張海艇，齊 霞

（1.山東大學(xué)新藥評(píng)價(jià)中心，山東濟(jì)南250012；2.山東大學(xué)第二醫(yī)院，山東濟(jì)南250033）

右旋雷貝拉唑鈉對(duì)動(dòng)物體內(nèi)染色體損傷的影響實(shí)驗(yàn)研究

張海艇1，齊 霞2

（1.山東大學(xué)新藥評(píng)價(jià)中心，山東濟(jì)南250012；2.山東大學(xué)第二醫(yī)院，山東濟(jì)南250033）

目的通過(guò)對(duì)右旋雷貝拉唑鈉小鼠灌胃給藥微核試驗(yàn)的研究，預(yù)測(cè)其遺傳毒性，降低臨床用藥風(fēng)險(xiǎn)。方法健康雄性BALB／c小鼠60只，按體重隨機(jī)分為低、中、高劑量組、溶媒對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組，每組6只。分別灌胃給予右旋雷貝拉唑鈉125、250、500 mg·kg－1，溶媒對(duì)照組灌胃給予滅菌蒸餾水，給藥體積40 mL·kg－1；陽(yáng)性對(duì)照組腹腔注射給予環(huán)磷酰胺50 mg·kg－1，給藥體積為20 mL·kg－1。于給藥后24 h和48 h將動(dòng)物頸椎脫臼處死，取胸骨骨髓常規(guī)制片、姬姆薩染色。顯微鏡雙盲法閱片，每只小鼠觀察2 000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞（PCE），計(jì)數(shù)出現(xiàn)微核的嗜多染紅細(xì)胞，計(jì)算微核率，并計(jì)算嗜多染紅細(xì)胞與總紅細(xì)胞比例。結(jié)果研究結(jié)果顯示，小鼠灌胃給藥24 h后，低、中、高劑量組的骨髓微核發(fā)生率分別為1.92‰、1.58‰、1.83‰，與溶媒對(duì)照組（1.75‰）相比無(wú)顯著性差異，但其與陽(yáng)性對(duì)照組之間（23.92‰）有非常顯著性差異（P＜0.01）。在灌胃給藥48 h后，低、中、高劑量組的骨髓微核發(fā)生率分別為1.75‰、1.58‰、1.50‰，與溶媒對(duì)照組（1.83‰）相比無(wú)顯著性差異，但其與陽(yáng)性對(duì)照組（21.83‰）之間具有非常顯著性差異（P＜0.01）。結(jié)論在本試驗(yàn)條件下，右旋雷貝拉唑鈉小鼠灌胃給藥微核試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

右旋雷貝拉唑鈉；小鼠；染色體損傷

雷貝拉唑（rabeprazole）是新一代質(zhì)子泵抑制劑（proton pump inhibitors，PPI），為苯并咪唑衍生物，具有較高的PKaA值，口服可在體內(nèi)快速活化，與質(zhì)子泵結(jié)合發(fā)揮抑酸作用。右旋雷貝拉唑鈉是新型的抑制胃酸分泌的藥物，右旋雷貝拉唑比左旋雷貝拉唑及消旋雷貝拉唑更顯著有效。但其進(jìn)入人體后的遺傳毒性乃至致癌性尚不明確，本研究通過(guò)判斷其是否具有誘導(dǎo)體內(nèi)染色體損傷，預(yù)測(cè)其是否具有遺傳毒性，降低臨床試驗(yàn)受試者和藥品上市后使用人群的用藥風(fēng)險(xiǎn)［1］。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試品與動(dòng)物 右旋雷貝拉唑鈉由揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供；BALB／c雄性小鼠，購(gòu)自山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：0007327。

1.1.2 主要試劑 注射用環(huán)磷酰胺由山西普德醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)；姬姆薩染液購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。

1.2 方法［2，3］

1.2.1 動(dòng)物分組及給藥方法 將60只小鼠按體重隨機(jī)分成2大組，每組再分別分為高劑量組（500 mg·kg－1）、中劑量組（250 mg·kg－1）、低劑量組（125 mg·kg－1）、溶媒對(duì)照組以及陽(yáng)性對(duì)照組（50 mg·kg－1），每組6只小鼠。陽(yáng)性對(duì)照組腹腔注射給藥，給藥容積為20 mL·kg－1；其他組為灌胃給藥，給藥容積為40 mL·kg－1，給藥前動(dòng)物空腹12～16 h，動(dòng)物給藥均為單次。

