer risk in BRCA1 and BRCA2 mutation carriers[J]. Breast Cancer Res, 2005,7(2): R176-R183.

[6] TAN P H, BAY B H, YIP G, et al. Immunohistochemical detection of Ki67 in breast cancer correlates with transcriptional regulation of genes related to apoptosis and cell death[J]. Mod Pathol, 2005,18(3):374-381.

[7] 李振鳳,宋修岐,鄒曉,等. 乳癌組織LRP16、Ki67及EGFR表達(dá)及其與預(yù)后關(guān)系[J]. 齊魯醫(yī)學(xué)雜志, 2013,28(2):124-126.

[8] ELKHUIZEN P H, VOOGD A C, VAN DEN BROEK L C, et al. Risk factors for local recurrence after breast-conserving therapy for invasive carcinomas: a case-control study of histological factors and alterations in oncogene expression[J]. Int J Radiat Oncol Biol Phys, 1999,45(1):73-83.