董昕欣，劉 偉，邴國霞，張劭俁，李文京，王傳彬，原 霖，韓 雪，張 碩，李雁冰，郭建宏

（1.中國動物疫病預(yù)防控制中心，北京 朝陽100125；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，黑龍江 哈爾濱150001；3.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，甘肅 蘭州730046）

獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室是指隸屬于各級獸醫(yī)主管部門，承擔(dān)動物疫病檢測、診斷和監(jiān)測等任務(wù)的獸醫(yī)實驗室。按照《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》[1]，獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室作為動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)的組成部分，主要承擔(dān)動物疫病診斷和檢測、動物疫情和免疫狀況監(jiān)測、動物疫病防控科學(xué)研究等工作，對動物疫病防控發(fā)揮著重要支撐作用。開展獸醫(yī)實驗室檢測能力比對，是評價獸醫(yī)實驗室檢測技術(shù)水平的重要手段，也是加強(qiáng)獸醫(yī)實驗室質(zhì)量控制的有效方法[2]。為提高全國各省級獸醫(yī)實驗室的檢測能力和技術(shù)水平，按農(nóng)業(yè)部要求，中國動物疫病預(yù)防控制中心組織實施了2014年省級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室能力比對，全國32個省級獸醫(yī)實驗室全部參加，在規(guī)定時間內(nèi)完成了比對樣品制備、分發(fā)、檢測和結(jié)果回收。比對結(jié)果客觀反映了實驗室的檢測能力和技術(shù)水平，對該結(jié)果進(jìn)行分析討論有利于進(jìn)一步做好獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室管理工作。報告如下。

1 比對計劃

本次比對依據(jù)農(nóng)業(yè)部辦公廳和中國動物疫病預(yù)防控制中心有關(guān)2014年獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對的文件[3-4]要求，共設(shè)置4個比對項目，分別是H7N9亞型禽流感抗體（H7N9-AIAb）檢測、口蹄疫病毒（FMDV）檢測、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）檢測、禽白血病病毒（ALV）檢測。全國共有32個省級獸醫(yī)實驗室（含新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)）參加此次比對。

2 比對方法

2.1 試驗方法與標(biāo)準(zhǔn) 針對4個檢測能力比對項目，采用國家參考實驗室或?qū)I(yè)實驗室推薦的方法和試劑，其中部分試劑由參加比對的省級實驗室自行準(zhǔn)備，見表1。

表1 比對試驗的方法、標(biāo)準(zhǔn)和主要試劑

2.2 比對樣品制備

2.2.1 制備方式 各國家參考實驗室和專業(yè)實驗室分別完成相應(yīng)樣品的制備、標(biāo)定、分裝和編號，并將樣品和標(biāo)定值送交中國動物疫病預(yù)防控制中心統(tǒng)一保存，作為盲樣下發(fā)使用。

2.2.2 H7N9-AIAb樣品 雞血清抗體樣品5份，由參考值分別為＜1、4、7的3組樣品中各抽取1～2份樣品組成。

2.2.3 FMDV樣品 口蹄疫病毒樣品5份，參考值分別為陰性、O型陽性、O型陽性、A型陽性、A型陽性。

2.2.4 PRRSV樣品 豬繁殖與呼吸綜合征病毒樣品5份，參考值分別為陰性、弱陽性、弱陽性、強(qiáng)陽性、強(qiáng)陽性。

2.2.5 ALV樣品 禽白血病病毒樣品5份，由參考值分別為陰性、弱陽性、強(qiáng)陽性3組樣品中各抽取1-2份樣品組成。

2.3 比對樣品傳遞 比對樣品為具有生物學(xué)活性的血清、尿囊液或細(xì)胞培養(yǎng)物，為保持其良好的生物學(xué)活性，樣品存放在-20℃以下冰柜中。分發(fā)時將樣品和試劑放入裝有冰袋的保溫箱中保存，由參加比對的省級實驗室派專人在規(guī)定的時間內(nèi)統(tǒng)一領(lǐng)取，并在12 h之內(nèi)送達(dá)參加比對的實驗室。

2.4 評判標(biāo)準(zhǔn)

2.4.1 H7N9-AI檢測評判標(biāo)準(zhǔn) 檢測值與參考值的偏差不超過1個滴度，判為結(jié)果準(zhǔn)確。

2.4.2 FMDV檢測評判標(biāo)準(zhǔn) O型陽性和A型陽性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陽性”；陰性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

2.4.3 PRRSV檢測評判標(biāo)準(zhǔn) 強(qiáng)陽性和弱陽性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陽性”；陰性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

2.4.4 ALV檢測評判標(biāo)準(zhǔn) 強(qiáng)陽性和弱陽性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陽性”；陰性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

3 比對結(jié)果

3.1 總體結(jié)果 根據(jù)比對結(jié)果評判標(biāo)準(zhǔn)，在32個參加省級實驗室中，有29個實驗室對所有項目的檢測結(jié)果全部準(zhǔn)確，有3個實驗室部分比對項目檢測值存在較大偏差。出現(xiàn)較大偏差的主要是H7N9亞型禽流感抗體血凝抑制試驗檢測項目，見表2。

