任婧宇白莉

白介素-23/白介素-17通路與基質(zhì)金屬蛋白酶-9在扁平苔蘚中的表達(dá)及意義

任婧宇①白莉①

目的：探討白介素-23（IL-23）/白介素-17（IL-17）通路與基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）在扁平苔蘚皮損中的表達(dá)及意義。方法：應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)IL-23、IL-17和MMP-9在20例扁平苔蘚皮損和20例正常人皮膚組織中的表達(dá)情況。結(jié)果：扁平苔蘚組IL-23、IL-17和MMP-9的表達(dá)均明顯高于健康對(duì)照組，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。扁平苔蘚組IL-23與IL-17的表達(dá)呈正相關(guān)（P＜0.01）；扁平苔蘚組IL-23、IL-17與MMP-9的表達(dá)均呈正相關(guān)（P＜0.01）。結(jié)論：IL-23/IL-17通路的過度激活和MMP-9的高表達(dá)可能參與了扁平苔蘚的發(fā)病。

扁平苔蘚； 白介素-23； 白介素-17； 基質(zhì)金屬蛋白酶-9

扁平苔蘚（Lichen planus，LP）是一種常見的慢性炎癥性復(fù)發(fā)性皮膚病，自1869年Wilson報(bào)道此病以來，目前病因及發(fā)病機(jī)制尚未清楚。光學(xué)顯微鏡下可看到LP的基底膜帶的完整性遭到破壞。有研究證實(shí)，基質(zhì)金屬蛋白酶-9 （MMP-9）可降解基底膜帶。白介素-23（IL-23）是近年來發(fā)現(xiàn)的白介素-12（IL-12）細(xì)胞因子家族的新成員，主要作用于Th17細(xì)胞，刺激Th17細(xì)胞的擴(kuò)增和維持。白介素-17 （IL-17）是Th17細(xì)胞分泌的特征性細(xì)胞因子，在促炎癥反應(yīng)、參與自身免疫性疾病的發(fā)生等方面發(fā)揮著重要作用。依賴IL-23的信號(hào)途徑在IL-17的致病過程中起重要的作用，目前發(fā)現(xiàn)IL-23/IL-17通路的異常與多種自身免疫性疾病的發(fā)病有關(guān)。本文通過檢測(cè)IL-23、IL-17和MMP-9在LP中的表達(dá)，初步探討三者在LP發(fā)病過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 標(biāo)本來源 病例組選取本院皮膚科20例經(jīng)臨床和病理檢查確診的扁平苔蘚患者。其中男14例，女6例；年齡35～63歲，平均37.6歲；取材部位為軀干13例、四肢7例。對(duì)照組20例，來自于本院整形科的正常人皮膚，其中男13例，女7例；年齡25～59歲，平均32.5歲；取材部位為頭面6例，軀干8例，四肢6例。兩組在近半年內(nèi)均未使用過糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑等治療，均無全身系統(tǒng)性疾病。兩組在性別、年齡和取材部位上比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本實(shí)驗(yàn)獲醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有標(biāo)本的取材均由患者簽署知情同意書。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 兔抗人IL-23、IL-17、MMP-9多克隆抗體購自北京博奧森生物技術(shù)公司；二步法PV-6001免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑盒購自北京中杉生物技術(shù)公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)法 采用PV-6001二步法，載玻片用多聚賴氨酸處理后干燥備用；石蠟標(biāo)本連續(xù)切片；常規(guī)二甲苯脫蠟至酒精水化；蒸餾水沖洗3 min，加3% H2O2滅活內(nèi)源性過氧化物酶；在枸櫞酸鈉緩沖液中高壓加熱（IL-23加熱15 s，IL-17加熱15 s，MMP-9加熱30 s）進(jìn)行抗原修復(fù)；滴加一抗（IL-23原液1：150稀釋，IL-17原液1：150稀釋，MMP-9原液1：100稀釋）；4 ℃過夜，后滴加二抗PV-6001，37 ℃孵育20 min，DAB顯色；蘇木素復(fù)染；封片。

1.2.2 結(jié)果判定 IL-23、IL-17、MMP-9以胞質(zhì)呈棕黃色為陽性，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野，利用MIAS-2000圖像分析系統(tǒng)分析陽性區(qū)域積分光密度（IOD）值，以IOD值大小代表陽性產(chǎn)物表達(dá)的多少。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，指標(biāo)間相關(guān)性采用Pearon相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化結(jié)果 LP皮損中IL-23、IL-17和MMP-9主要表達(dá)于表皮細(xì)胞的全層和真皮淺層的淋巴細(xì)胞的胞質(zhì)中，而在正常皮膚中在棘細(xì)胞層、基底層可見弱陽性表達(dá)；三者在LP皮損組和正常皮膚中的表達(dá)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

表1 IL-23、IL-17和MMP-9在扁平苔蘚和正常皮膚組織中的表達(dá)（±s）

表1 IL-23、IL-17和MMP-9在扁平苔蘚和正常皮膚組織中的表達(dá)（±s）

組別 IL-23 IL-17 MMP-9扁平苔蘚組（n=20） 37.97±1.71 28.16±1.98 14.82±2.31正常皮膚組（n=20） 28.57±1.78 11.39±1.96 6.29±1.99 t值 17.038 26.868 12.496 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.2 相關(guān)性分析 扁平苔蘚組IL-23與IL-17的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.578，P＜0.01）；扁平苔蘚組IL-23、IL-17與MMP-9的表達(dá)均呈正相關(guān)（r=0.722，P＜0.01；r=0.625，P＜0.01）。

