李思陽

紅景天苷是紅景天中的主要有效成分，具有抗缺氧、抗疲勞、抗微波輻照、抗毒等抗性作用，還具有對神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用，具有延緩機(jī)體衰老、預(yù)防心血管疾病、抗腫瘤以及多種老年性疾病的作用[1～3]。由于目前研制出的紅景天保健食品存在食用后濃度在體內(nèi)忽高忽低、利用率低、使用頻繁等缺點(diǎn)。研究紅景天苷緩釋技術(shù)，以提高紅景天苷的生物利用率、延長作用時(shí)間、減少食用次數(shù)，這對于更好地發(fā)揮其抗疲勞、抗衰老、抗缺氧、抗微波輻射等作用具有重要的意義[4～6]。

本研究以殼聚糖和海藻酸鈉為微膠囊的囊壁，以紅景天苷藥物微粒為囊芯，通過LBL的技術(shù)對紅景天苷進(jìn)行微膠囊化，制成緩釋微膠囊，以保證其在體內(nèi)釋放的穩(wěn)定性，使其達(dá)到一種長期平穩(wěn)緩釋的效果。

1 儀器與材料

熒光光譜儀（美國Varian公司）；Zeta電位儀（美國Bic公司）；KQ-50型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；真空離心濃縮系統(tǒng)（美國SIM公司）。

紅景天苷（純度為99%）由哈爾濱峰源高科技開發(fā)有限公司提供；水為去離子水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 紅景天苷緩釋微膠囊的制備

準(zhǔn)確稱量紅景天苷粉末20 mg于2 mL 離心管中，加入1 mL 殼聚糖（0.1 mg．mL-1）溶液，吸附時(shí)間為5～10 min，使其分散均勻，4000 r．min-1離心5 min，去上清液，用去離子水洗滌沉淀3次，每次水洗后4000 r．min-1離心5min；然后加入1 mL海藻酸鈉（2 mg．mL-1）溶液，重復(fù)上述吸附和洗滌步驟，制備出總層數(shù)分別為4、7、10個(gè)雙層的微膠囊。

2.2 微膠囊Zeta電位的測量

通過Zeta電位儀監(jiān)控用兩種帶相反電荷的聚電解質(zhì)被吸附后，紅景天苷表面電位變化的情況。

在實(shí)驗(yàn)的過程中可以觀察到，未包裹的紅景天苷微粒在水中的分散性很差，經(jīng)過幾層聚電解質(zhì)的包裹以后，大大提高了其在水中的分散性，初步證明了殼聚糖和海藻酸鈉這兩種親水性的聚電解質(zhì)吸附到了紅景天苷的表面，如表1所示。

表1 紅景天苷表面交替吸附殼聚糖和海藻酸鈉的Zeta電位變化

從表1可以看出，未包裹前紅景天苷表面的電位大約是-32 mV。當(dāng)奇數(shù)層時(shí)殼聚糖被吸附到其表面時(shí)，表面電位值大約是12 mV，說明帶正電的殼聚糖覆蓋其表面；當(dāng)海藻酸鈉偶數(shù)層被吸附后，其表面電位值大約是-45 mV，說明帶負(fù)電的海藻酸鈉覆蓋其表面，這種電位的正負(fù)交替變化，證明了紅景天苷表面所帶電荷的正負(fù)交替變化，從而證實(shí)了每一層聚電解質(zhì)都被吸附到微粒的表面。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取5 mg 紅景天苷粉末置于50 mL容量瓶中，甲醇定容為濃度0.1 mg．mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液。將標(biāo)準(zhǔn)溶液分別稀釋至0.0125,0.025,0.05,0.1,0.2,0.4 μg．mL-1系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。通過熒光光譜儀在激發(fā)波長Ex=356 nm、發(fā)射波長Em=428 nm條件下，測定其吸光度。以紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度（x）為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)濃度的吸光值（y）為縱坐標(biāo)繪制濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得直線回歸方程即為標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=1628.6x+0.3014，r2=0.9996。結(jié)果表明，紅景天苷檢測濃度在0.0125～0.4 μg．mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 微膠囊包封率的測定

