趙美玲，王 沛，王 紅，楊新華，李 強(qiáng)

（白求恩醫(yī)務(wù)士官學(xué)校，河北 石家莊 050081）

細(xì)胞療法在癌癥治療中的作用

趙美玲，王 沛，王 紅，楊新華，李 強(qiáng)

（白求恩醫(yī)務(wù)士官學(xué)校，河北 石家莊 050081）

半個世紀(jì)以來，癌癥在全球范圍內(nèi)的總發(fā)病率呈上升趨勢，癌癥的治療也成為全球探討的熱點(diǎn)。與常規(guī)治療法相比，目前基于細(xì)胞的療法在惡性腫瘤治療中的應(yīng)用逐漸增多，特別是細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷（CIK）細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞（DC）和腫瘤干細(xì)胞在癌癥治療方面的研究尤為熱門。

癌癥；細(xì)胞療法；殺傷細(xì)胞；樹突狀細(xì)胞；腫瘤干細(xì)胞

癌癥（又稱惡性腫瘤）是威脅人類生命和健康的主要疾病，據(jù)世界衛(wèi)生組織估計，全球每年因癌癥死亡的有760萬人，占全球總死亡人數(shù)的13%；而我國因癌癥死亡的人數(shù)也在持續(xù)上升，預(yù)計2020年我國癌癥發(fā)病人數(shù)將達(dá)到300萬，死亡人數(shù)達(dá)220萬[1]。防治癌癥已經(jīng)成為我國乃至全球的重要任務(wù)。筆者結(jié)合近期文獻(xiàn)對癌癥常規(guī)治療法以及幾種主要細(xì)胞治療法進(jìn)行闡述。

1 癌癥常規(guī)治療法

癌癥常規(guī)治療主要包括手術(shù)治療和放、化療相結(jié)合的綜合治療方法。手術(shù)治療是早期癌癥的首選治療方法，優(yōu)勢在于效果直接快速，缺點(diǎn)在于存在危險性而且容易出現(xiàn)一系列的并發(fā)癥。而放、化療則是通過理化因素達(dá)到殺死或者抑制腫瘤細(xì)胞的目的，這種方法在殺滅腫瘤細(xì)胞的同時也會殺傷人體的正常細(xì)胞，因此被認(rèn)為是一種“玉石俱焚”的治療方法。隨著人們對腫瘤治療研究的不斷深入，常規(guī)治療方法已將手術(shù)、化療、放療等多種方法聯(lián)合應(yīng)用在臨床和試驗(yàn)中并取得了不錯的效果。

2 細(xì)胞療法

目前在癌癥治療中應(yīng)用傳統(tǒng)的手術(shù)、化療、放療等方法并不能很好地殺傷腫瘤細(xì)胞，抑制腫瘤活性，導(dǎo)致腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)率非常高。隨著現(xiàn)代生物學(xué)的迅猛發(fā)展，細(xì)胞療法成為治療癌癥的有效方法，為醫(yī)療科學(xué)研究提供了新方向。目前治療癌癥的細(xì)胞療法主要有：細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷（CIK）細(xì)胞療法、樹突狀細(xì)胞（DC）療法及DC-CIK聯(lián)合法。

2.1 CIK細(xì)胞療法

CIK（Cytokine-Induced Killer）是細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞治療方法的簡稱，20世紀(jì)80年代美國Stanford大學(xué)血液病學(xué)者Robert Negrin等將CIK細(xì)胞用于腫瘤的治療，現(xiàn)國內(nèi)外以CIK細(xì)胞治療為主導(dǎo)的個體化腫瘤細(xì)胞治療不斷取得進(jìn)展。CIK細(xì)胞是將人體外周血單個核細(xì)胞（PBMC）在體外經(jīng)過多種細(xì)胞因子（IFN-γ、Ril-2、抗CD3McAb和IL-lα）共同誘導(dǎo)而獲得的一群異質(zhì)細(xì)胞[2]。同時表達(dá)CD3和CD56兩種膜蛋白分子[3]，兼具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性和NK細(xì)胞的非MHC限制性殺瘤特點(diǎn)。具體來說，CIK細(xì)胞生物學(xué)活性主要包括：（1）增殖活性高。通過IFN-γ、Ril-2、抗CD3McAb和IL-1α等因子誘導(dǎo)外周血或臍血中的單個核細(xì)胞，生成免疫學(xué)活性更大的CIK細(xì)胞。（2）殺瘤活性強(qiáng)。CIK細(xì)胞是以CD3+、CD56+T細(xì)胞為主的異質(zhì)細(xì)胞群，而且殺瘤活性不受免疫抑制劑CsA、FK506等的影響。（3）殺瘤譜廣。CIK細(xì)胞能廣泛地表達(dá)多種類型的細(xì)胞因子，既具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大殺傷活性，也具有NK細(xì)胞殺傷時的非MHC限制性。（4）對正常骨髓造血前體細(xì)胞毒性小。這可能與CIK細(xì)胞自身分泌較高水平的腫瘤壞死因子（TNF）、INF-γ、淋巴細(xì)胞毒素等細(xì)胞因子有關(guān)[2]。

