曹正輝 王占彬 顧憲紅

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193;2.河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，洛陽(yáng) 471003)

隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)在育種領(lǐng)域的高速發(fā)展，轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物、植物、微生物也慢慢地走進(jìn)人們的生活。由于轉(zhuǎn)基因作物具有抗病性、抗蟲(chóng)性、抗逆性等特點(diǎn)，為農(nóng)業(yè)商業(yè)全球化做出了貢獻(xiàn)，但其飼用安全性也成為人們?nèi)找骊P(guān)注的焦點(diǎn)。水稻作為全球主要的糧食來(lái)源之一，面臨的主要問(wèn)題就是病蟲(chóng)害，由于長(zhǎng)期大量地使用化工農(nóng)藥，一方面增加了糧食的生產(chǎn)成本;另一方面由于農(nóng)藥的殘留引發(fā)了生態(tài)系統(tǒng)的紊亂［1］。于是具有抗蟲(chóng)特性的轉(zhuǎn)Bt(Bacillus thuringiensis，Bt)基因水稻便應(yīng)運(yùn)而生，它是利用蘇云金芽孢桿菌中的內(nèi)毒素蛋白Cry1Ac/Cry1Ab基因?qū)氲剿镜幕蚪M中獲得的，具有抗鱗翅目昆蟲(chóng)特性［2］。轉(zhuǎn)Bt基因水稻在增產(chǎn)增收方面確實(shí)發(fā)揮了很大的作用，同時(shí)人們對(duì)關(guān)于食品轉(zhuǎn)基因化的安全性問(wèn)題提出了質(zhì)疑和擔(dān)憂。人們關(guān)心的重點(diǎn)一方面是轉(zhuǎn)入水稻的外源基因表達(dá)的蛋白質(zhì)是否會(huì)通過(guò)食物鏈最終進(jìn)入人體，并在人體內(nèi)沉積，對(duì)人體造成潛在的危害;另一方面是擔(dān)心轉(zhuǎn)入基因表達(dá)的外源蛋白質(zhì)在動(dòng)物體消化后是否會(huì)在其排泄物中殘留，通過(guò)排泄物進(jìn)入生態(tài)系統(tǒng)對(duì)環(huán)境造成危害。目前關(guān)于轉(zhuǎn)Bt基因糙米表達(dá)的殺蟲(chóng)蛋白質(zhì)和基因在動(dòng)物體中的殘留報(bào)道結(jié)果不一［3－10］。大多數(shù)研究表明，轉(zhuǎn) Bt基因糙米中的外源基因和外源蛋白質(zhì)不會(huì)在動(dòng)物體內(nèi)殘留［11－12］;也有研究表明，在用轉(zhuǎn) Bt基因糙米飼養(yǎng)的動(dòng)物體內(nèi)或排泄物中發(fā)現(xiàn)了外源蛋白質(zhì)和基因的殘留［3－5］。本試驗(yàn)以生長(zhǎng)豬為研究對(duì)象，以70%轉(zhuǎn)Bt基因糙米添加到飼糧，通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等方法檢測(cè)豬體、體液及其排泄物中外源基因和蛋白質(zhì)的殘留，并對(duì)生長(zhǎng)豬內(nèi)臟器官組織切片進(jìn)行分析對(duì)比，從而全面地評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)Bt基因水稻對(duì)動(dòng)物體和環(huán)境的影響，進(jìn)而為指導(dǎo)轉(zhuǎn)基因水稻在食品生產(chǎn)上的應(yīng)用提供可靠依據(jù)，對(duì)完善轉(zhuǎn)Bt基因水稻的安全評(píng)價(jià)具有重要意義。

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets(air-dry basis) %

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

水稻:試驗(yàn)用轉(zhuǎn)Bt基因水稻(浙優(yōu)5號(hào))是由浙大208S×非轉(zhuǎn)基因ZR9兩系雜交所得的抗蟲(chóng)新品種;對(duì)照品種是揚(yáng)兩優(yōu)6號(hào)，為浙優(yōu)5號(hào)的親本非轉(zhuǎn)基因品種。2個(gè)品種均由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)提供。

