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        獺兔源性大腸桿菌對小鼠的致病性研究

        2014-03-11 16:05:12王艷萍徐倩倩郭時金沈志強(qiáng)
        中國獸醫(yī)雜志 2014年10期
        關(guān)鍵詞:獺兔濱州致病性

        王艷萍,董 林,徐倩倩,郭時金,沈志強(qiáng)

        (1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院,山東 濱州256600;2.山東綠都安特動物藥業(yè)有限公司,山東 濱州256600)

        大腸桿菌O123是主要寄生于人和動物腸道內(nèi)的一種細(xì)菌,本文中大腸桿菌O123是由規(guī)?;H兔養(yǎng)殖場分離的一株致獺兔大腸桿菌性腹瀉的一種大腸桿菌,該菌主要引起的幼兔、仔兔腸道傳染病,以水樣、膠凍樣糞便和嚴(yán)重脫水為主要特征。

        1 試驗(yàn)材料

        1.1 試驗(yàn)菌株 兔源大腸桿菌,分離自山東省濱州市某大型獺兔養(yǎng)殖場,經(jīng)山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院鑒定為大腸桿菌O123。

        1.2 實(shí)驗(yàn)動物 小鼠60只,體重18~22 g,購自山東省實(shí)驗(yàn)動物中心。

        2 試驗(yàn)方法

        2.1 小鼠致病性試驗(yàn) 將60只小鼠隨機(jī)分成6組,每組10只。把大腸桿菌O123進(jìn)行增菌培養(yǎng),使其含菌量為3.4×108、1.7×108、0.85×108、0.425×108和0.225×108,按0.5mL/只腹腔接種小鼠,對照組接種營養(yǎng)肉湯,攻毒后,連續(xù)觀察7 d,記錄精神狀態(tài)、飲欲、食欲、發(fā)病及死亡情況。

        2.2 臨床觀察 對感染后的小鼠每日觀察臨床癥狀,對因發(fā)病而死亡小鼠立刻剖檢,存活小鼠7日后剖檢,觀察病理變化,無菌取心、肝、脾、肺等在麥康凱平板上劃線進(jìn)行病原分離,于37℃溫箱培養(yǎng)24~48 h后進(jìn)行革蘭染色、鏡檢,觀察所分離菌株是否為攻毒細(xì)菌。若是,則證明該細(xì)菌具有致病性。

        2.3 病理組織學(xué)檢查 將心、肝、脾、肺、腎、腸等器官放入福爾馬林溶液固定,經(jīng)酒精梯度脫水、石蠟包埋、切片、H.E.染色,顯微鏡下進(jìn)行病理組織學(xué)觀察[1]。

        3 結(jié)果與分析

        3.1 臨床癥狀表現(xiàn) 以大腸桿菌O123腹腔注射小鼠,約半小時后出現(xiàn)精神委靡、食欲不振、眼瞼粘連、扎堆等現(xiàn)象,對照組小鼠沒出現(xiàn)明顯臨床癥狀。

        3.2 死亡情況 12 h后出現(xiàn)陸續(xù)死亡,第1組全部死亡,第2組死亡率7只,第3組死亡3只,第4組死亡1只,第5組全部存活。對照組小鼠沒有出現(xiàn)死亡。取攻毒死亡小鼠心、肝、脾、肺、腸系膜淋巴結(jié)等在麥康凱平板上劃線培養(yǎng),涂片染色,鏡檢,均發(fā)現(xiàn)所接種細(xì)菌。

        3.3 剖檢觀察 剖檢注射兔大腸桿菌O123的小鼠小腸黏膜水腫、變薄,有出血點(diǎn),其他臟器未見明顯眼觀病變(見中插彩版圖1)。

        3.4 組織病理學(xué)觀察 十二指腸廣泛充血、出血,腸上皮細(xì)胞變形和壞死,絨毛變短、脫落,腸腔內(nèi)有大量脫落的上皮細(xì)胞,基底膜下層水腫(見中插彩版圖2)。

        4 討論

        2011年,李基棕[2]做了豬場環(huán)境大腸桿菌對小鼠的致病性研究,發(fā)現(xiàn),小鼠出現(xiàn)精神委靡、拉稀、眼簾黏連、消瘦、被毛蓬亂等臨床癥狀,致死率達(dá)51.3%,其中來源于污水和空氣的樣本菌株對小鼠的致死率最高達(dá)66.7%。剖檢因攻毒死亡小鼠發(fā)現(xiàn),肝臟腫大、邊緣呈暗紫色、脾臟腫大、十二指腸水腫等病變。病理組織學(xué)觀察可見,肺臟出現(xiàn)毛細(xì)血管充血、肺氣腫及肺泡間隔增寬,心肌纖維排列紊亂、斷裂,肝細(xì)胞腫大、變性及肝竇出血,十二指腸腸絨毛脫落等病變,上皮細(xì)胞變性壞死。說明,豬場環(huán)境大腸桿菌對小鼠致病性較強(qiáng),以小鼠建立動物模型研究其致病機(jī)制對大腸桿菌病的診斷和防治具有重要意義。

        本試驗(yàn)以兔源大腸桿菌對昆明系小鼠攻毒結(jié)果,發(fā)現(xiàn)除十二指腸出現(xiàn)病變外,其余各器官均出現(xiàn)明顯病理變化,說明兔源大腸桿菌O123適合用于腹瀉模型的制作。

        圖1 小鼠剖檢

        圖2 十二指腸組織

        5 結(jié)論

        兔源大腸桿菌以腹腔注射0.5mLO123可用于制作小鼠腹瀉模型。

        [1]歐德淵,李詩舉,王群輝,等.高致病性豬藍(lán)耳病的病理學(xué)觀察[J].貴州畜牧獸醫(yī),2008,32(6):3-4.

        [2]李基棕,周碧君,王開功,等.豬場環(huán)境大腸桿菌對小白鼠的致病性研究[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,6(39):147-149.

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