表2 32個實驗室比對結(jié)果統(tǒng)計

3.2 H7N9-AIAb檢測比對結(jié)果 30個實驗室的檢測結(jié)果全部正確，說明大多數(shù)實驗室在血凝抑制技術(shù)方面較為成熟。1個實驗室（第23號）對參考值4log2樣品的檢測結(jié)果出現(xiàn)錯誤，高于參考值兩個滴度。1個實驗室（第28號）對參考值4log2樣品的檢測結(jié)果出現(xiàn)錯誤，低于參考值兩個滴度。

對于參考值相同的雙份重復(fù)樣品的檢測，大部分實驗室（30/32）檢測結(jié)果自身重復(fù)性較好，說明絕大部分實驗室的隨機(jī)誤差較??；而第23號、第25號2個實驗室對于參考值相同的兩份樣品檢測值不一致，反映出這些實驗室在質(zhì)控體系方面存在問題。結(jié)果見圖1。

3.3 FMDV檢測比對結(jié)果 32個實驗室對FMDV弱強(qiáng)陽性和陰性樣品的檢測結(jié)果全部正確，見表3。

圖1 各實驗室H7N9-AI檢測值離散

表3 各實驗室FMDV檢測結(jié)果頻次與參考值對照

3.4 PRRSV檢測比對結(jié)果 31個實驗室對PRRSV弱強(qiáng)陽性和陰性樣品的檢測結(jié)果全部正確，1個實驗室1份弱陽性樣品檢測結(jié)果為陰性。見表4。

表4 各實驗室PRRSV檢測結(jié)果頻次與參考值對照

3.5 ALV檢測比對結(jié)果 32個實驗室對ALV弱強(qiáng)陽性和陰性樣品的檢測結(jié)果全部正確，見表5。

表5 各實驗室ALV檢測結(jié)果頻次與參考值對照

4 討論

從比對結(jié)果來看，在參加比對的32個省級獸醫(yī)實驗室中，有29個實驗室對所有項目的檢測結(jié)果全部準(zhǔn)確，有3個實驗室部分比對項目檢測值存在較大偏差，說明大部分省級獸醫(yī)實驗室具備相應(yīng)的檢測能力和技術(shù)水平。出現(xiàn)較大偏差的主要是H7N9亞型禽流感抗體血凝抑制試驗檢測項目，說明定量或半定量的血清學(xué)檢測項目，其難度和要求大于定性的分子生物學(xué)檢測項目；也說明這部分實驗室在半定量的檢測技術(shù)方面還不夠穩(wěn)定。

本次實驗室檢測能力比對中設(shè)置了平行樣品，用以評估實驗室檢測體系的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，大部分實驗室的檢測結(jié)果平行性好，僅少數(shù)實驗室對參考值相同的兩份樣品的檢測值不一致。這說明部分實驗室在檢測中存在較多的隨機(jī)誤差，應(yīng)當(dāng)更加明確各個操作環(huán)節(jié)的細(xì)節(jié)要求，減少隨意性操作，增加實驗室檢測結(jié)果的穩(wěn)定性。

血清學(xué)檢測和病原學(xué)檢測是獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室的基礎(chǔ)檢測方法，本次比對的試驗項目包含了血凝抑制試驗、ELISA、PCR、熒光定量PCR等多種常用方法；檢測的疫病類別也涵蓋了當(dāng)前重點防控的幾個重大動物疫病，因此比對結(jié)果能客觀地反映實驗室的檢測能力和技術(shù)水平。我國以前在獸醫(yī)領(lǐng)域開展實驗室檢測能力比對相對較少，出入境檢疫系統(tǒng)曾開展過禽流感AGID抗體的定性檢測及H5、H9亞型HI抗體定量檢測的比對[7]，部分動物疫控實驗室參加過國際間或地方實驗室自發(fā)組織的比對，而本次比對是全國范圍的省級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室之間的比對，對于即將全面開展的全國各市、縣級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室比對具有一定的借鑒意義。

[1]國務(wù)院辦公廳.國務(wù)院辦公廳關(guān)于印發(fā)國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）的通知[Z].國辦發(fā)[2012]31號.北京：國務(wù)院辦公廳，2012-05-20.

[2]王文，張繼紅，蘭玲，等.2010年新疆獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對試驗的探討與建議[J].中國動物檢疫，2011，28（9）：19-21.

[3]農(nóng)業(yè)部辦公廳.農(nóng)業(yè)部辦公廳關(guān)于開展2014年獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對工作的通知[Z].農(nóng)辦醫(yī)[2014]13號.北京：農(nóng)業(yè)部辦公廳，2014-03-28.

[4]中國動物疫病預(yù)防控制中心.關(guān)于印發(fā)《2014年省級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對實施方案》的通知[Z].疫控（安）[2014]48號.北京：中國動物疫病預(yù)防控制中心，2014-04-03.

[5][農(nóng)業(yè)部.農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室考核管理辦法》的通知[Z].農(nóng)醫(yī)發(fā)[2009]15號.北京：農(nóng)業(yè)部，2009-08-11.

[6]李掌林.雛議實驗室間的比對試驗工作[J].現(xiàn)代測量與實驗室管理，2004（2）：36-39.

[7]劉來福，張鶴曉，張利峰，等.家禽禽流感病毒AGID抗體定性檢測及H5、H9亞型HI抗體定量檢測能力驗證結(jié)果分析[J].現(xiàn)代測量與實驗室管理，2004（2）：29-32