豆粕和豆油:由黑龍江九三糧油工業(yè)集團(tuán)有限公司提供的“九三牌”非轉(zhuǎn)基因豆粕和豆油。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)采用 30 頭體重為(35.76±2.52)kg 的生長(zhǎng)豬，利用生長(zhǎng)性能測(cè)定站飼喂，試驗(yàn)組(test group，TG)飼糧含有70%轉(zhuǎn)Bt糙米;對(duì)照組(control group，CG)飼糧使用等量的親本非轉(zhuǎn)基因糙米，飼糧中的其他原料均為非轉(zhuǎn)基因。試驗(yàn)期90 d，根據(jù)生長(zhǎng)豬不同時(shí)期的營(yíng)養(yǎng)需求分為前期(第1～45天)和后期(第46～90天)2個(gè)階段分別配制飼糧，試驗(yàn)期間豬只自由采食和飲水。試驗(yàn)所用生長(zhǎng)豬由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所昌平試驗(yàn)豬場(chǎng)提供。

1.3 試驗(yàn)飼糧

試驗(yàn)飼糧配制參照中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 65—2004)［6］中國(guó)肉脂型生長(zhǎng)豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，分階段配制糙米－豆粕型粉料飼糧。各階段試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.4 樣品的采集和制備

試驗(yàn)期的第45和90天的09:00—10:00和15:00—16:00每天2次，采用無(wú)抓捕應(yīng)激方式分別收集豬只的唾液、尿液和糞便。將試驗(yàn)期第45和90天采集的唾液、尿液及糞便樣品分別進(jìn)行充分混勻，－20℃保存?zhèn)溆谩Ｔ囼?yàn)結(jié)束后每組隨機(jī)選取6頭(3公3母)豬只進(jìn)行屠宰。屠宰前12 h停料，電擊暈后吊掛放血屠宰。取心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胃、胰臟、十二指腸、空腸、回腸、背最長(zhǎng)肌等組織器官和空腸食糜等，置入液氮中速凍后轉(zhuǎn)入－80℃保存。同時(shí)取心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、十二指腸、空腸、回腸等組織器官，用無(wú)菌生理鹽水沖洗干凈，放入10%的甲醛溶液中固定，用于制作組織切片。

1.5 組織切片的制作和觀察

取出適量的保存在甲醛中的組織樣品，通過(guò)梯度酒精脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、切成6μm的切片，通過(guò)蘇木精－伊紅(HE)染色后將制作好的組織切片置于顯微鏡下，十二指腸、空腸和回腸組織切片在40倍下觀察拍照，心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟組織切片在100倍下觀察拍照，并對(duì)觀察結(jié)果進(jìn)行分析。

1.6 外源蛋白質(zhì)的殘留檢測(cè)

將生長(zhǎng)豬各組織器官及各組糞樣、尿液樣、血清樣、唾液樣、食糜樣等取出后轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥儀凍干，然后將凍干樣品磨碎過(guò)篩后，于－20℃保存?zhèn)溆?。稱取已處理好的組織樣品粉末按照試劑盒(QualiPlateTMKit for Cry1Ab/Cry1Ac)測(cè)定步驟方法進(jìn)行。

1.7 外源基因的殘留檢測(cè)

