劉亞平， 張金艷， 孫東立

(1.黑龍江八一農(nóng)墾大學農(nóng)學院，黑龍江大慶 163319；2.黑龍江勝利農(nóng)場農(nóng)業(yè)中心，黑龍江饒河 156324；3.黑龍江八一農(nóng)墾大學理學院，黑龍江大慶 163319；4.黑龍江農(nóng)墾科學院測試化驗中心，黑龍江佳木斯 154000 )

近年來，農(nóng)藥在蔬菜上使用呈逐年增加趨勢，但是蔬菜農(nóng)藥殘留成為不容忽視的問題。我國目前在蔬菜生產(chǎn)中使用的農(nóng)藥主要有有機磷農(nóng)藥、氨基甲酸酯類農(nóng)藥、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥、蘇云金桿菌(Bt)系列農(nóng)藥、阿維菌素系列農(nóng)藥、昆蟲激素類農(nóng)藥等。從2007年1月1日起我國已經(jīng)全面禁止甲胺磷、久效磷、甲基對硫磷、對硫磷、磷胺5種高毒劇毒農(nóng)藥在蔬菜上的使用。蔬菜生產(chǎn)中禁止使用的農(nóng)藥品種有三氯殺螨醇、殺螟威、氧化樂果、甲基異硫磷、水胺硫磷、甲拌磷(3911)、馬拉硫磷、速滅威、呋喃丹等；蔬菜生產(chǎn)中限制使用的農(nóng)藥品種有：滅多威(萬靈)、敵敵畏、敵百蟲、毒死蜱、樂果、克螨特、乙酰甲胺磷等。

在這種形勢下，蔬菜農(nóng)藥殘留的趨勢是禁用農(nóng)藥殘留較少見，而非禁用農(nóng)藥殘留超標問題突出。有機磷急性中毒可以導致生命危險,長期低劑量接觸或食用有機磷污染的食品對人體潛在危害大。由于劇毒有機磷農(nóng)藥被限制生產(chǎn)和使用，毒死蜱、敵百蟲作為它們的替代品，使用量正逐年增加。雖然毒死蜱相對其他的有機磷農(nóng)藥毒性低，但是近年來，關(guān)于其對人體和環(huán)境的安全性問題越來越引起人們的注意[1]。敵百蟲導致人類中毒以及其慢性毒性作用已有報道，超量使用容易發(fā)生急性中毒,長期食用會形成慢性中毒,甚至致癌、致畸，是強污染農(nóng)藥之一[2]。

農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)主要有酶抑制率法、生物傳感器法和免疫法等，在我國應用最多的是酶抑制率法[3]，是檢測這兩類農(nóng)藥殘留是否超標的主要方法。但是，該種檢測方法易出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象干擾檢測結(jié)果，如韭菜、生姜、大蒜等有刺激氣味蔬菜或某些特殊蔬菜，如生菜等。王亞飛等[4]對韭菜濾液進行 80 ℃加熱20 min處理，桑園園等[5]對4種辛辣蔬菜蒜苗、蒜黃、大蒜、韭菜提取液分別進行110、100、120、 80 ℃加熱處理，消除假陽性。筆者采用酶抑制率法對勝利農(nóng)場的蔬菜農(nóng)藥殘留情況進行檢測，旨在為準確檢測蔬菜農(nóng)藥殘留提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料黑龍江省勝利農(nóng)場區(qū)域內(nèi)溫室大棚及露地種植的常見蔬菜，如黃瓜、豆角、小白菜、小油菜、芹菜、香菜、茄子、甘藍、大白菜、蘿卜等；市場上秋冬季南方蔬菜，如韭菜、黃瓜、辣椒、大蔥、生姜、甘藍、芹菜等。T6S紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)；生化培養(yǎng)箱SHP-250；電子天平：可讀性精度0.01 g；移液槍：2～100 μl，1 000～5 000 μl；其他玻璃儀器。磷酸鹽緩沖液(pH=8.0)，乙酰膽堿酯酶，碘化硫代乙酰膽堿，5,5-二硫代-2,2-二硝基苯甲酸(DTNB)。90%敵百蟲(湖北沙隆達股份有限公司)；40%氧化樂果乳油(杭州金瑞豐生物科技有限公司)；3%呋喃丹顆粒劑(邢臺市農(nóng)藥有限公司)；480 g/L毒死蜱乳油(美國陶氏益農(nóng)公司)。

1.2方法選取代表性的蔬菜樣品，用紙擦去表面泥土，葉菜類剪成1 cm左右見方的碎片，果菜從表皮至果肉1.0～1.5 cm處取樣。稱取樣品2 g，放入150 ml三角瓶中，加入緩沖液10 ml，震蕩1～2 min過濾。吸取濾液2.5 ml加入0.1 ml酶液，0.1 ml顯色劑，搖勻后放入37 ℃恒溫箱中抑制15 min，然后加入0.1 ml底物搖勻后立即放入分光光度計，記錄3 min吸光度變化值。檢測結(jié)果按公式計算：抑制率 (%)=[ (DA0-DAt)/DA0]×100 ，式中：DA0為對照溶液反應3 min吸光度的變化值；DAt為樣品溶液反應3 min吸光度的變化值；結(jié)果以抑制率50%為陽性標準，重復檢測2次。