3 討論

LP的病理改變主要是表皮基底細(xì)胞液化變性和真皮淺層淋巴細(xì)胞呈帶狀浸潤。基底膜帶位于表皮和真皮之間，其主要成分是層粘連蛋白和Ⅳ型膠原，基底膜帶一旦損傷，基底細(xì)胞失去支撐作用就會(huì)脫落，導(dǎo)致基底細(xì)胞液化變性。有研究表明，在扁平苔蘚的發(fā)病中，基底膜帶的損傷起重要作用。基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是一類在結(jié)構(gòu)和功能上具有相似性的Zn2+依賴性內(nèi)肽酶，MMP-9是其中的一員，可以降解層粘連蛋白和Ⅳ型膠原，從而參與基底膜帶的降解[1]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，MMP-9在LP皮損處過度表達(dá)，而在正常皮膚組織中弱陽性表達(dá)，這與張紫燕等[2]的研究結(jié)果一致。

IL-23是由亞單位p19和IL-12的p40通過二硫鍵形成的異源二聚體。IL-23與其特有受體（IL-23R）結(jié)合后，通過JAK/STAT3的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路介導(dǎo)STAT3的磷酸化過程，激活STAT3，從而對(duì)多種細(xì)胞發(fā)揮作用，產(chǎn)生相應(yīng)的細(xì)胞效應(yīng)，如促炎癥、抗原提呈、參與腫瘤免疫等。Th17細(xì)胞是近年來發(fā)現(xiàn)的一類新的CD4+T細(xì)胞，參與多種自身免疫性疾病、感染性疾病及腫瘤的發(fā)病過程。IL-17是Th17細(xì)胞產(chǎn)生的最主要的細(xì)胞因子，IL-17與其受體（IL-17R）結(jié)合后通過激活MAP激酶和NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而作用于各類細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的細(xì)胞效應(yīng)。

研究證實(shí)，IL-23刺激Th17細(xì)胞的擴(kuò)增和維持[3]。在轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）-β和IL-6的共同作用下，能夠刺激Th0細(xì)胞向Th17細(xì)胞的初始分化，從而產(chǎn)生IL-17，而在此過程中產(chǎn)生的IL-10又能抑制IL-17介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，而依賴IL-23信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活的Th17細(xì)胞產(chǎn)生的IL-17則能介導(dǎo)炎癥反應(yīng)[4]。在膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎的動(dòng)物模型上發(fā)現(xiàn)，敲除IL-23p19基因，可以明顯降低IL-17的產(chǎn)生，疾病的發(fā)生率以及嚴(yán)重程度均得到減輕[5]。因此，有學(xué)者提出了IL-23/IL-17通路學(xué)說。目前已有報(bào)道，IL-23/IL-17通路在多種自身免疫性疾病如尋常型天皰瘡的發(fā)病中起關(guān)鍵作用[6]。最新研究發(fā)現(xiàn)，IL-23介導(dǎo)的銀屑病樣表皮增生依賴于IL-17等細(xì)胞因子，揭示IL-23/IL-17通路的異常在銀屑病的發(fā)病中可能起關(guān)鍵作用[7]。本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，LP皮損中IL-23、IL-17的表達(dá)較健康對(duì)照組均明顯增高，且兩者的表達(dá)呈正相關(guān)，推測(cè)IL-23/IL-17通路的過度激活在LP的發(fā)病中起重要作用。

在對(duì)食管癌和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的研究中發(fā)現(xiàn)，IL-17可以促進(jìn)MMP-9的表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和關(guān)節(jié)軟骨的破壞[8-9]。且有學(xué)者通過體外實(shí)驗(yàn)證明，兩者的表達(dá)呈現(xiàn)明顯的劑量依賴效應(yīng)[9]。本文通過實(shí)驗(yàn)也證明了兩者的表達(dá)呈正相關(guān)。因此推測(cè)，LP中依賴IL-23信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而產(chǎn)生的IL-17通過誘導(dǎo)MMP-9的表達(dá)，進(jìn)而參與基底膜的損傷。損傷的基底膜不但使存活素產(chǎn)生減少，誘發(fā)相鄰角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡，而且有利于T細(xì)胞向表皮內(nèi)遷移而形成炎癥放大反應(yīng)加劇損傷[10]。

綜上所述，提示IL-23/IL-17細(xì)胞通路的過度激活是MMP-9表達(dá)增高的原因之一，可導(dǎo)致基底膜的破壞和慢性炎癥浸潤，如抑制IL-23/IL-17細(xì)胞通路的過度激活，可能成為治療LP的新靶點(diǎn)。

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The Expressions and Significances of Interleukin-23/Interleukin-17 Access and Matrixmetalloproteinase-9 in Lichen Planus Lesions

/REN J ing-yu，BAI Li.//Medical Innovation of China，2014，11（08）：015-016

Objective：To explore the expressions of interleukin-23（IL-23）/interleukin-17（IL-17） access and matrixmetalloproteinase-9 in lichen planus lesions and their significance.Method：The expressions of IL-23，IL-17 and MMP-9 were performed by immunohistochemical method using streptavidin-peroxidase in 20 LP lesions and 20 normal skins.Result：The expressions of IL-23，IL-17 and MMP-9 in lichen planus lesions were significantly higher than those in normal skins（P＜0.01）. In LP lesions， the expressions of IL-23 were positively correlated with the expressions of IL-17（P＜0.01）；the expressions of IL-23 and IL-17 were positively correlated with the expressions of MMP-9（P＜0.01）.Conclusion：The high expressions of IL-23/IL-17 access and MMP-9 may contribute to the pathogenesis of lichen planus.

Lichen planus； Interleukin-23； Interleukin-17； Matrixmetalloproteinase-9

10.3969/j.issn.1674-4985.2014.08.007

2014-01-08） （本文編輯：黃新珍）

①山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院 山西 太原 030001

白莉

First-author’s address： The First Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China