首先是DNA提取，為了避免在PCR檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)假陰性的現(xiàn)象，采用轉(zhuǎn)Bt基因糙米為飼糧原料的飼料樣品中的Cry1Ac/Cry1Ab基因片段作為擴(kuò)增條件的陽(yáng)性對(duì)照，Cry1Ac/Cry1A基因片段擴(kuò)增引物序列如表2所示。其次是DNA擴(kuò)增，按照表3反應(yīng)體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增?；旌现笾糜赑CR儀中按以下程序反應(yīng):94℃預(yù)變性3 m in;94℃變性30 s;Cry1Ac/Cry1A基因55℃退火30 s;72℃延伸 30 s，循環(huán) 35次;72℃延伸10 min。由北京信諾金達(dá)科技公司進(jìn)行測(cè)定。所有組織、血液、尿液、唾液、糞樣、飼料樣中的DNA均是通過(guò)上述條件擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物在1%瓊脂糖凝膠上電泳，溴化乙錠進(jìn)行染色并在紫外光下觀察結(jié)果。

表2 Cry1Ac/Cry1Ab基因引物序列Table 2 Primer sequences of Cry1Ac/Cry1A genes

表3 PCR反應(yīng)體系Table 3 PCR reaction system

1.8 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 9.2統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，采用ANOVA程序?qū)?shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)分析。以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼用轉(zhuǎn)Bt基因糙米對(duì)生長(zhǎng)豬組織器官形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

如圖1所示，觀察結(jié)果顯示心臟肌纖維橫紋清楚，無(wú)變性、壞死等改變，血管處無(wú)充血、出血情況出現(xiàn)，間質(zhì)內(nèi)未見(jiàn)水腫等;肝臟以中央靜脈為中心的肝索向四周放射狀的排列，且肝小葉清晰可見(jiàn)，細(xì)胞核位于細(xì)胞中央，在匯管區(qū)未見(jiàn)有纖維狀組織增生出現(xiàn);肺臟清晰可見(jiàn)疏松的肺泡，未見(jiàn)病變區(qū);腎臟中腎小管和腎小球的結(jié)構(gòu)清晰，輪廓明顯，腎臟結(jié)構(gòu)正常，腎小球的囊腔中也沒(méi)有滲出液，也無(wú)增生變化;脾臟表面的被膜完整未見(jiàn)增厚且結(jié)構(gòu)正常，淋巴小結(jié)數(shù)目和大小都正常，且分化的淋巴細(xì)胞良好;各段小腸的組織切片顯示也是發(fā)育正常，且腸道絨毛和隱窩深度也沒(méi)有異常的情況。未見(jiàn)組織器官的顯微結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯的病理變化，表明轉(zhuǎn)Bt基因糙米用作生長(zhǎng)豬飼糧原料，對(duì)生長(zhǎng)豬內(nèi)臟器官組織的亞顯微結(jié)構(gòu)未產(chǎn)生不良的影響。

圖1 飼喂不同飼糧的生長(zhǎng)豬的組織切片F(xiàn)ig.1 Histopathological picture of grow ing pigs fed different diets

2.2 轉(zhuǎn)Bt基因糙米表達(dá)的外源蛋白質(zhì)在生長(zhǎng)豬組織器官、體液及排泄物中的殘留

轉(zhuǎn)基因糙米經(jīng)檢測(cè)含有Cry1Ac/Cry1Ab蛋白質(zhì)2.25μg/g。轉(zhuǎn)基因組飼糧中，前期飼糧中含有外源 Cry1Ac/Cry1Ab蛋白質(zhì) 1.52 μg/μL，后期飼糧中外源含有外源Cry1Ac/Cry1Ab蛋白質(zhì)1.93μg/μL。其余親本的非轉(zhuǎn)基因飼糧和糙米中均未檢測(cè)出外源的Cry1Ac/Cry1Ab蛋白質(zhì)。飼喂轉(zhuǎn)Bt基因糙米飼糧、非轉(zhuǎn)基因糙米飼糧的生長(zhǎng)豬的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胃、胰臟、十二指腸、空腸、回腸、背最長(zhǎng)肌等組織器官中均未檢測(cè)到Cry1Ac/Cry1Ab蛋白質(zhì)的殘留。在血清、尿液及排泄物中也未檢測(cè)出有殘留。但在轉(zhuǎn)基因飼糧組的生長(zhǎng)豬的唾液中檢測(cè)到了Cry1Ac/Cry1Ab蛋白質(zhì)含量為0.26μg/μL，親本非轉(zhuǎn)基因組生長(zhǎng)豬的唾液中沒(méi)有檢測(cè)到Cry1Ac/Cry1Ab蛋白質(zhì)的殘留。

