張 明 張 濤 呂 卓 王 莉 西安大唐制藥集團有限公司（西安710075）

桂枝茯苓軟膠囊由桂枝、茯苓等5味中藥飲片組成，處方出自漢代醫(yī)圣張仲景《金匱要略》，具有活血化瘀，緩消癥塊的功效。它是在桂枝茯苓丸基礎(chǔ)上開發(fā)的中藥新劑型，在保證丸劑療效的基礎(chǔ)上，克服了丸劑有效成分易揮發(fā)、不穩(wěn)定、吸收慢等缺點。本試驗對其多味飲片進行定性、定量，并結(jié)合劑型特點全面的對其進行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。研究過程如下。

1 儀器與材料 1．1 儀 器 SSI高效液相色譜儀（美國SSI公司）；BP211D電子天平（德國Satorius）。

1．2 試 藥 桂枝茯苓軟膠囊（西安大唐制藥集團有限公司生產(chǎn) 批號130501、130502、130503）；桂皮醛、桃仁對照藥材、芍藥苷、丹皮酚、肉桂酸均購自中國生物制品檢定院；乙腈為色譜純，水為重蒸水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果 2．1 薄層色譜鑒別研究［1-3］

2．1．1 桂枝的薄層鑒別：取本品10粒，傾出內(nèi)容物，加乙醚50mL，低溫加熱回流1小時，濾過，藥渣備用，濾液低溫?fù)]去乙醚，殘渣加乙醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取桂皮醛對照品，加乙醇制成每1mL含1μg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液及對照品溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）—醋酸乙酯（17∶3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無干擾。

2．1．2 桃仁的薄層鑒別：取桃仁對照藥材1g，加乙醚20mL，回流1h，低溫蒸干，加乙醇1mL溶解，作為對照藥材溶液。吸取鑒別2．1．1項下的供試品溶液及上述對照藥材溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-醋酸乙酯（18∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無干擾。

2．1．3 白芍的薄層鑒別：取鑒別2．1．1項下的藥渣，加乙醇20mL，超聲15min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15mL使溶解，用以水飽和的正丁醇振搖提取2次。每次20mL，合并正丁醇液，用水洗滌2次，每次10mL，棄去水洗液，將正丁醇液至水浴上蒸干，殘渣加乙醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液及對照品溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0．2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%的香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍紫色斑點，陰性樣品無干擾。

2．2 含量測定［1，4］2．2．1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性 試 驗：色 譜 柱：Ultimate XB-C18 （4．6mm×250mm，5μm，）；流動相：乙腈-水-冰醋酸（30∶70∶0．5）；流速：1．0mL·min-1；柱溫：室溫；檢測波長：274nm。

理論塔板數(shù)按丹皮酚峰計算應(yīng)不低于2500。

2．2．2 對照品溶液的制備：精密稱取肉桂酸、丹皮酚對照品各適量，加甲醇使溶解制成每1mL含肉桂酸2μg、丹皮酚30μg的溶液，即得。

2．2．3 供試品溶液的制備：取本品內(nèi)容物約0．4g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量。超聲提取10min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得。

2．2．4 專屬性：2．2．4．1 根據(jù)工藝分別制備缺桂枝的陰性樣品，結(jié)果在肉桂酸峰處無色譜峰出現(xiàn)，說明陰性不干擾肉桂酸的測定。

2．2．4 ．2 根據(jù)工藝分別制備缺牡丹皮的陰性樣品，結(jié)果表明陰性樣品在丹皮酚峰處有一小峰。根據(jù)文獻資料白芍中也含有少量丹皮酚［4］，其含量在0．003%～0．0055%之間，而《中國藥典》2010年版一部規(guī)定牡丹皮中丹皮酚含量應(yīng)不低于1．2%，再結(jié)合實驗結(jié)果，丹皮酚干擾峰面積占制劑中丹皮酚峰面積的比例遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于1%，故此干擾峰可忽略。

2．2．5 線性：分別取肉桂酸、丹皮酚對照品適量，用甲醇分別配制成不同濃度的5份對照品溶液，按上述方法測定，以峰面積A和進樣量進行線性回歸，結(jié)果見表1。

表1 2種成分的線性方程和相關(guān)系數(shù)

2．2．6 精密度：采用重復(fù)性進行試驗，取同一批號樣品內(nèi)容物適量，按上述方法制備5份樣品測定，以外標(biāo)法分別計算肉桂酸、丹皮酚的含量，RSD分別為1．66%、2．23%。

2．2．7 溶液穩(wěn)定性：采用同一份供試品，于0、2、4、6、8h進樣，分別以肉桂酸、丹皮酚峰面積計算，RSD分別為1．2%、1．5%。

2．2．8 準(zhǔn)確度：采用3個不同濃度的9份樣品測定加樣回收率，結(jié)果平均加樣回收率分別為98．6%、97．3%；RSD為分別1．2%、1．4%。

表2 桂枝茯苓軟膠囊2種成分測定結(jié)果

2．2．9 樣品測定：按上述含量測定方法，取3批桂枝茯苓軟膠囊進行測定，結(jié)果見表2。

3 討 論 3．1 桂枝茯苓軟膠囊是中藥復(fù)方制劑，成分多，影響鑒別的因素多，通過參考文獻和進行試驗，對制劑中的桂枝、白芍、桃仁進行薄層色譜定性鑒別，得到了理想的鑒別條件。

3．2 本實驗在含量測定中考察了流動相的選擇，在最后選用條件下，樣品中肉桂酸與丹皮酚可以同時檢出，并且其它組分色譜峰可達到基線分離，肉桂酸和丹皮酚與其相鄰色譜峰的分離度均大于1．5。這種方法既達到了同時控制本品的多項含量，同時又節(jié)約了時間和溶媒。

3．3 根據(jù)三批中試樣品測定結(jié)果，考慮到藥材來源以及制劑生產(chǎn)、貯藏等因素，暫定本品每粒含肉桂酸（C9H8O2）不得少于0．1mg，丹皮酚（C9H10O3）不得少于1．8mg。

3．4 結(jié)果顯示所建立的定性定量方法科學(xué)、簡單、快速、全面、精確度高，可作為桂枝茯苓軟膠囊的質(zhì)量控制。

［1］ 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典［S］．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010．

［2］ 徐勝龍，王 晉，李 靜，等．紅芪膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］．陜西中醫(yī)，2013，34（8）：1065-1062．

［3］ 張 星，陸兔林，毛春芹，等．補陽還五湯質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］．中成藥，2013，35（3）：529-533．

［4］ 胡世林，劉 岱，楊立新，等．不同產(chǎn)地白芍中芍藥甙和丹皮酚的含量測定及比較［J］．中國中藥雜志，1994，19（6）：328-330．