2.1.1 CIK細(xì)胞作用機(jī)制（1）對腫瘤細(xì)胞的直接殺傷。CIK細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上類似大顆粒淋巴細(xì)胞，CIK細(xì)胞對靶細(xì)胞的識別結(jié)合是非MHC限制性的，而且CIK細(xì)胞釋放胞漿顆粒入細(xì)胞外間隔，通過顆粒內(nèi)含物發(fā)揮對靶細(xì)胞直接殺傷作用。

（2）調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)間接殺傷腫瘤細(xì)胞。大量實(shí)驗(yàn)證明，培養(yǎng)的CIK細(xì)胞可以分泌多種細(xì)胞因子（如TNF-α、IL-2、GMCSF、IFN-γ等）以增強(qiáng)細(xì)胞毒作用，不僅對腫瘤細(xì)胞有直接抑制作用，還可通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)間接殺傷腫瘤細(xì)胞。

（3）誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和壞死。Verneris等[4]的實(shí)驗(yàn)提示，CIK細(xì)胞在培養(yǎng)過程中還能激活腫瘤細(xì)胞的凋亡基因，使FLIP，Bcl-2，Bcl-Xl，DAD1和survivin基因表達(dá)上調(diào)，從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。岑溪南等[5]通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)，CIK細(xì)胞可誘導(dǎo)bcrabl陽性的K562細(xì)胞凋亡。

（4）促進(jìn)T細(xì)胞增殖活化。原始的CD3+、CD56+T細(xì)胞隨CIK輸注體內(nèi)后，在宿主機(jī)體狀態(tài)或腫瘤抗原刺激下轉(zhuǎn)變成具有殺瘤活性的細(xì)胞——毒性T細(xì)胞，使T細(xì)胞增殖活化并發(fā)揮抗瘤作用[6]。

2.1.2 CIK細(xì)胞在癌癥治療中的應(yīng)用 近年來，體外擴(kuò)增CIK的技術(shù)日趨成熟，為CIK的臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。國內(nèi)外越來越多的機(jī)構(gòu)、學(xué)者開始嘗試應(yīng)用CIK細(xì)胞治療癌癥病人。Weng等[7]在85名接受過微創(chuàng)治療的肝癌病人中觀察CIK細(xì)胞的療效，發(fā)現(xiàn)微創(chuàng)技術(shù)治療后再用CIK細(xì)胞治療能提高肝癌病人的免疫力，減少癌癥的復(fù)發(fā)。劉繼斌等[8]對53例中晚期消化系統(tǒng)腫瘤病人進(jìn)行CIK細(xì)胞治療并隨訪3年，總緩解率為73.6%，隨訪1、2、3年的生存率分別為92.4%、83.0%和75.5%，臨床癥狀治療前后有明顯改善，生存質(zhì)量評分顯著提高。

2.2 DC療法

樹突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC）是體內(nèi)抗原提呈作用最強(qiáng)的專職性抗原提呈細(xì)胞（APC），DC在T細(xì)胞免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用[9]，而且DC能捕獲細(xì)菌、病毒等抗原，并遞呈給次級淋巴器官中的T細(xì)胞，是連接天然免疫和特異性免疫的一個重要紐帶。DC既能誘導(dǎo)初次免疫應(yīng)答，又能誘導(dǎo)再次免疫應(yīng)答，是啟動、調(diào)控并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。經(jīng)試驗(yàn)和臨床證實(shí)，體外培養(yǎng)的DC和純化的體內(nèi)成熟DC具有相同的抗原呈遞能力，這也是DC用于臨床治療惡性腫瘤的基礎(chǔ)[10]。