2.3 轉(zhuǎn)入糙米中的 Cry1Ac/Cry1Ab基因在生長(zhǎng)豬組織器官、體液及排泄物中的殘留

如圖2、圖3所示，在飼喂轉(zhuǎn)Bt基因糙米飼糧的生長(zhǎng)豬的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胃、胰臟、十二指腸、空腸、回腸、背最長(zhǎng)肌等組織器官及體液(血清、尿液、唾液)和排泄物中未檢測(cè)出轉(zhuǎn)入基因的片段。結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因糙米中的外源基因未通過(guò)食物向生長(zhǎng)豬的組織器官和體液中轉(zhuǎn)移和累積，也未對(duì)生態(tài)環(huán)境造成危害。

圖2 對(duì)照組生長(zhǎng)豬各組織中外源基因(Cry1Ac/Cry1Ab)檢測(cè)Fig.2 The detection of exogenous gene(Cry1Ac/Cry1Ab)in organization of grow ing pigs in control group

3 討論

3.1 轉(zhuǎn)Bt基因糙米飼用對(duì)生長(zhǎng)豬的組織器官的影響

以轉(zhuǎn)基因的作物作為動(dòng)物的飼料原料，其轉(zhuǎn)入的基因片段或是該基因表達(dá)的外源蛋白質(zhì)是否會(huì)像作物自身原有的DNA表達(dá)的蛋白質(zhì)一樣在動(dòng)物的消化道內(nèi)被降解，是否會(huì)在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)生轉(zhuǎn)移并在體內(nèi)積累，是目前人們極為關(guān)注的問(wèn)題。

圖3 試驗(yàn)組生長(zhǎng)豬各組織中外源基因(Cry1Ac/Cry1Ab)檢測(cè)Fig.3 The detection of exogenous gene(Cry1Ac/Cry1Ab)in organization of grow ing pigsin test group

轉(zhuǎn)基因作物作為動(dòng)物飼糧，動(dòng)物機(jī)體的組織器官的組織結(jié)構(gòu)是否因?yàn)檗D(zhuǎn)基因食物的原因發(fā)生了變化，可以直接或間接地反映動(dòng)物機(jī)體的組織和器官是否發(fā)生損傷及損傷的程度，同時(shí)也能夠反映組織器官的功能性變化。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，未見(jiàn)生長(zhǎng)豬體組織及內(nèi)臟器官的顯微結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯的變化，與之前的大多數(shù)研究結(jié)果一致［7］。Yonemochi等［8］研究表明，飼喂轉(zhuǎn)基因玉米 Cry9c后，生長(zhǎng)豬的組織器官(心臟、肝臟、脾臟、腎臟、十二指腸、空腸、回腸等)未發(fā)生明顯的組織學(xué)變化。楊月欣等［9］研究了轉(zhuǎn)SCK基因大米對(duì)生長(zhǎng)豬生長(zhǎng)狀況的影響，對(duì)內(nèi)臟器官進(jìn)行了組織學(xué)觀察未見(jiàn)異常。Hammond 等［10－11］和 Cao 等［12］利用轉(zhuǎn)基因玉米的飼喂試驗(yàn)也得到相同的結(jié)果。本試驗(yàn)表明，轉(zhuǎn)基因糙米作為動(dòng)物飼糧飼喂，不會(huì)對(duì)動(dòng)物體的組織結(jié)構(gòu)產(chǎn)生不良的影響。

