黃建龍，王昌建，朱春霞，鄧國華，范仲鑫，何世成，王衛(wèi)國，唐小明，汪洪冰，劉道新

（1.湖南省動物疫病預(yù)防控制中心，湖南 長沙410014；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所 農(nóng)業(yè)部動物流感重點開放實驗室/獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點實驗室，黑龍江 哈爾濱150001）

禽流感（AI）是由正黏病毒科流感病毒屬A型禽流行性感冒病毒引起的一種禽類傳染病，主要在雞、鴨、鵝、鴿等家禽和野生禽中傳播，是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的重要病毒性疫病[1]。2003年以來，H5N1亞型高致病性禽流感在全球傳播，導(dǎo)致大量家禽和野生鳥類死亡。

在我國主要通過廣泛疫苗的免疫接種來控制家禽禽流感發(fā)生與流行。但部分禽類（特別是水禽）疫苗接種后所誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答水平不高，其原因是什么尚不清楚。開展家禽禽流感血清學(xué)監(jiān)測對真實準(zhǔn)確掌握家禽禽流感的免疫水平、查明隱患、切實有效的禽流感免疫防控具有十分重要的意義。洞庭湖區(qū)水禽養(yǎng)殖量較大，因此，2011-2013年，我們運用科學(xué)的監(jiān)測方法，通過采樣血清樣品和檢測，掌握洞庭湖區(qū)水禽（肉鴨、蛋鴨、種鴨）禽流感免疫抗體水平，并對免疫應(yīng)答水平不高的原因進(jìn)行調(diào)查（疫苗的質(zhì)量、種類、免疫程序等），更好地指導(dǎo)養(yǎng)殖戶免疫禽流感，使本省水禽免疫達(dá)到更高水平，結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 禽流感病毒H5亞型的標(biāo)準(zhǔn)抗原、陰性和陽性血清，均購自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司；0.1mol/L、pH7.2 PBS和l%鴨紅細(xì)胞懸液為自制。

1.2 方法

1.2.1 目標(biāo)群 目標(biāo)群為在洞庭湖區(qū)周圍的縣市水禽存欄量為200羽以上的養(yǎng)殖場（戶）。

1.2.2 抽樣方法 采用多級抽樣的方法，通過WinEpiscope2.0軟件中的Samples-Estimate Percentage計算（隨機(jī)抽樣；置信水平為90%，可接受誤差為10%，預(yù)期場群間免疫合格率為80%），我們每次需要抽取44個養(yǎng)鴨場（群）。根據(jù)洞庭湖在湖南分布的特點，分為東洞庭湖、南洞庭湖和西洞庭湖，每次釆靠近東洞庭湖、南洞庭湖和西洞庭湖各1個縣，這樣每個縣每次需要采集15個場。然后估計鴨子個體免疫抗體合格率為90%，可接受誤差為15%，置信水平為90%，通過WinEpiscope2.0軟件計算，需在每個場采11只鴨子的血清進(jìn)行禽流感H5免疫抗體的檢測。

1.2.3 血清檢測方法 血凝抑制試驗（HI），試驗嚴(yán)格按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T18936-2003）的規(guī)定操作。

1.2.4 判定標(biāo)準(zhǔn) 免疫合格個體：按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》國家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T 18936-2003），通過血凝抑制試驗（HI）檢測，抗體效價≥24。免疫合格群體：免疫合格個體數(shù)量占群體總數(shù)的70%（含）以上。

1.2.5 統(tǒng)計分析 應(yīng)用Microsoft Excel軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

2.1 鴨場禽流感H5抗體檢測情況 2011年11月、2012年3月、11月和2013年6月，先后4次對洞庭湖區(qū)的鴨場進(jìn)行禽流感監(jiān)測，在195個鴨場采了鴨血清1 948份，用血凝和血凝抑制試驗檢測，有150個場禽流感免疫抗體合格，群體合格率為76.92%，有1 515份血清禽流感H5抗體合格，個體合格率為77.77%，見表1。