2.2.1 DC的抗腫瘤作用機(jī)制 抗腫瘤免疫的基礎(chǔ)研究表明，腫瘤細(xì)胞低表達(dá)或不表達(dá)MHC分子及共刺激分子，有些腫瘤細(xì)胞還能合成分泌某些細(xì)胞因子抑制腫瘤病人體內(nèi)DC的成熟及機(jī)體的免疫功能，使腫瘤細(xì)胞逃逸機(jī)體的免疫監(jiān)視而無限生長[11]。DC可以防止腫瘤逃逸進(jìn)而達(dá)到機(jī)體監(jiān)視和殺滅腫瘤的目的：（1）DC表面可高表達(dá)MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ類分子，從而形成呈遞豐富的腫瘤抗原肽來活化抗腫瘤CTL的第一信號。（2）DC具有較強(qiáng)的定向遷移能力，而且能分泌趨化因子，該因子可以專一性趨化初始型T細(xì)胞，從而促進(jìn)T細(xì)胞在腫瘤部位的聚集，增強(qiáng)對T細(xì)胞的激活[12]。（3）當(dāng)T細(xì)胞被激活后DC隨即與T細(xì)胞結(jié)合，DC和T細(xì)胞之間的相互作用以及DC分泌的一些細(xì)胞因子可以促進(jìn)T細(xì)胞的生長，維持T細(xì)胞的免疫反應(yīng)，保證效應(yīng)T細(xì)胞在腫瘤部位長期存在[13]。

2.2.2 DC-CIK聯(lián)合抗腫瘤的應(yīng)用 DC和CIK細(xì)胞是腫瘤免疫治療的兩個重要部分，前者識別和提呈抗原、激活獲得性免疫應(yīng)答，后者通過發(fā)揮自身細(xì)胞毒性和分泌細(xì)胞因子殺傷腫瘤細(xì)胞，二者聯(lián)合形成了一個高效和諧的免疫體系。研究表明，DC和CIK細(xì)胞共同培養(yǎng)可以促進(jìn)DC和CIK細(xì)胞的成熟[14]，而且具有更強(qiáng)的腫瘤殺傷能力，殺瘤譜更廣，并在低效靶比條件下能清除腫瘤細(xì)胞。Marten等[15]將外周血來源的CIK細(xì)胞和同源的DC共同培養(yǎng)一段時間后發(fā)現(xiàn)，DC和CIK細(xì)胞的增殖能力明顯增強(qiáng)，共培養(yǎng)14 d后，CIK細(xì)胞的增殖倍數(shù)比共培養(yǎng)7 d的高2倍左右。共培養(yǎng)24 h后，DC的IL-1α分泌量為單獨(dú)培養(yǎng)時的6.93倍，與DC共培養(yǎng)的CIK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷活性顯著提高。DC和CIK細(xì)胞共培養(yǎng)可以增強(qiáng)殺瘤能力的機(jī)制：（1）DC可以分泌IL-2、IL-1α、IFN-γ等多種能促進(jìn)CIK細(xì)胞增殖的細(xì)胞因子，且IL-1α能促進(jìn)殺瘤活性CD56+細(xì)胞的高表達(dá)，從而提高CIK細(xì)胞的增殖和細(xì)胞毒能力。（2）DC與CIK細(xì)胞共同培養(yǎng)后，DC可以使CIK細(xì)胞IFN的分泌量比同條件下單純的CIK細(xì)胞分泌多，時間更長[16]。（3）DC與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)可以減弱免疫抑制T細(xì)胞（Treg，即CD4+、CD25+細(xì)胞），從而達(dá)到削弱Treg對抗腫瘤免疫細(xì)胞的抑制作用，進(jìn)而增強(qiáng)CIK細(xì)胞的殺傷能力[17]。（4）DC可促進(jìn)CIK細(xì)胞高表達(dá)CD28和CD40及其配體CD40L，這對介導(dǎo)DC、CIK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性有重要作用[15]。