3.2 轉(zhuǎn)Bt基因糙米中的Cry1Ac/Cry1Ab基因在生長(zhǎng)豬組織器官及排泄物中的殘留

目前檢測(cè)轉(zhuǎn)基因作物中的外源DNA在動(dòng)物體內(nèi)殘留最常用的方法就是PCR方法，通過(guò)PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因作物中的外源的DNA殘留，可以檢測(cè)轉(zhuǎn)基因作物中的多種轉(zhuǎn)入的基因片段。本試驗(yàn)也同樣采用了PCR方法，根據(jù)轉(zhuǎn)Bt基因糙米中的Cry1Ac/Cry1Ab基因序列合成用于檢測(cè)的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳顯示條帶(340 bp)從而證實(shí)了以該水稻為原料的生長(zhǎng)豬飼糧中含有轉(zhuǎn)基因成分。在生長(zhǎng)豬的組織器官、體液、排泄物中均未檢測(cè)出Cry1Ac/Cry1Ab基因片段。這也與之前的研究結(jié)果一致［13－14］。Tony等［15］研究了轉(zhuǎn)Bt176基因的玉米在肉雞上的安全評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示在肉雞所有組織和器官中均沒(méi)有檢測(cè)到轉(zhuǎn)入的Bt基因的片段殘留。同樣的還有Einspanie 等［16－17］和 Rossi等［18］以肉雞和生長(zhǎng)豬作為試驗(yàn)對(duì)象，也未在試驗(yàn)動(dòng)物的機(jī)體中檢測(cè)到外源基因的殘留。Ash等［19］也以抗草甘膦的豆粕飼喂蛋雞，結(jié)果顯示在蛋雞的內(nèi)臟器官及雞蛋中均未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)入的抗草甘膦基因片段。以上研究結(jié)果均與本試驗(yàn)結(jié)果一致，表明轉(zhuǎn)Bt基因糙米中的外源基因未在生長(zhǎng)豬的內(nèi)臟器官、體液中殘留，也未通過(guò)排泄物對(duì)生態(tài)系統(tǒng)造成危害。

3.3 轉(zhuǎn)Bt基因糙米表達(dá)的外源蛋白質(zhì)在生長(zhǎng)豬組織器官及排泄物中的殘留

在轉(zhuǎn)基因作物中外源基因表達(dá)的外源蛋白質(zhì)是否能在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)生殘留，通常采用的方法是ELISA。大多研究表明了轉(zhuǎn)基因作物中外源基因表達(dá)的外源蛋白質(zhì)會(huì)通過(guò)動(dòng)物的消化道進(jìn)行消化分解［20－23］。Jennings 等［16－17］通過(guò)轉(zhuǎn)基因的抗蟲(chóng)玉米對(duì)肉仔雞和生長(zhǎng)豬的同時(shí)飼用，結(jié)果顯示在其肌肉、器官組織中均未檢測(cè)到外源基因及其表達(dá)蛋白質(zhì)的殘留。隨后王長(zhǎng)康等［24］、朱元招等［25］利用抗草甘膦的轉(zhuǎn)基因豆粕對(duì)蛋雞、番鴨及生長(zhǎng)豬上進(jìn)行了試驗(yàn)也得出了相似的結(jié)果，顯示在試驗(yàn)動(dòng)物的心臟、肝臟、腸道、胰腺、食道、肌肉、蛋品、肌肉及排泄物中均未發(fā)現(xiàn)有轉(zhuǎn)基因成分的殘留。Chowdhury等［26］同樣利用了轉(zhuǎn)基因的玉米對(duì)生長(zhǎng)豬進(jìn)行了試驗(yàn)，表明了轉(zhuǎn)基因的外源蛋白質(zhì)沒(méi)有在生長(zhǎng)豬的血液中沉積和殘留。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在2組生長(zhǎng)豬的組織器官、血液、尿液、食糜、糞便中均未發(fā)現(xiàn)殘留的外源Cry1Ac/Cry1Ab蛋白質(zhì)，但在試驗(yàn)組豬只的唾液中檢測(cè)到了有0.26 μg/μL外源 Cry1Ac/Cry1Ab 蛋白質(zhì)，由于在同組豬只的尿液和血液中并沒(méi)有檢測(cè)到外源Cry1Ac/Cry1Ab蛋白質(zhì)的殘留，故其原因可能是口腔中還未消化完全的轉(zhuǎn)Bt基因飼糧導(dǎo)致的。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因糙米作為動(dòng)物飼糧飼用，糙米中的外源基因及其表達(dá)蛋白質(zhì)會(huì)同糙米本身原有的自身蛋白質(zhì)一樣通過(guò)動(dòng)物的消化道進(jìn)行消化分解，未在動(dòng)物機(jī)體中殘留，也沒(méi)有通過(guò)動(dòng)物的排泄物進(jìn)入生態(tài)環(huán)境對(duì)生態(tài)環(huán)境造成危機(jī)。