向制備好的總層數(shù)為4、7、10個(gè)雙層的紅景天苷微膠囊中加入1 mL 5%（V/V）的凍干保護(hù)劑甘露醇，震蕩使其充分混勻以保證紅景天苷在甘露醇中分散均勻，然后凍干。

分別向裝有凍干粉末的10 mL離心管中加入5 mL DMSO，充分溶解后10000 r．min-1離心5 min。分別取50 μL上清液，稀釋5000倍，通過熒光光譜儀測定其吸光值，并通過線性回歸方程得到溶解的紅景天苷的濃度，即微膠囊中紅景天苷的含量。按以下公式計(jì)算包封率：

包封率（%）=微膠囊中紅景天苷的質(zhì)量/加入紅景天苷的總質(zhì)量

總層數(shù)為4、7、10個(gè)雙層的紅景天苷微膠囊的平均包封率分別為78.02±0.72%、62.06±1.12%、55.24±1.95%。隨著紅景天苷微膠囊層數(shù)的增加，在洗滌沉淀的過程中，會導(dǎo)致紅景天苷的損失，最終導(dǎo)致包封率的下降。從整體上來看，這種新型紅景天苷緩釋微膠囊具有較高的包封率。

2.6 微膠囊體外釋藥特性研究

以pH=7.4的PBS緩沖液為釋放介質(zhì)，通過熒光光譜儀監(jiān)測不同層數(shù)（0、4、7、10個(gè)雙層）紅景天苷微膠囊的體外釋放性能。未被包裹的紅景天苷累積釋放率超過80%需要4 h，而囊壁層數(shù)為4、7、10個(gè)雙層的微膠囊累積釋放率超過80%的時(shí)間分別為5.5 h、6 h、8 h（圖1所示），釋放時(shí)間隨著聚電解質(zhì)層數(shù)的增加而增加，這說明聚電解質(zhì)包裹的微膠囊能夠減緩紅景天苷的釋放速度，且釋放速率隨著聚電解質(zhì)層數(shù)的增加而降低，這是隨著層數(shù)的增加囊壁變厚，囊壁的滲透性降低，導(dǎo)致紅景天苷釋放速率降低，這一結(jié)果也證明了兩種聚電解質(zhì)成功地吸附在紅景天苷表面形成緩釋微膠囊。

圖1 0、4、7、10個(gè)雙層紅景天苷微膠囊體外釋放曲線

3 討論

LBL法是近年來迅速發(fā)展起來的一種簡易、多功能的表面修飾方法[7]，LBL技術(shù)用于制備微膠囊的顯著優(yōu)越性在于能夠在納米尺度上對膠囊囊壁的組成、厚度、結(jié)構(gòu)形態(tài)、表面狀態(tài)進(jìn)行準(zhǔn)確的載控，且該方法被證實(shí)簡單有效[7]，容易制備緩釋性能良好的微膠囊制劑，因此本文采用此方法進(jìn)行研究。

殼聚糖是自然界中廣泛存在的高分子物質(zhì)，它能夠被生物體內(nèi)的溶菌酶降解生成天然的代謝物，具有無毒、能被生物體完全吸收的特點(diǎn)。海藻酸鈉是一類從褐藻類植物的細(xì)胞壁中提取出來的天然多糖。二者具有良好的生物相容性和生物降解功能，均是良好的天然微膠囊制備材料。因此，本實(shí)驗(yàn)采用二者作為微膠囊的囊壁材料。

本文采用熒光光譜儀進(jìn)行藥物釋放的研究，選擇了合適的激發(fā)和發(fā)射波長，能夠隨時(shí)監(jiān)測紅景天苷的累計(jì)釋放情況。該方法專屬性強(qiáng)、持續(xù)性好，不但簡便易行，而且能夠維持穩(wěn)定的體外環(huán)境，排除不利因素的干擾，從而提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。

本文通過LBL技術(shù)將聚電解質(zhì)殼聚糖和海藻酸鈉沉積在紅景天苷的表面，成功地制備了具有核殼結(jié)構(gòu)的微膠囊，這種微膠囊具有較高的包封率和明顯的緩釋效應(yīng)，方法簡單易行，具有一定的應(yīng)用前景。

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