1.2.2 制片及計(jì)數(shù) 小鼠分別于給藥24 h和48 h后，頸椎脫臼處死，解剖取出胸骨，用紗布剔除粘附在胸骨的肌肉，用止血鉗擠出骨髓液，與玻片一端小牛血清混勻，常規(guī)涂片。待骨髓液干燥后，用甲醇固定，固定時(shí)間為10 min，晾干；將固定好的涂片放入姬姆薩應(yīng)用液中染色，染色時(shí)間12 min，染色結(jié)束后立即用蒸餾水沖洗，晾干寫(xiě)好標(biāo)簽，標(biāo)簽注明專(zhuān)題代號(hào)、取材時(shí)間、小鼠編號(hào)；置陰涼干燥處保存。選擇細(xì)胞完整、分散均勻、著色適當(dāng)?shù)膮^(qū)域，在油鏡下觀察。經(jīng)姬姆薩染色后，嗜多染紅細(xì)胞胞質(zhì)（PCE）呈灰藍(lán)色，正染紅細(xì)胞（NCE）呈粉紅色。微核多為單個(gè)，圓形，邊緣光滑整齊，嗜色質(zhì)與核質(zhì)一致，呈紫紅色或藍(lán)紫色，直徑約為細(xì)胞核的1／20～1／5。采用雙盲法閱片。每只小鼠計(jì)數(shù)2 000個(gè)PCE細(xì)胞，觀察含有微核的PCE細(xì)胞數(shù)，并記錄微核在玻片上的坐標(biāo)。微核率以千分率表示。每只動(dòng)物觀察200個(gè)PCE細(xì)胞，計(jì)數(shù)在觀察PCE細(xì)胞過(guò)程中見(jiàn)到的NCE細(xì)胞數(shù)，計(jì)算PCE／（NCE＋PCE）。如果受試物所誘發(fā)的微核率出現(xiàn)有劑量依賴(lài)性的升高，或某一計(jì)量組在某一測(cè)試點(diǎn)呈現(xiàn)可重復(fù)性的明顯升高，可判定為陽(yáng)性結(jié)果。

2 結(jié)果

小鼠灌胃給藥24 h后，骨髓微核發(fā)生率見(jiàn)表1，灌胃48 h后結(jié)果詳見(jiàn)表2。

表1 右旋雷貝拉唑鈉小鼠灌胃給藥24 h后對(duì)骨髓細(xì)胞微核率形成的影響（±s，n＝6）

表1 右旋雷貝拉唑鈉小鼠灌胃給藥24 h后對(duì)骨髓細(xì)胞微核率形成的影響（±s，n＝6）

注：①與Veh組相比，**P＜0.01；②PCE：嗜多染紅細(xì)胞；NCE：正染紅細(xì)胞

受試物 劑量（mg·kg－1）細(xì)胞數(shù) 微核數(shù) 微核率（‰） PCE／（NCE＋PCE）觀察500 12 000 22 1.83 0.597±0.023 Veh ／ 12 000 21 1.75 0.605±0.025 CP 50 12 000 287 23.92** 0.359±0.012**右旋雷貝拉唑鈉組125 12 000 23 1.92 0.605±0.021 250 12 000 19 1.58 0.607±0.028

表2 右旋雷貝拉唑鈉小鼠灌胃給藥48 h后對(duì)骨髓細(xì)胞微核率形成的影響（±s，n＝6）

表2 右旋雷貝拉唑鈉小鼠灌胃給藥48 h后對(duì)骨髓細(xì)胞微核率形成的影響（±s，n＝6）

注：①與Veh組相比，**P＜0.01；②PCE：嗜多染紅細(xì)胞；NCE：正染紅細(xì)胞

受試物 劑量（mg·kg－1）細(xì)胞數(shù) 微核數(shù) 微核率（‰） PCE／（NCE＋PCE）觀察500 12 000 18 1.50 0.601±0.024 Veh ／ 12 000 22 1.83 0.606±0.016 CP 50 12 000 262 21.83** 0.366±0.015**右旋雷貝拉唑鈉組125 12 000 21 1.75 0.620±0.030 250 12 000 19 1.58 0.605±0.030

3 結(jié)果與討論

因右旋雷貝拉唑鈉臨床為口服給藥，故采用小鼠灌胃給藥方式研究其毒性。在本試驗(yàn)條件下，右旋雷貝拉唑鈉微核試驗(yàn)結(jié)果為陰性，提示右旋雷貝拉唑鈉遺傳毒性為陰性。