參考以上4種農(nóng)藥酶抑制率法最低檢測限和蔬菜上最低限量(表3)，分別設置一定濃度梯度，以緩沖液為介質(zhì)，進行酶抑制率檢測。對易產(chǎn)生假陽性的蔬菜，如韭菜、生姜，對濾液于80 ℃加熱10、20 min，測定其酶抑制率。濾液加熱后會出現(xiàn)渾濁和絮狀物，應過濾后進行檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留情況從表1、2可知，本地種植的蔬菜農(nóng)藥超標率較低，超市的春季和冬季的蔬菜主要來自于南方，農(nóng)藥殘留量比較大。主要殘留超標農(nóng)藥為毒死蜱，未檢出其他3種農(nóng)藥。

表1 勝利農(nóng)場區(qū)域內(nèi)溫室、大棚、露地蔬菜農(nóng)藥殘留檢出情況

表2 勝利農(nóng)場超市蔬菜農(nóng)藥殘留檢出情況

注：韭菜和生姜的平均抑制率均為加熱后測得的。

對易產(chǎn)生假陽性的韭菜和生姜，在每次抽樣檢測的同時，進行80 ℃加熱處理的檢測。具體結(jié)果見圖1。

從圖1可以看出，韭菜濾液經(jīng)加熱處理后抑制率均有下降，加熱10和20 min抑制率差別很大，處理韭菜假陽性以80 ℃加熱20 min為宜。韭菜樣品4經(jīng)加熱20 min抑制率幾乎無變化，經(jīng)過氣相色譜驗證，檢出毒死蜱農(nóng)藥殘留超標，含量為0.58 mg/kg。韭菜中毒死蜱國家最低限量值為0.1 mg/kg，超標近6倍。而韭菜樣品5和樣品6加熱后抑制率仍近40%，色譜檢測同樣是毒死蜱超標。結(jié)果表明：以抑制率50%為陽性標準易產(chǎn)生假陽性，應以小于35%為合格蔬菜，以抑制率35%～50%為可疑農(nóng)藥超標蔬菜，大于50%為農(nóng)藥超標蔬菜，后2種情況需用色譜法定性定量檢測。而其他假陽性蔬菜，80 ℃加熱20 min后消除了假陽性，抑制率小于35%，色譜法也未檢測出農(nóng)藥殘留，可見酶抑制率法和色譜法的結(jié)果基本一致。

圖1 易產(chǎn)生假陽性蔬菜80 ℃處理的抑制率情況

2.2不同濃度的農(nóng)藥抑制率情況由圖2可知，若以抑制率20%為檢測限，結(jié)果表明氧化樂果含量為3 mg/kg，毒死蜱含量為0.030 mg/kg、敵百蟲含量為0.001 mg/kg，呋喃丹含量為0.001 mg/kg時檢出。該方法對敵百蟲和呋喃丹靈敏度高，較氣相色譜法檢出限還低約1個數(shù)量級，毒死蜱檢出限和氣相色譜基本一致，而氧化樂果靈敏度差，遠遠高于氣相色譜檢出限和國家限量值。

3 結(jié)論

利用酶抑制率法對勝利農(nóng)場前期蔬菜進行抽樣檢測，春季本地大棚、溫室和露地的蔬菜農(nóng)藥殘留不超標，農(nóng)藥殘留超標的蔬菜主要為夏季本地的小白菜和秋冬季外運南方的韭菜，蔬菜樣品超標率為3.9%，高毒和禁用的農(nóng)藥沒有檢出，作為高毒農(nóng)藥的替代品，毒死蜱殘留問題嚴重。本研究采用酶抑制法檢測四種有機磷類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留方法快速有效，對敵百蟲和呋喃丹的靈敏度比氣相色譜法檢出限還低約1個數(shù)量級，毒死蜱的檢出限也能達到氣相色譜的標準，而對氧化樂果的農(nóng)藥殘留檢測靈敏度差，最低檢出濃度遠遠高于氣相色譜檢出限和國家限量值，不適宜用該方法來檢測其殘留。

圖2 不同濃度農(nóng)藥平均抑制率

[1] 秦鈕慧,王以燕. 美國關(guān)于毒死蜱的最新決定[J].世界農(nóng)藥,2000,22(5):54,46.

[2] 祝海珍.敵百蟲殘留的萃取、分離與檢測的研究和重金屬離子的芯片毛細管電泳分離檢測[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學，2008：1-109.

[3] 衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所.GB/T 5009．199-2003．蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測[S]．北京：中國標準出版社，2004.

[4] 王亞飛,張金艷.植物酯酶法快速檢測蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留 [D].大慶：黑龍江八一農(nóng)墾大學，2010: 1-41.

[5] 桑園園，柴麗娜，魏朝俊. 酶抑制率法檢測4種辛辣蔬菜農(nóng)藥殘留假陽性消除的研究[J].中國農(nóng)學通報，2009，25(11)：60-64.