王興海 劉 力 王 娟 金 媛 陜西中醫(yī)學(xué)院制藥廠 （咸陽712083）

固腸止瀉丸是陜西中醫(yī)學(xué)院制藥廠生產(chǎn)的品種，批準(zhǔn)文號(hào)為國藥準(zhǔn)字Z61020796。由烏梅肉、黃連、干姜、木香、延胡索、罌粟殼六味藥組成，原標(biāo)準(zhǔn)（部頒標(biāo)

準(zhǔn)WS3-B-3870-98）中僅有顯微鑒別和黃連薄層鑒別。為全面有效控制其質(zhì)量，在原標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，新增處方中木香、延胡索、干姜、罌粟殼、烏梅的TLC檢查，并制定了HPLC法測定黃連中鹽酸小檗堿含量的方法。

1 儀器與試藥 1．1 儀 器 高效液相色譜儀：島津LC-10ATvp，SPD-10Avp；KQ-250型超聲波清洗儀：功率250，頻率40kHz，昆山市超聲波清洗儀有限公司；TU-1800PC型紫外可見分光光度計(jì)，北京普析通用分析儀器有限責(zé)任公司。

1．2 試 藥 鹽酸小檗堿對(duì)照品（批號(hào)110713-200808，供含量測定用）；延胡索對(duì)照藥材（批號(hào)120928-200704）；延胡索乙素對(duì)照品（批號(hào)0726-9906，供含量測定用）；木香對(duì)照藥材：（批號(hào)171814-200806）罌粟殼對(duì)照藥材（批號(hào)172514-200906）；鹽酸罌粟堿對(duì)照品（批號(hào)171214-200806，供含量測定用）；磷酸可待因?qū)φ掌罚ㄅ?hào)171203-200803，供含量測定用）；嗎啡對(duì)照品（批號(hào)171201-200521，供含量測定用）；干姜對(duì)照藥材（批號(hào)120942-200606）；烏梅對(duì)照藥材（批號(hào)121208-200602）熊果酸對(duì)照品（批號(hào)110742-200716，供含量測定用）。以上標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均購自中國藥品生物制品檢定所。固腸止瀉丸原料及成品由陜西中醫(yī)學(xué)院制藥廠提供。乙腈為色譜純，水為超純水，硅膠G和其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果 2．1 薄層色譜鑒別 2．1．1延胡索［1］：取本品及缺延胡索陰性對(duì)照樣品研細(xì)后的粉末10g、延胡索對(duì)照藥材、延胡索乙素對(duì)照品，參照中國藥典2010年版一部延胡索【鑒別】（2）項(xiàng)下的方法，分別制成供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液、延胡索對(duì)照藥材溶液、延胡索乙素對(duì)照品溶液，進(jìn)行薄層鑒別。供試品色譜與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性空白對(duì)照無干擾。

2．1．2 木香［2-3］：取本品及缺木香陰性對(duì)照樣品研細(xì)后的粉末各3g、木香對(duì)照藥材0．3g，分別加乙醚15mL，置水浴上加熱回流30min，濾過，濾液低溫?fù)]干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL使溶解，制成供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液和對(duì)照藥材溶液。吸取上述三種溶液各2～3μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮（10：3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性空白對(duì)照無干擾。

2．1．3 罌粟殼［1，4］：取本品及缺罌粟殼陰性對(duì)照樣品研細(xì)后的粉末各15g、罌粟殼對(duì)照藥材、嗎啡、磷酸可待因和鹽酸罌粟堿對(duì)照品，參照中國藥典2010年版一部罌粟殼【鑒別】（3）項(xiàng)下的方法，分別制成供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液、罌粟殼對(duì)照藥材溶液、嗎啡、磷酸可待因和鹽酸罌粟堿對(duì)照品溶液，進(jìn)行薄層鑒別。供試品色譜與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性空白對(duì)照無干擾。

2．1．4 干姜［2，5］：取本品及缺干姜陰性對(duì)照樣品研細(xì)后的粉末各10g、干姜對(duì)照藥材，參照中國藥典2005年版一部木香【鑒別】（2）項(xiàng)下的方法，分別制成供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液、對(duì)照藥材溶液，進(jìn)行薄層鑒別。供試品色譜與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性空白對(duì)照無干擾。

2．1．5 烏梅［2］：取本品及缺烏梅陰性對(duì)照樣品研細(xì)后的粉末各10g、烏梅對(duì)照藥材、熊果酸對(duì)照品，參照中國藥典2005年版一部烏梅【鑒別】（2）項(xiàng)下的方法，分別制成供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液、對(duì)照藥材溶液和對(duì)照品溶液，進(jìn)行薄層鑒別。供試品色譜與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性空白對(duì)照無干擾。

2．2 鹽酸小檗堿含量測定［1］2．2．1色譜條件：色譜柱：C18色譜柱；流動(dòng)相：0．05mol／L三乙胺（用磷酸調(diào)pH3．0）-乙腈（70：30）為流動(dòng)相；檢測波長為265nm；柱溫：室溫26℃；流量1．0mL／min；理論塔板數(shù)以鹽酸小檗堿峰計(jì)，不得低于5500。

2．2．2 對(duì)照品溶液制備：精密稱取干燥（105℃干燥4h）的鹽酸小檗堿對(duì)照品1．24mg，置一10mL量瓶中，加甲醇使溶解，并加至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液6號(hào)，精密吸取對(duì)照品溶液6 1mL 5份，分別置2mL、5mL、10mL、25mL、和50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別作為對(duì)照品溶液5～1號(hào)。