在灌胃給藥24 h后，低、中、高劑量組的骨髓微核發(fā)生率分別為1.92‰、1.58‰、1.83‰，與溶媒對(duì)照組（1.75‰）相比無(wú)顯著性差異，但其與陽(yáng)性對(duì)照組之間（23.92‰）有非常顯著性差異（P＜0.01）；在灌胃給藥48 h后，低、中、高劑量組的骨髓發(fā)生率分別為1.75‰、1.58‰、1.50‰，與溶媒對(duì)照組（1.83‰）相比無(wú)顯著性差異，但其與陽(yáng)性對(duì)照組（21.83‰）之間具有非常顯著性差異，見(jiàn)表1～2。說(shuō)明右旋雷貝拉唑鈉對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞無(wú)致微核作用。PCE／（NCE＋PCE）比值是作為藥物細(xì)胞毒性的指標(biāo)之一，主要用來(lái)檢測(cè)藥物對(duì)骨髓造血功能的影響。PCE／（NCE＋PCE）比值減小，表示藥物對(duì)骨髓造血功能有抑制作用。右旋雷貝拉唑鈉給藥組與溶媒對(duì)照組，PCE／（NCE＋PCE）比值沒(méi)有顯著性差異，表明右旋雷貝拉唑鈉對(duì)骨髓細(xì)胞的造血功能沒(méi)有產(chǎn)生抑制作用。而陽(yáng)性對(duì)照組，PCE／（NCE＋PCE）比值明顯降低，表明陽(yáng)性對(duì)照藥環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠骨髓造血功能具有抑制作用。

［1］郭增光，郭洪濤.雷貝拉唑鈉腸溶片處方工藝研究［J］.藥學(xué)研究，2013，32（6）：345－347.

［2］Bodhanker SL，Jain BB，Shitole PP.The effect of rabeprazole and its isomers on aspirin and histamine－induced ulcers in rats［J］.Indian JPharmacol，2008，38（5）：357－358.

［3］袁伯俊，王治喬.新藥臨床前安全性評(píng)價(jià)與實(shí)踐［M］.北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，1997.

M icronucleus test of the right－h(huán)anded rabeprazole sodium in m ice

ZHANG Hai-ting1，QIXia2
（1.Center for New Drug Evaluation of Shandong University，Jinan 250012，China；2.The Second Hospital of Shangdong University，Jinan 250033，China）

ObjectiveTo studymousemicronucleus test of rabeprazole sodium administered orally，evaluation dextral rabeprazole sodium on chromosome damage in animals to predict their genetic toxicity.MethodsHealthy male BALB／c mice were 60，were randomly divided into low，medium and high dose groups，vehicle control group and positive control group，n＝6.Intragastric administration of rabeprazole sodium were handed 125，250，500 mg·kg－1，and vehicle control group was given sterile distilled water，dosing volume 40 mL·kg－1；Positive control group was given intraperitoneal injection of cyclophosphamide amide 50 mg·kg－1，dose volume of20mL·kg－1.After24 h and 48 h of administration the animalswere killed by cervical dislocation，took sternum bone marrow conventional producers，Giemsa staining.Microscopy double－blind read the piece，each mouse was observed 2 000 polychromatic erythrocytes（PCE），micronuclei count appeared polychromatic erythrocytes，calculated micronucleus rate，micronucleus rate expressed in parts per thousand，and calculated the total proportion of red blood cells and red cells.Results24 h after oral administration，the bonemarrow micronucleus incidence of low，medium，high－dose group were 1.92‰，1.58‰，1.83‰，respectively，compared with the vehicle control group（1.75‰），there had no significant differences.But therewere very significant differences（P＜0.01）between it and positive control group（23.92‰）.After gavage for48 h，the incidence of bonemarrow of low，medium and high dose group were 1.75‰，1.58‰，1.50‰，respectively，and vehicle control group（1.83‰）had no significant difference，but had a very significant difference（P＜0.01）compared with positive control group（21.83‰）.ConclusionUnder the experimental conditions，the result ofmicronucleus test of the right－h(huán)anded rabeprazole sodium administration orally inmice was negative.

The right－h(huán)anded rabeprazole；Mouse；Chromosomal damage

R965

：A

2095－5375（2014）07－0384－003

張海艇，男，助理研究員，研究方向：藥物安全性評(píng)價(jià)，E－mail：haitingzh＠sdu.edu.cn