2.3 腫瘤干細(xì)胞療法

傳統(tǒng)觀念認(rèn)為，腫瘤是由體細(xì)胞突變而成，每個腫瘤細(xì)胞都可以無限制地生長。但這無法解釋腫瘤細(xì)胞似乎具有無限的生命力，以及并非所有腫瘤細(xì)胞都能無限制生長的現(xiàn)象。因此早在20世紀(jì)60年代，Sterens便提出腫瘤起源于干細(xì)胞的理論，隨后研究人員便對此展開了細(xì)致的研究，而Reya等[18]基于腫瘤細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的特點(diǎn)與干細(xì)胞的基本特性十分相似提出了“腫瘤干細(xì)胞假說”，通過腫瘤干細(xì)胞的無限增殖，體內(nèi)便會形成腫瘤。而且隨著人們對干細(xì)胞研究的不斷深入，在腫瘤研究領(lǐng)域，亦加深了對腫瘤干細(xì)胞起源的認(rèn)識。

現(xiàn)有治療腫瘤的方法主要是依靠盡可能多地殺死腫瘤細(xì)胞，從而減少腫瘤細(xì)胞的體積和數(shù)量。但這樣并不能達(dá)到根治腫瘤的目的。其原因是：首先，大部分腫瘤細(xì)胞并沒有腫瘤源性，其生長、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)均依賴于少量類似干細(xì)胞樣的腫瘤干細(xì)胞，而目前的治療方法并不能有效地殺死這些細(xì)胞。其次，許多藥物的靶向是那些正在分裂的細(xì)胞，但是腫瘤干細(xì)胞大部分情況下都是處于休眠狀態(tài)，因此腫瘤干細(xì)胞與其他腫瘤細(xì)胞在對藥物的敏感性上存在差異。因此，從腫瘤干細(xì)胞理論考慮治療癌癥的問題，一方面可以將腫瘤干細(xì)胞作為治療靶點(diǎn)，對其進(jìn)行直接殺傷；另一方面還可以對腫瘤干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化，使其失去腫瘤源性。這一理論對傳統(tǒng)治療法提出了巨大的挑戰(zhàn)。

3 細(xì)胞療法治療癌癥存在的問題及展望

綜上所述，目前治療癌癥主要采用手術(shù)、放療和化療的傳統(tǒng)方法，但是這樣并不能從根本上達(dá)到治療和控制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和再生的目的，所以，現(xiàn)在臨床上多把細(xì)胞療法和傳統(tǒng)方法結(jié)合起來。CIK細(xì)胞治療癌癥雖然對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力強(qiáng)，殺瘤譜也比較廣，但是CIK細(xì)胞的特異性和靶向性不高，很難直接選準(zhǔn)病灶細(xì)胞。而DC具有很強(qiáng)的抗原呈遞功能和激活免疫細(xì)胞的免疫應(yīng)答能力，所以DC與CIK細(xì)胞聯(lián)合可以有效地進(jìn)行功能互補(bǔ)，從而為抗腫瘤研究提供一些新方向和思路。

與此同時，隨著人們對抗腫瘤研究的不斷深入，腫瘤干細(xì)胞概念的提出及其存在的證實(shí)為人類認(rèn)識腫瘤發(fā)生機(jī)制邁出了一大步，同時也為腫瘤發(fā)病機(jī)制及早期診斷和根治惡性腫瘤方法的研究指出了一個新方向。很多研究證實(shí)，腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移與再生有很大可能是體內(nèi)存在腫瘤干細(xì)胞的緣故，因此治療癌癥首先要對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行有效的殺傷。目前較為常用的是DCCIK聯(lián)合法，其次是針對腫瘤易轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的特點(diǎn)，清除體內(nèi)存在的腫瘤干細(xì)胞，這樣就可以有效地達(dá)到治療腫瘤的目的。雖然現(xiàn)在應(yīng)用DC-CIK聯(lián)合法結(jié)合腫瘤干細(xì)胞理論來治療癌癥的基礎(chǔ)理論研究和臨床病例還不多，相信在不久的將來DCCIK聯(lián)合法結(jié)合腫瘤干細(xì)胞治療將成為治療癌癥的一種新方法。

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