2.2 鴨場養(yǎng)殖情況調(diào)查 對洞庭湖區(qū)的水禽養(yǎng)殖情況，包括養(yǎng)殖結(jié)構(gòu)、養(yǎng)殖種類、飼養(yǎng)水平、禽流感等疫苗免疫情況、生物安全措施等情況進(jìn)行調(diào)查，調(diào)查發(fā)現(xiàn)，洞庭湖區(qū)以養(yǎng)蛋鴨為主，鴨場混養(yǎng)情況比較嚴(yán)重，有雞、鴨混養(yǎng)，有雞、鴨、鵝混養(yǎng)，有雞、鴨、豬混養(yǎng)，有鴨、其他動物（野鳥）混養(yǎng)，并且很多的養(yǎng)殖戶對鴨場的消毒意識比較淡薄，基本上都進(jìn)行禽流感免疫，有部分場出現(xiàn)免疫副反應(yīng)，見表2。

表1 鴨場禽流感H5抗體檢測

表2 環(huán)洞庭湖地區(qū)鴨場養(yǎng)殖情況調(diào)查

3 討論與分析

3.1 2011年11月、2012年3月、11月和2013年6月，這4次所采的鴨血清禽流感H5抗體個體合格率分別為90.7%、59.6%、94.0%和60.86%，抗體水平差異顯著，經(jīng)初步分析，這與根據(jù)洞庭湖區(qū)鴨子的飼養(yǎng)特點和鴨子的免疫程序有關(guān)。調(diào)查顯示：養(yǎng)鴨戶一般在8～9月份購進(jìn)鴨苗進(jìn)行飼養(yǎng)，禽流感疫苗一般是在9～10月份開始注射，到11月時鴨的禽流感抗體水平較高。一般養(yǎng)殖戶在蛋鴨60日齡左右對其進(jìn)行第1次免疫，然后在產(chǎn)蛋前進(jìn)行第2次免疫，在我們所釆的蛋鴨場（戶），為了不影響蛋鴨的產(chǎn)蛋，有的在產(chǎn)蛋半年以后都不進(jìn)行再一次的加強(qiáng)免疫，這就存在很長時間的免疫空白期。有研究表明，經(jīng)過禽流感油乳疫苗4次以上免疫接種的成年水禽,其有效抗體水平維持時間也就達(dá)3～5個月左右[2]。因此，到了3月份如果不進(jìn)行加強(qiáng)免疫抗體水平就很低。其實大部分水禽對禽流感疫苗的免疫應(yīng)答較差，經(jīng)常出現(xiàn)首免后大群中20%左右的水禽無應(yīng)答，15%左右的抗體水平在23以下，而二免后才產(chǎn)生較好的抗體水平，并且首免和二免的時間間隔不能太長，建議在首免后10周的時間內(nèi)進(jìn)行二次免疫，這樣就可使鴨獲得一個較長的免疫保護(hù)期[3]。有研究顯示：在種鵝產(chǎn)蛋的1～2 h后，對其進(jìn)行禽流感免疫，可最大限度地減小對當(dāng)天的產(chǎn)蛋影響和對第2天的蛋在其體內(nèi)的形成[4]。因此，可鑒見用于鴨子在產(chǎn)蛋期的禽流感免疫。

3.2 我們在調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，洞庭湖區(qū)鴨場混養(yǎng)情況比較嚴(yán)重，有雞、鴨混養(yǎng)，有雞、鴨、鵝混養(yǎng)，有雞、鴨、豬混養(yǎng)，有鴨、其他動物（野鳥）混養(yǎng)。并且我們對其消毒情況調(diào)查顯示，很多的養(yǎng)殖戶對鴨場的消毒意識比較淡薄。我們在鴨場鴨拭子和環(huán)境拭子中都檢測到有禽流感病毒，隱形帶毒的鴨子腸道內(nèi)AIV含量特別高，并在糞便中大量排出，這種混養(yǎng)方式和消毒狀況很容易導(dǎo)致病毒的擴(kuò)散，有可能使該地區(qū)的候鳥或留鳥感染禽流感病毒，從而加速病毒的重組和變異。

[1] 甘孟侯.禽流感[M].2版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002.

[2] 張新民，郇秀榮，陳勇.水禽禽流感防制的誤區(qū)及對策[J].家禽科學(xué)，2008.9（30）：36．

[3]陳建紅，張濟(jì)培，劉佑明，等.水禽禽流感免疫防控關(guān)鍵技術(shù)與措施之二—水禽禽流感免疫監(jiān)測應(yīng)注意的問題；中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會禽病學(xué)分會第十六次學(xué)術(shù)研討會論文集[C].北京：中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會禽病學(xué)分會編，2008.

[4]黃開華，柏慶榮，陳慧.揚州鵝種鵝場H5亞型禽流感免疫效果監(jiān)測評估[J].水禽世界，2012，6：32-34.