4 結(jié)論

轉(zhuǎn)Bt基因糙米未對(duì)生長(zhǎng)豬的組織器官造成生理結(jié)構(gòu)的損傷，同時(shí)未在生長(zhǎng)豬的組織器官、血液、尿液、食糜、糞便中檢測(cè)到轉(zhuǎn)Bt基因糙米中的外源蛋白質(zhì)和外源基因。可以認(rèn)為轉(zhuǎn)Bt基因糙米中的外源蛋白質(zhì)和外源基因與水稻中的常規(guī)蛋白質(zhì)和基因一樣在生長(zhǎng)豬體內(nèi)被消化代謝完全，不會(huì)在動(dòng)物體內(nèi)殘留，也不會(huì)通過(guò)排泄物造成生態(tài)污染。

［1］ 曹正輝，王占彬，顧憲紅.轉(zhuǎn)基因水稻飼用安全性評(píng)價(jià)的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2013，40(11):88－92.

［2］ FANG H，DONG B，YAN H，et al.Effect of vegetation of transgenic Bt rice lines and their straw amendment on soil enzymes，respiration，functional diversity and community structure of soilm icroorganisms under field conditions［J］.Journal of Environmental Sciences，2012，24(7):1259－1270.

［3］ PHIPPS R H，DEAVILLE E R，MADDISON B C.Detection of transgenic and endogenous plant DNA in rumen fluid，duodenal digesta，m ilk，blood，and feces of lactating dairy cows［J］.Journal of Dairy Science，2003，86(12):4070－4078.

［4］ CHOWDHURY E H，SHIMADA N，MURATA H，et al.Detection of Cry1Ab protein in gastrointestinal contents but not visceral organs of genetically modified Bt11-fed calves［J］.Veterinary and Human Toxicology，2003，45(2):72－75.

［5］ CHOWDHURY E H，KURIBARA H，HINO A，et al.Detection of corn intrinsic and recombinant DNA fragments and Cry1Ab protein in the gastrointestinal contents of pigs fed genetically modified corn Bt11［J］.Journal of Animal Science，2003，81(10):2546－2551.

［6］ 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.NY/T65—2004豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)［S］.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2004.

［7］ 譚建莊，劉莎莎，孫哲，等.抗草甘膦轉(zhuǎn)基因豆粕對(duì)肉仔雞腸黏膜免疫的影響［J］.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2011，23(5):836－841.

［8］ YONEMOCHIC，SUGA K，HARADA C，et al.Tevaluation of transgenic event CBH 351(StarLink)corn in pig［J］.Animal Science Journal，2010，81(1):94－101.

［9］ 楊月欣，陳淑蓉，韓軍花，等.轉(zhuǎn)SCK基因大米的營(yíng)養(yǎng)學(xué)評(píng)價(jià)——小型豬比較喂養(yǎng)研究［J］.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2005，27(1):38－41，45.

［10］ HAMMOND B，DUDEK R，LEMEN J，et al.Results of a 13 week safety assurance study w ith rats fed grain from glyphosate tolerant corn［J］.Food and Chem ical Toxicology，2004，42(6):1003－1014.