2．2．3 供試品溶液制備：精密稱取本品粉末（過3號(hào)篩）0．1g，置50mL量瓶中，加入流動(dòng)相40mL，超聲處理40min，取出，放涼，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液。取續(xù)濾液，以0．45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2．2．4 檢測波長的確定：精密吸取3號(hào)對(duì)照品溶液作為供試品溶液，以流動(dòng)相為空白，在波長200～400nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在228．5nm、264．5nm 和347．0nm波長處均有最大吸收，以264．5nm波長處峰形尖銳，參照中國藥典2005年版一部黃柏項(xiàng)下，以265nm為檢測波長。

2．2．5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的考察：精密吸取1～6號(hào)對(duì)照品溶液各10μL進(jìn)樣2次，以2．2．1項(xiàng)下色譜條件測定峰面積。以峰面積平均值為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為：Y=1997934X＋10234，γ=0．9998，鹽酸小檗堿在0．0248～1．240μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線考察結(jié)果

2．2．6 精密度考察：精密吸取3、4、5號(hào)對(duì)照品10μL，各進(jìn)樣5次，測得鹽酸小檗堿峰面積的RSD分別為1．52、1．16、1．37，表明方法精密度良好。

表2 精密度考察結(jié)果

2．2．7 重復(fù)性考察：精密稱取試1號(hào)樣品、試2號(hào)樣品和110805號(hào)樣品各0．1g，照2．2．3項(xiàng)下的方法制成供試品溶液。精密吸取供試品溶液和線性關(guān)系考察項(xiàng)下3、4、5號(hào)對(duì)照品溶液各10μL，注入 HPLC儀，照線性考察項(xiàng)下條件測定，計(jì)算，結(jié)果高中低濃度樣品的 RSD分別為0．021%、0．053%、0．119%，表明方法重復(fù)性良好。

表3 重復(fù)性考察結(jié)果

2．2．8 穩(wěn)定性考察：分別于0、1、2、4、8、12、20和24h精密吸取重復(fù)性考察項(xiàng)下同一樣品溶液10uL進(jìn)樣，按上述條件測定峰面積，計(jì)算變異系數(shù)得RSD=0．74%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2．2．9 干擾試驗(yàn)：取空白樣品80mg，照2．2．3項(xiàng)下的方法制成陰性對(duì)照品溶液。精密吸取陰性對(duì)照品溶液10μL，注入 HPLC儀，結(jié)果黃連空白溶液色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，無對(duì)應(yīng)的色譜峰。

圖1 HPLC圖 A：對(duì)照品；B：供試品；C：陰性對(duì)照品

2．2．10 加樣回收考察：精密稱取試2號(hào)樣品、110805批號(hào)樣品0．05g各3份，分別置50mL具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液（取4．92mg，置2mL量瓶中，加流動(dòng)相使溶解，并加至刻度，搖勻）各0．1mL和0．2mL，揮干；另取試1號(hào)樣品3份0．05g，分別置50mL具塞錐形瓶，精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照品1．3mg。按2．2．3項(xiàng)下的方法制成供試品溶液。精密吸取供試品溶液和線性考察項(xiàng)下3、4、5號(hào)對(duì)照品溶液各10μL，注入HPLC儀，照線性考察項(xiàng)下條件測定，結(jié)果平均回收率為98．90%，RSD=1．38%。

表4 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2．2．11 黃連藥材轉(zhuǎn)移率測定：精密稱取黃連粉末（過3號(hào)篩）0．2g，按2．2．3項(xiàng)下的方法制成供試品溶液。精密吸取供試品溶液和線性考察項(xiàng)下3號(hào)對(duì)照品溶液各10μL，注入HPLC儀，照線性考察項(xiàng)下條件測定，并計(jì)算樣品轉(zhuǎn)移率，結(jié)果平均轉(zhuǎn)移率為90．35%，RSD=3．93%。

2．2．12 樣品測定及限度確定：精密稱取樣品，按2．2．3項(xiàng)下的方法制成供試品溶液。精密吸取供試品溶液和線性考察項(xiàng)下4號(hào)對(duì)照品溶液各10μL，注入HPLC儀，照線性考察項(xiàng)下條件測定，結(jié)果10批樣品含量為11．04～13．07mg／g。

表5 鹽酸小檗堿轉(zhuǎn)移率測定結(jié)果

表6 樣品含量測定結(jié)果

中國藥典2010年版一部規(guī)定黃連含鹽酸小檗堿按干燥品計(jì)算應(yīng)不低于5．5%，本品每1000g含黃連181．8g，10批樣品的轉(zhuǎn)移率為85．32%～96．39%，轉(zhuǎn)移率按85%計(jì)算，本品含鹽酸小蘗堿應(yīng)不低于0．85%，考慮到藥材的含水量，暫定本品每1g含鹽酸小檗堿應(yīng)不低于7mg。

3 討 論 本文在固腸止瀉丸原標(biāo)準(zhǔn)（部頒標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-3870-98）的基礎(chǔ)上，新增了處方中木香、延胡索、干姜、罌粟殼、烏梅的薄層鑒別方法；取消黃連薄層鑒別，采用HPIC法測定黃連中鹽酸小檗堿的含量，提高了其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，確保產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可控。

［1］ 國家藥典委員會(huì)．中國藥典2010年版［S］．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：73，130，285-287，346．

［2］ 國家藥典委員會(huì)．中國藥典2005年版［S］．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：12，42．

［3］ 陳金文，王 娟．固腸止瀉丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究［J］．陜西中醫(yī)，2008，29（8）：1070-1071．

［4］ 梁憲揚(yáng)，尹 萌，強(qiáng) 力．枇杷露中罌粟殼的薄層色譜鑒別法［J］．江蘇藥學(xué)與臨床研究，2001，1：28-29．

［5］ 劉艷琴，張仁生，郁 凌．干姜揮發(fā)油的薄層色譜所見［J］．遼寧中醫(yī)雜志，1993，4：42．