［11］ HAMMOND B，LEMEN J，DUDEK R，et al.Results of a 90-day safety assurance study w ith rats fed grain from corn rootworm-protected corn［J］.Food and Chem ical Toxicology，2006，44(2):147－160.

［12］ CAO S，HE X，XU W，et al.Safety assessment of Cry1C protein from genetically modified rice according to the national standards of PR China for a new food resource［J］.Regulatory Toxicology and Pharmacology，2010，58(3):474－481.

［13］ WALSH M C，BUZOIANU S G，REA M C，et al.Effects of feeding Bt MON810 maize to pigs for 110 days on peripheral immune response and digestive fate of the cry1Ab gene and truncated Bt toxin［J］.PloS One，2012，7(5):e36141.

［14］ BUZOIANU S.Fate of transgenic DNA and protein in pigs fed genetically modified Bt maize and effects on grow th and health［D］.Ph.D.Theses.Waterford:Waterford Institute of Technology，2011.

［15］ TONY M A，BUTSCHKE A，BROLL H，et al.Safety assessment of Bt176 maize in broiler nutrition:degradation of maize-DNA and its metabolic fate［J］.Archives of Animal Nutrition，2003，57(4):235－252.

［16］ JENNINGS JC，ALBEE L D，KOLWYCK D C，etal.A ttempts to detect transgenic and endogenous plant DNA and transgenic protein in muscle from broilers fed yield gard corn borer corn［J］.Poultry Science，2003，82(3):371－380.

［17］ JENNINGS JC，KOLWYCK D C，KAYS S B，et al.Determ ining whether transgenic and endogenous plant DNA and transgenic protein are detectable in muscle from sw ine fed Roundup Ready soybean meal［J］.Journal of Animal Science，2003，81(6):1447－1455.

［18］ ROSSI F，MORLACCHINI M，F(xiàn)USCONI G，et al.Effect of Bt corn on broiler grow th performance and fate of feed-derived DNA in the digestive tract［J］.Poultry Science，2005，84(7):1022－1030.

［19］ ASH J，NOVAK C，SCHEIDELER S E.The fate of geneticallymodified protein from Roundup Ready soybeans in laying hens1［J］.The Journal of Applied Poultry Research，2003，12(2):242－245.

［20］ CHEN M，YE G Y，LIU Z C，et al.Analysis of Cry1Ab toxin bioaccumulation in a food chain of Bt rice，an herbivore and a predator［J］.Ecotoxicology，2009，18(2):230－238.

［21］ 劉莎莎.轉(zhuǎn)基因豆粕對(duì)肉仔雞飼用安全性的研究［D］.碩士學(xué)位論文.長(zhǎng)春:吉林大學(xué)，2011.

［22］ 杜紅方.轉(zhuǎn)基因水稻作為肉仔雞日糧原料的安全性評(píng)價(jià)［D］.博士學(xué)位論文.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2006.

［23］ 周聯(lián)高.高賴氨酸轉(zhuǎn)基因稻谷對(duì)肉仔雞飼用安全性的研究［D］.碩士學(xué)位論文.江蘇:揚(yáng)州大學(xué)，2009.

［24］ 王長(zhǎng)康，陳文炳，邵碧英，等.飼料中的轉(zhuǎn)基因成分在家禽體內(nèi)代謝殘留的研究［J］.食品科學(xué)，2007，28(8):428－432.

［25］ 朱元招，尹靖東，李德發(fā)，等.生長(zhǎng)豬對(duì)轉(zhuǎn)基因豆粕外源DNA 的代謝研究［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2005，36(10):1083－1086.

［26］ CHOWDHURY E H，KURIBARA H，HINO A，et al.Detection of corn intrinsic and recombinant DNA fragments and CrylAb protein in gastrointestinal of pig fed genetically modified corn Bt11［J］.Journal of Animal Science，2003，81(10):2546－2551.